3种海参的主要活性成分和免疫调节作用的比较研究

采用化学分析和免疫学评价方法，分析比较了美国肉参（Isostichopus badionotus）、墨西哥刺参（Isostichopus fuscus）和冰岛刺参（Cucumaria frondosa）的主要活性成分及其对小鼠免疫功能的调节作用。结果表明，3种海参体壁中以冰岛刺参的皂苷含量最高，墨西哥刺参的黏多糖含量最高。冰岛刺参体壁总氨基酸、药效氨基酸和鲜味氨基酸总量均为最高。对于正常小鼠，3种海参均能提高小鼠胸腺／体质量比值（美国肉参，P〈0．05）、增加足跖厚度（P〈0．05或P〈0．01）和促进巨噬细胞对血液中碳粒的吞噬指数（P〈0．05或P〈0．01）。对于免疫机能低下模型小鼠，3种海参均能显著提高小鼠胸腺／体质量比值（P〈0．05或P〈0．01）、促进小鼠脾淋巴细胞的增殖和转化（P〈0．05或P〈0．01）、提高小鼠血清溶血素含量（P〈0．05或P〈0．01）和巨噬细胞对血液中碳粒的吞噬指数（P〈0．05或P〈0．01）。提示3种海参均具有显著的免疫调节作用。对于正常小鼠，主要以促进细胞免疫和非特异性免疫途径为主。对于免疫机能低下小鼠，3种海参均能提高机体的体液免疫、细胞免疫和非特异性免疫功能。其中，冰岛刺参在促进体液免疫和非特异性免疫方面的作用更突出，可能与其含有较高含量的皂苷和免疫活性氨基酸有关。     

中国对虾血细胞吞噬功能的研究↑（*）

本研究建立了检测中国对虾血细胞吞噬功能的橙检测法。该检测法可同时直观地观察中国对虾血细胞对金黄色葡萄球菌的吞噬和杀伤情况：一项试验可同时获得吞噬和杀伤百分率，吞噬和杀伤指数四个指标。用本法研究四种免疫增强剂对时虾血细胞吞噬功能的作用，结果表明，他们均可提高血细胞对金葡菌的吞噬活力以及血淋巴中的溶菌活力和酚氧化酶活力，但经统计学分析，结合攻毒试验的结果，浙农Ⅰ号和湖州Ⅰ号的免疫效果优于湖州Ⅱ号和湖州Ⅲ号。     

虫草菌粉对罗氏沼虾免疫功能的影响

罗氏沼虾饵料中添加0．5％虫草菌丝，罗氏沼虾血细胞吞噬百分比和吞噬指数、血清溶菌酶活力及酚氧化酶活力均显著提高。经嗜水气单胞菌攻毒后，试验组的免疫保护率也明显提高。试验证明，口服虫草菌粉可显著地提高罗氏沼虾的免疫功能，有效地预防嗜水气单胞菌的感染。     

鱿鱼缠卵腺糖蛋白MGS降血脂及非特异性免疫功能研究

为研究鱿鱼缠卵腺糖蛋白MGS的降血脂及免疫活性，本文先根据体外测定胰脂肪酶活力抑制率的结果初步判定MGS的降血脂效果，而后通过建立高血脂模型小鼠进一步研究MGS的降血脂活性，同时采用动物实验研究MGS的免疫活性。结果表明， MGS具有抑制胰脂肪酶活性的作用；能够显著降低小鼠的TC和LDL-C的含量，显著增加HDL-C的含量( P<0．05)，不能显著降低TG的含量，在降低血脂的同时，也可在一定程度上控制高脂小鼠体重的增加；实验组小鼠的廓清指数和吞噬指数与对照组的在统计学上无显著性差异(P>0．05)。     

