鲤春病毒血症病毒焦磷酸测序检测技术的建立

通过收集鲤春病毒血症病毒基因序列,设计了鲤春病毒血症病毒最为保守的指纹序列,以及测序引物,建立了鲤春病毒血症病毒焦磷酸测序检测方法。对所构建的鲤春病毒血症病毒焦磷酸检测方法进行特异性试验和灵敏度检测,试验结果表明所建立的方法特异性好,在8种鱼类病毒中能够特异性检测出目的病毒,检测方法灵敏度高,最低检出核酸量为10pg/μL。对建立的焦磷酸测序检测方法进行了实际应用研究,选取国内采集与进口的鱼类样本共计80批次进行鲤春病毒血症病毒检测。结果显示,焦磷酸测序检测方法可以有效的检出常规RT-PCR不能检出的假阴性样本和弱阳性样本,该方法的灵敏度和特异性可以满足水生动物疫病检测的需要。     

鲤春病毒血症病毒检测方法研究进展

<正>鲤春病毒血症病毒(SVCV)会使鲤科鱼暴发鲤春病毒血症。该病传染性极强、死亡率极高,发现病鱼就要对其进行及时识别和扑杀(Ahne W等,2002)。鲤春病毒血症被世界动物卫生组织(OIE)列为一旦发现则必须向有关部门申报的疾病,被我国列为二类动物疫病(孙翰昌等,2020)。2018年国家市场监督管理总局发布的鲤春病毒血症诊断规程,规定了鲤春病毒血症的采样、     

鲤春病毒血症病毒(SVCV)的研究进展

鲤春病毒血症病毒（SVCV）是一种能够引起鲤科鱼类急性传染性病毒病-鲤春病毒血症（SVC）的病原，一旦暴发会造成巨大的经济损失。该病主要在欧洲的鲤鱼养殖中广泛传播，主要症状为体内出血，腹膜炎及腹水。SVCV具有囊膜，暂时列为弹状病毒科水泡性病毒属。病毒基因组为线性单股不分段的负链RNA，长11019个核苷酸，主要包含5个基因，分别编码核蛋白N、磷蛋白P、基质蛋白M、糖蛋白G和RNA聚合酶L。日前，中国出入境检验检疫检测SVCV的行业标准是逆转录PCR法。本研究从病毒的生物学特征，感染的临床症状及流行特点，病毒基因组及其多肽特征，病毒的分类地位以及检测技术等方面对国内外研究的现状作一综述，以期为研究者提供理论参考。     

鲤鱼春季病毒血症的诊断与防治

鲤鱼春季病毒血症（SpringViremiaofCarP：SVC）是流行于欧洲各国、严重危害鲤鱼养殖业的病毒病。病原为弹状病毒科狂犬病毒属的鲤弹状病毒（RhabdovirusCarpio）。该病毒有鲤春弹状病毒（SVCV）和梭子鱼苗弹状病毒（PFRV）两个血清型。近年来，在我国、日本等亚洲国家养殖的鲤鱼也出现了类似该病的症状，因而引起了大家的广泛关注。本文将介绍诊断和防治鲤鱼春季病毒血症的方法。1971年欧洲人Fijan等首先报道了鲤鱼春季病毒血症。SVC主要为腹水型，部分毒株可引起鲤鱼的嫖发炎（Swimbladderinflammation：SBI），称为鲤嫖炎型。…     

渭河滩疑似鲤春病毒血症的处理方法

正2016年陕西省继续参加全国水产技术推广总站组织的鱼类疫病监测工作,监测疫病为鲤春病毒血症和传染性造血器官坏死病,全省抽样30个,其中鲤鱼20个、虹鳟10个,每个样品随机采集鱼种150尾。将样品空运至有资质的检测机构进行检测,5月初收到检测报告,其中一个样品检测出鲤春病毒血症为阳性。我中心立即将检测结果上报省渔业局,省渔业局启动应急预案,组织有关部门对鲤春病毒血     

鲤春病毒血症病毒G蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备

利用PCR方法扩增鲤春病毒血症病毒糖蛋白G的部分基因序列,即全基因组序列上第3 094~4 170位的碱基,并将其克隆至表达载体pGEX-KG中,构建重组质粒SVCV-g-KG。将重组质粒转化感受态细胞BL21,经IPTG诱导后,表达了与预期大小相符的约66 kDa的融合蛋白,可溶性分析表明该蛋白主要表达在包涵体中。将纯化的融合蛋白免疫日本大耳白兔,制备多克隆抗体。酶联免疫吸附试验检测其抗体效价可达1∶256 000,间接免疫荧光试验和免疫印迹试验证明其与病毒结合活性良好,特异性高;病毒孵育试验结果表明该多克隆抗体具备中和活性,能够有效阻断鲤春病毒血症病毒对细胞的感染。     

鲤鱼春季病毒血症的诊断与防治方法

鲤鱼春季病毒血症(Spring Viremia of Carp:SVC)是流行于欧洲各国,严重危害鲤鱼养殖业的病毒病。病原为弹状病毒科狂犬病毒属的鲤弹状病毒(Rhabdovirus Carpio)。该病毒有鲤春弹状病毒(SVCV)和棱子鱼苗弹状病毒(PFRV)两个血清型。近年来,日本等亚洲国家养殖的鲤鱼也出现了类似该病的症状,     

养殖鲤的几种病毒病及其防控方法(上)

正鲤是我国的主要淡水养殖鱼类之一,在养殖过程中经常受到各种病害的困扰,尤其是几种致病性病毒引起的疾病,往往给养殖业造成极其重大的经济损失。现简要介绍养殖鲤的病毒病及其防控方法。一、鲤春病毒血症(SVC)这种疾病由属于弹状病毒的SVC病毒感染引起。在欧洲、俄罗斯、中东、美国及中国等地均有发生。     

磁县2015年秋季水生动物疫病抽样工作圆满完成

<正>磁县农牧局于2015年10月15日进行了鲤春病毒血症监测秋季抽样送检工作,2个省级样品和2个部级样品分别从路村营乡常凝村辛焕平养鱼场两个池塘进行了采集,并及时送至省水产养殖病害预防监测总站进行检测。整个采样过程严格按照《水生动物产地检疫采样技术规范》的要求进行,顺利完成了磁县承担的今年下半年的水生动物疫病鲤春病毒(SVC)的采样送检任务。     

鲤鱼细菌性鳔炎病的流行特点及防治方法

<正>鲤鱼鳔炎病是近几年北方池塘养殖鲤鱼的常见病,与弹状病毒引起的鲤春病毒血症(以前曾经称为"鲤鱼鳔炎症")不同,目前发生的鲤鱼鳔炎病由细菌引起,内服抗菌药物的治疗方法有效果;发病水温也不是鲤春病毒血症的低温期发病,而是在养殖季节温度越高的时候越严重,尤其是25℃以上死亡率高;临床症状也没有病毒病的体表严重出血、突眼的特征性症状,而是以鳔壁溃烂、水肿为主。因此目前鲤鱼养殖者和鱼病防治人员习惯上称其为鲤鱼细菌性鳔炎     

First detection of spring viraemia of carp virus in common carp (Cyprinus carpio L.) affected by a septicaemic disease in Mexico