灭活菌苗免疫的南方鲇外周血液细胞免疫指标的变化

以嗜水气单胞菌(Aeromonashydrophila)灭活菌苗为免疫原,以平均体重为86 20g人工饲养的健康南方(Silu rusmeridionalis)为实验对象,通过腹腔注射免疫原(浓度为1 0×108/mL)免疫,剂量为0 2mL/尾,并分别在免疫后的第1、2、4、7、14、21、28天对实验鱼尾静脉采血,进行血液生理指标和血液中吞噬细胞活性的测定。结果显示,嗜水气单胞菌灭活菌苗(FKC)可以增加南方外周血液白细胞数量并引起不同种类白细胞组成比例的变化,提高吞噬细胞的吞噬活性。在免疫后第1、2、4、7、14、21、28天,南方外周血中白细胞数量呈明显上升趋势,其中嗜中性粒细胞、单核细胞、淋巴细胞变化趋势更为明显;而且吞噬细胞活性大为提高,吞噬百分比较对照组平均升高了17 66%,吞噬指数比对照组平均升高了1 16,在免疫后第4天吞噬百分比和吞噬指数均达到最高值,吞噬百分比为48 40%,吞噬指数为4 82;免疫后第21天,吞噬百分比和吞噬指数开始下降,但仍高于对照组。由此表明,使用疫苗后,鱼类非特异细胞免疫在初期(尤其是在第2～7天)明显增强,这是鱼用疫苗在免疫早期保护作用的主要机制之一。     

溶藻胶弧菌脂多糖对大菱鲆白细胞吞噬活性的影响

针对溶藻胶弧菌脂多糖在增强大菱鲆非特异性免疫功能、提高机体抗病能力方面的作用机理,开展了研究工作。实验中以浓度为2．4mg／ml 溶藻胶弧菌脂多糖,通过口服和注射的方式接种平均体重47．2g 大菱鲆幼鱼,接种后第7、15、 30天,分别采血根据血细胞吞噬作用检测结果计算吞噬百分比和吞噬指数。结果显示,溶藻胶弧菌脂多糖对白细胞吞噬活性有明显促进作用,在增强白细胞的吞噬能力方面作用不显著。     

中国对虾血红细胞吞噬功能的研究

本研究建立了检测对虾血细胞吞噬的功能吖啶橙检测法，该检测同时直观地中国对虾血细胞对金黄色葡萄球菌的吞噬和杀伤情况；一项试验可同时获得吞噬和杀伤百分率，吞噬和杀伤指数四个指标。用本法研究四种免疫增强剂对对，血细胞吞功能的作用，结果表明，均呆提高血细胞对金葡菌的吞噬活力以及血淋巴中的溶菌活力和酚氧化酶活力，但经统计学分析，结合攻毒试验的结果，浙农Ｉ号和湖州Ｉ号的免疫效果优于湖州Ⅱ号和湖州Ⅲ号。     

复方中草药对青虾免疫功能的影响

将大黄、黄芩、党参、板蓝根等十余味中草药粉碎过筛后制成复方添加剂按1%、2%、3%的比例添加于基础饲料中制成颗粒药饵投喂青虾,测定青虾相关免疫指标的变化。结果表明,青虾血细胞吞噬百分比和吞噬指数、血清溶菌酶活力均显著提高。经嗜水气单胞菌攻毒后,各试验组的免疫保护率也明显提高。在各试验组中以2%的添加量的效果最好。试验证明,该添加剂可显著地提高青虾的免疫功能,能有效地预防嗜水气单胞菌的感染。     

灭活菌苗免疫的中华倒刺鲃外周血免疫指标的变化

以温和气单胞菌灭活菌苗为免疫原,平均体重(100±25)g的健康中华倒刺鲃为实验对象,免疫组腹腔注射0.2mL浓度为1.0×108CFU/mL的免疫原,对照组注射等量灭菌生理盐水,分别在单次注射0、1、2、4、7、14、21、28、35d后随机从两组各取6尾实验鱼,尾静脉采血,测定外周血的血细胞数量、白细胞分类计数、吞噬活性、抗体效价和蛋白质含量等免疫指标的变化,第35天活菌攻毒。结果表明:温和气单胞菌灭活菌苗(F-AS)可诱导中华倒刺鲃红细胞和白细胞数量增加,并引起各种白细胞分类百分比变化,提高吞噬活性和抗体效价,血清中总蛋白及球蛋白含量增加,红细胞也具有免疫功能,灭活茵苗的相对免疫保护力达65.21%。免疫早期(第1周)主要是红细胞、单核细胞和中性粒细胞数量明显增加,吞噬细胞的吞噬活性迅速提高,吞噬百分比和吞噬指数第4天达峰值;随后则是淋巴细胞大量增殖,第21天淋巴细胞、抗体效价及球蛋白达峰值。可见灭活菌苗通过促进中华倒刺鲃血细胞增殖、提高吞噬细胞的吞噬活性、产生特异性抗体等方式提高免疫保护力;免疫早期非特异性细胞免疫起重要作用,之后特异性免疫起主要作用。     

皱纹盘鲍性腺多糖体外免疫活性和抗凝血活性的研究

采用MTT法检测皱纹盘鲍性腺多糖对淋巴细胞增殖活性的影响的作用;采用中性红吞噬法检测对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响;用凝集法测定活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)和凝血酶时间(TT).试验结果表明,皱纹盘鲍性腺粗多糖(CAGP)和性腺多糖组分1(AGP-1)对小鼠淋巴细胞增殖具有促进作用;对小鼠巨噬细胞的吞噬功能也具有促进作用;AGP-1能极显著延长PT、APTT和TT,且呈剂量信赖性.CAGP和AGP-1对免疫细胞的增殖和功能具有一定的促进作用;AGP-1具有明显的抗凝血效果.     

高剂量钼对鸡免疫指标的作用

通过对鸡饲喂含钼饲料(钼含量:500mg/kg),研究高剂量对其免疫器官重量、生长指数、组织学变化及外周血T淋巴细胞的ANAE阳性率的影响。结果表明:试验组鸡脾脏充血、出血、萎缩;法氏囊肿胀、萎缩。3周后免疫器官的重量、生长指数、外周血T淋巴细胞的ANAE阳性率低于对照组,5周后差异显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)。说明500mg/kg饲料的钼可以抑制鸡免疫器官的生长发育及外周血T淋巴细胞的活化,造成免疫器官的病理损伤,导致免疫功能下降。     

The in vitro effect of CpG-ODNs on the innate immune response of common carp, Cyprinus carpio L.

Unmethylated CpG dinucleotides within bacterial DNA or synthetic oligodeoxynucleotides (ODNs) can activate immune cells. A panel of synthetic oligodeoxynucleotides was evaluated in vitro for their ability to enhance the innate immune response of common carp (Cyprinus carpio L.). In vitro addition of CpG-ODNs enhanced the phagocytic activity and superoxide anion production of stimulated kidney phagocytes. The CpG-ODNs also induced lymphocyte proliferation in the fish kidney cells. The ODNs containing multiple CpGs generally resulted in greater stimulatory capacity, although CpGs located at the terminus of an ODN were ineffective. These results indicated that CpG-ODNs enhance the innate immune response of common carp.     

一种新型抗菌肽APNT-6的溶血性和急性毒性评价

研究了一种以抗菌脂肽类物质surfactin、iturin和fengycin为主要成分的新型抗菌肽APNT-6的体外溶血和小鼠口服急性毒性,为食品应用安全性提供初步评估。将抗菌肽作100倍稀释置于兔血琼脂平板上的牛津杯中观察溶血情况;结果显示,经100倍稀释的抗菌肽在体外对血细胞有较强的溶血毒性。将60只小鼠按雌雄各半随机分成6组,分别以8、40、200、1000、5000mg每千克体重剂量的抗菌肽对小鼠进行一次性灌胃,7d内观察小鼠毒性体征并测定相关指标。结果表明,当小鼠被给予该抗菌肽5000mg/kg剂量时,观察7d无任何毒性反应,说明高剂量的抗菌肽经口服在小鼠体内不能达到有效溶血浓度,其口服半数致死剂量(LD50)大于5000mg/kg小鼠体质量,急性毒性评级属实际无毒级。根据以上结果可知,新型抗菌肽APNT-6在体外有溶血毒性但经口服对小鼠没有急性毒性作用。     