Spring viraemia of carp (SVC) is an infectious disease responsible for severe economic losses for various cyprinid species, particularly common carp (Cyprinus carpio carpio). The causative agent is the SVC virus (SVCV), a member of the Sprivivirus genus, Rhabdoviridae family, and a List 1 pathogen notifiable by the World Organization for Animal Health. This study describes the diagnosis of an SVCV pathogen isolated in October 2015 from wild common carp inhabiting a natural lagoon in central Mexico. While neither an epidemic nor fish mortalities were reported, the collected killed specimens exhibited clinical signs of disease (e.g., exopthalmia, moderate abdominal distension and haemorrhaging, as well as internal haemorrhages and adhesions). Histological results of injuries were consistent with the pathology caused by SVCV. This finding was supported by the isolation of a virus in EPC and BF‐2 cells and subsequent RT‐PCR confirmation of SVCV. The phylogenetic analyses of partial SVCV glycoprotein gene sequences classified the isolates into the Ia genogroup. These findings make this the first report of SVCV detection in Mexico, extending the southern geographical range of SVCV within North America. However, since this pathogen was detected in fish inhabiting a natural body of water without tributaries or effluents, it is difficult to estimate the risk of SVCV for other wild/feral cohabitating cyprinid species in the lagoon. The status of this virus is also unknown for other bodies of water within this region.     

鲤春病毒血症病毒核蛋白、磷蛋白与基质蛋白的表达、抗体制备及免疫原性比较

鲤春病毒血症病毒(SVCV)能够引起鲤科鱼类大量死亡,被世界动物卫生组织(OIE)列为必须申报的重要疫病,也是我国唯一被列为一类疫病的鱼类传染病。为建立SVCV的快速免疫学诊断方法,研究其主要结构蛋白间的免疫原性差异,实验首先采用原核表达系统克隆并诱导表达,纯化SVCV的核蛋白(N)、磷蛋白(P)和基质蛋白(M),并进一步免疫新西兰白兔制备抗血清,抗血清经Protein A柱进一步纯化获得3种蛋白的多克隆抗体。利用间接酶联免疫吸附测定(ELISA)和免疫印迹实验(Western blot)对抗体效价和特异性进行分析验证。结果发现,SVCV的N、P和M重组蛋白均在原核表达系统获得大量表达,且表达的蛋白经纯化后免疫实验动物产生了相应的多克隆抗体。Western blot结果显示,3种蛋白抗体均与SVCV重组蛋白及天然蛋白发生特异性的免疫反应。ELISA结果显示,针对P蛋白制备的抗体效价最高,可达409 600;针对N和M蛋白制备的抗体效价也均大于204 800。同时,特异性检测实验结果显示,制备的3种蛋白抗体均仅与SVCV发生特异性免疫反应,而与SVCV宿主其他易感病毒均不发生交叉反应。实验结果将对SVCV的快速诊断及疫苗开发提供新的手段和思路。     

黑龙江地区鲤春病毒血症病毒的分离与基因型分析

对2015—2016年黑龙江不同地区的40个养殖场送检的鲤(Cyprinus carpio)进行鲤春病毒血症病毒(spring viremia of carp virus,SVCV)的细胞培养分离、PCR鉴定、病毒滴度测定、病毒表面糖蛋白(glycoprotein,G)氨基酸序列聚类分析及基因分型研究。细胞培养结果显示,来自4个不同养殖场的鲤组织样本能够感染鲤上皮细胞(epithelioma papulosum cyprini,EPC)产生典型细胞病变(cytopathic effect,CPE),收集病毒悬液分别称为Shlj1~Shlj4。PCR鉴定结果表明,该4株病毒均为SVCV。病毒滴度实验测算出SVCV Shlj 1~Shlj 4的滴度分别为10~(6.28)、10~(6.88)、10~(7.57)和106.38 TCID50/mL。Shlj的糖蛋白基因核苷酸序列的聚类分析和遗传进化分析结果显示,Shlj 1~Shlj 4与Gen Bank收录的中国参考株A2、BJ0505-2和美国参考株USA、212364聚为一簇,同源性为98.4%~99.8%;Shlj 1~Shlj 4毒株之间的糖蛋白核苷酸序列相似性在98.6%~99.8%,其中Shlj 3与美国SCVC毒株USA、212364具有最高的核苷酸相似性(99.8%),Shlj 2与英国参考毒株880163具有最低的相似性(88.0%)。糖蛋白氨基酸序列比对结果显示,Shlj4中氨基酸突变最多,与另3个毒株差异较大。基因型分析结果显示,Shlj 1~Shlj 4均为基因Ia型。本研究结果表明,黑龙江地区2015—2016年间的SVCV检出率约为10%,并且来源于不同养殖场的病毒分离株的核酸序列呈现不同程度的差异,该结果进一步证明SVCV毒株在中国不同的鲤养殖环境中正在不断地进化。     