嗜水气单胞菌疫苗免疫效果研究

选取对鲤鱼毒力强的嗜水气单胞菌菌株制成灭活疫苗,研究疫苗的免疫保护效应.采用甲醛灭活制备疫苗,分别对鲤鱼进行注射和浸泡试验,测定白细胞吞噬活性、淋巴细胞转化能力、血清、皮肤黏液的抗体效价及活菌攻毒后的免疫保护率.结果表明,受免鱼各项指标均明显高于对照组,注射组免疫保护率达90%,其中浸泡组各项略低于注射组.嗜水气单胞菌灭活疫苗对鲤鱼有显著免疫保护效应,可作为预防细菌性败血症感染的疫苗.     

壳聚糖和益生菌对暗纹东方鲀抗病力和免疫功能的影响

为了解壳聚糖和益生菌刺激和增强免疫应答的可能作用,本试验在基础饲料中添加0.2%、0.5%、1.0%的壳聚糖,0.1%、0.2%、0.4%的益生菌,甘露聚糖与益生菌混合物,壳聚糖与益生菌的混合物,在室内水泥池中喂养暗纹东方鲀(3.15±0.05)g 2个月,根据抗菌活力筛选出免疫增强饲料组(0.2%壳聚糖,0.1%、益生菌,甘露聚糖与益生菌混合物,壳聚糖与益生菌混合物)测定免疫功能。结果表明,甘露聚糖与益生菌混合物仅提高头肾T淋巴细胞转化,壳聚糖与益生菌混合物显著增强头肾T、B淋巴细胞转化和脾脏B淋巴细胞体外培养时分泌的IgM。筛选出的四种免疫增强饲料均能使头肾B淋巴细胞体外培养时分泌的IgM显著增加。无论是脾脏B淋巴细胞还是头肾B淋巴细胞,体外培养时所分泌的IFN-α都不同程度地受抑制。     

Immunomodulatory effect of Guavarine®, aqueous guava leaf extract,on ornamental Koi carp Cyprinus carpio var. koi L. 1758

The leaves and bark of guava (Psidium guajava) have a long history of medicinal uses. The immunomodulatory effect of Guavarine®, an aqueous guava leaf extract, was investigated on Cyprinus carpio var. koi L. The fish (8.33 ± 1.02 g) were injected with guava leaf extracts (10 or 100 µg/fish) intraperitoneally, and the innate immune parameters were monitored for 28 days. In fish injected with guava leaf extracts, the lymphocyte proliferation, nitric oxide production, and respiratory burst activity increased until the 14th day and decreased thereafter. The results indicated an elevation in the innate immune status of fish, possibly due to the presence of flavonoids in the leaf extracts.     

鲤鱼鱼鳞胶原蛋白ASC与PSC的比较

以鲤鱼鱼鳞为原料,研究了酸法和酶法提取的鱼鳞胶原蛋白ASC和PSC的异同.经过SDS-凝胶电泳和氨基酸分析可以看出,2种蛋白在分子构型、氨基酸组成等方面的差异并不明显,经过蛋白酶K有限酶解后的图谱证明了这一点.但从差热分析,以及蛋白质受热的分解变化来看,二者之间在热稳定性方面存在一定的差异.推测差距产生的原因与蛋白质制备过程中,胃蛋白酶的作用有关,胶原蛋白两端的非螺旋区域受到酶的作用而分解,非螺旋区域对三螺旋的稳定性起着重要作用,非螺旋区域的分解大大降低了PSC对热的耐受性.     