Virulence of a chimeric recombinant infectious haematopoietic necrosis virus expressing the spring viraemia of carp virus glycoprotein in salmonid and cyprinid fish

Infectious haematopoietic necrosis virus (IHNV) and spring viraemia of carp virus (SVCV) are both rhabdoviruses of fish, listed as notifiable disease agents by the World Organization for Animal Health. Recombinant rhabdoviruses with heterologous gene substitutions have been engineered to study genetic determinants and assess the potential of these recombinant viruses for vaccine development. A recombinant IHNV (rIHNV), containing the full‐length genome of a European IHNV strain, was modified by deleting the glycoprotein (G) gene and replacing it with a European SVCV G‐gene to make the rIHNV‐Gsvcv. The chimeric rIHNV‐Gsvcv level of virulence in rainbow trout, common carp and koi was assessed, and its ability to induce a protective immune response in surviving koi against wild‐type SVCV infection was tested. The rIHNV‐Gsvcv infection of trout led to high mortality, ranging from 78% to 92.5%, after immersion. In contrast, no deaths occurred in juvenile common carp after infection with rIHNV‐Gsvcv by either immersion or intraperitoneal (IP) injection. Similarly, koi infected with rIHNV‐Gsvcv via IP injection had little to no mortality (≤9%). Koi that survived initial infection with a high dose of recombinant virus rIHNV‐Gsvcv were protected against a virulent SVCV challenge resulting in a high relative per cent survival of 82.5%.     

鲤春病毒血症病毒糖蛋白的截短表达及其免疫原性分析

为了揭示鲤春病毒血症病毒(spring viremia of carp virus,SVCV)糖蛋白编码基因的主要免疫原性决定区域,本研究对SVCV的糖蛋白基因进行截短表达,并用纯化的重组蛋白作为免疫原制备了兔抗血清以分析其免疫原性。通过SOSUI以及DNAStar 6.0软件对SVCV糖蛋白基因的跨膜区、亲水性以及抗原表位进行分析后,采用RT-PCR对该基因主要抗原决定区域编码片段进行扩增,并构建重组表达质粒p GEX-Gtr,对其进行诱导表达后获得截短的SVCV糖蛋白的重组蛋白。将表达的重组蛋白进行纯化复性后,作为免疫原制备兔抗血清,采用ELISA法检测其效价,采用免疫印迹以及间接免疫荧光技术检测该重组蛋白的免疫原性。研究结果显示,截短表达的糖蛋白编码基因长1317 bp,编码439个氨基酸(29~467),推测分子量为49.6 k D。利用该重组蛋白制备的兔抗血清,其与重组蛋白的反应效价为1∶64000,。免疫印迹及间接免疫荧光结果显示,该兔抗血清与SVCV-HN株能发生特异性反应,表明该重组蛋白与天然的病毒表面糖蛋白的免疫原性无差异。上述研究结果表明,截短表达的重组蛋白具有很好的免疫原性,可应用于免疫诊断技术研发与基因工程疫苗的研制。     

Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for the detection of spring viraemia of carp virus (SVCV) in tissue homogenates of the carp, Cyprinus carpio L.

Abstract. An enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for the demonstration of the virus of spring viraemia of carp (SVCV) in liver, kidney and spleen homogenates, and in infected cell cultures is described. The sensitivity of the method is 10^2·8–10^3·5 TCID₅₀ 0·lml⁻¹ of the examined fluid. The specificity has been confirmed by the ELISA inhibition test and by results of virological examinations. Contamination with bacteria or fungi of samples taken from dead fish had no effect on the results of ELISA. Specific anti-SVCV sera were used successfully for the production of conjugates for the direct immunoperoxidase and immunofluorescence detection of SVCV in infected cell cultures.