Antioxidant and immune defences of rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) offered plant oils differing in fatty acid profiles from early stages

The antioxidant defence and immune response of rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) that had received plant oils, rich in either n‐3 polyunsaturated fatty acids (PUFA; linseed oil) or n‐6 PUFA (safflower oil) was evaluated upon antigen exposure. The fish employed in this study had been offered the diets for 18 months from the first feeding. Rainbow trout from each group were injected intraperitoneally with formalin‐killed bacteria (Aeromonas hydrophila) or were sham‐injected and observations were made 24 h later. Though the fish fed safflower oil seemed to be under relatively greater oxidative stress, the antioxidant defences (superoxide dismutase, catalase, glutathione peroxidase) were as effective as in those fed linseed oil. The humoral (alternate complement activity and lysozyme activity) and cellular (phagocytic activity and lymphocyte proliferation) immune responses were not significantly affected by the oil offered. With the exception of reactive oxygen production that was significantly greater in the linseed oil fed fish, both groups did not differ greatly in their immune responses after antigen exposure. Thus, fish fed safflower oil that was deficient in n‐3 PUFA was able to sustain most of the critical responses similar to those fed linseed oil suggesting that plant oils of both fatty acid categories were effective for this fresh water fish.     

Immuomodulatory effect of dietary turmeric supplementation on Nile tilapia (Oreochromis niloticus)

This study aimed to assess the immunomodulatory effect of dietary turmeric (TUM) in Oreochromis niloticus juveniles. A total of 240 Oreochromis niloticus fingerlings were divided into four equal groups (n = 60), three replicates (n = 20) for each: control and TUM‐treated groups at 2 (T1), 4 (T2) and 8 (T3) g kg^?1 diets for 8 weeks. Body weight gain, leucocytes counts, plasma levels of interleukin 2 (IL‐2), interleukin 4 (IL‐4), lymphocyte proliferation index to pokeweed mitogen (PWM), nitric oxide (NO) and lysozyme enzyme activities were measured. Histopathology of spleen was performed. TUM at 2 g kg^?1 significantly (p < .05) improved weight gain, leucocytes, NO and lysozyme activity than control and other treatment groups. IL‐2 level was significantly lower (p < .05) in T2 and T3 than in control and T1, while IL‐4 and lymphocyte proliferation index were significantly (p < .05) elevated in T3 than control, T1 and T2. Spleens of T2 showed improvement in white pulp, while spleen of T3 and T4 revealed white pulp depletion. In conclusion, TUM supplementation exerted immunomodulatory effect in Oreochromis niloticus through manipulation of lymphocyte count, IL‐2, IL‐4 and antibacterial enzymatic activity (NO and lysozyme) that resulted in higher weight gain. Increasing TUM supplementation of fish diets beyond 2 g kg^?1 was not beneficial.     

瓦氏黄颡鱼头肾组织学观察与先天性免疫屏障研究

为探明瓦氏黄颡鱼(Pelteobagrus vachelli)头肾组织结构和先天性免疫屏障,该研究用苏木素-伊红(HE)染色法和改良James染色法对瓦氏黄颡鱼头肾的显微结构进行了观察,并使用台盼蓝活体染色法对头肾免疫屏障部位进行了定位。结果显示,瓦氏黄颡鱼头肾由被膜、淋巴细胞聚集区、粒细胞聚集区、前肾间组织、网状纤维和胶原纤维组成,胶原纤维仅在血管外周可见;台盼蓝主要分布于血窦周围的内皮细胞和一些游离的巨噬细胞中,且随时间延长呈递增趋势。研究表明血窦周围的内皮细胞和巨噬细胞组成了瓦氏黄颡鱼的头肾先天性免疫屏障。