用于PCR检测对虾皮下及造血组织坏死杆状病毒(HHNBV)的一种快速提取DNA方法

使用采样液ＳＥＭＰ－Ｔｒｉｓ保存人工感染ＨＨＮＢＶ（ＷＳＳＶ的一个分离株）的中国对虾组织，然后分别用酚抽提法、玻璃乳（Ｇｌａｓｓ Ｍｉｌｋ）回收法、硝酸纤维素膜结合法和煮沸－乙醇沉淀法提取ＤＮＡ。应用ＨＨＮＢＶ引物对提取的ＤＮＡ进行ＰＣＲ扩增，使用琼脂糖凝胶电泳对扩增产物进行鉴定和检测。通过比较表明，煮沸－乙醇沉淀法是一种最快速、简便的从采样液ＳＥＭＰ－Ｔｒｉｓ保存的病虾组织中制备ＰＣＲ模板的方法     

不同方法保存的患病异育银鲫中鲤疱疹病毒2型DNA提取和PCR扩增效果分析

以患鲤疱疹病毒2型(Cyprinid herpesvirus 2,Cy HV-2)疾病的异育银鲫(Carassius auratus gibelio)肾脏为实验材料,采用-20℃冷冻、100%乙醇、Dafano's液、10%福尔马林、Zenker's液、Müller's液、2.5%戊二醛、Helly's液、Mossman's液、Bouin's液和Carnoy's液不同方法进行保存,通过微量分光光度计检测和琼脂糖凝胶电泳探讨不同保存方法对病毒DNA提取效果、常规PCR扩增效果和巢式PCR扩增效果的影响。结果表明:从病鱼肾脏中提取DNA时,除100%乙醇保存方法与-20℃冷冻保存组一样可以提取高质量的DNA外,其它保存方法对DNA提取有不同程度的影响,100%乙醇保存方法和保存的材料可以用作于鲤疱疹病毒2型DNA的提取;常规PCR扩增时,100%乙醇、Zenker's液、2.5%戊二醛、Helly's液、Bouin's液和Carnoy's液保存方法与-20℃冷冻保存组具有相同的效果,在362 bp处出现明亮一致的清晰单一目的条带,这6种保存方法及其保存的材料可以用作鲤疱疹病毒2型的常规PCR扩增;巢式PCR扩增时,100%乙醇、Dafano's液、10%福尔马林、Zenker's液、Müller's液、2.5%戊二醛、Helly's液、Mossman's液、Bouin's液和Carnoy's液所有保存方法与-20℃冷冻保存组具有相同的效果,在339 bp处出现明亮一致的清晰单一目的条带,这些保存方法及其保存的材料均可以用作于鲤疱疹病毒2型的巢式PCR扩增,在采用巢式PCR进行检测和诊断患鲤疱疹病毒2型疾病上具有应用价值。     

杂交一代（尼罗罗非鱼♀×奥利亚罗非鱼♂）及春亲本基因组ＮＤＡ的比较

采用ＲＡＰＤ技术，用２０个随机引物对尼罗罗非鱼，奥利亚罗非鱼及其杂交一代的精巢ＤＮＡ进行扩增反应，发现引物ＯＰＺ－１４和ＯＰＺ－１８在尼罗罗非鱼和奥利亚鱼之间扩增出有差异的ＤＮＡ片段，作为鉴定两种鱼的分子标记有较高可信度，对这两种鱼的杂交一代基因组ＤＮＡ的ＲＡＰＤ扩增能获得中够的多态性，２０个引物中有８个引物扩增出差异性产物，表明杂交一代基因杂合性增强，这是杂种优势得以形成的重要遗传物质基础之一。     

中国对虾黄渤海沿岸群亲本及子一代RAPD分析

１９９７年３月从山东海阳市近海捕获中国对虾，取两尾单独暂养，产卵后培育出子代，用随机扩增多态性ＤＮＡＡ（Ｒａｎｄｏｍ Ａｍｐｌｉｆｉｅｄ Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ ＤＮＡ，ＲＡＰＤ）技术对亲本和子代的基因组ＤＮＡ进行多态性研究，目的是在分子水平上解亲本与子一代之间的遗传结构，比较了两个家系的遗传差异。结果表明，使用ＯＰＧ系列２０个引物，有１６个引物获得了谱带清晰且重复性好的产物，扩增的多态性片段分子     

牙鲆和大菱鲆养殖群体的分子标记和遗传变异

用１６个１０碱基随机引物对养殖牙鲆（Ｐａｒａｌｉｃｈｔｈｙｓ ｏｌｉｖａｃｅｕｓ）和大菱鲆（Ａｃｏｐｈｔｈａｌｍｕｓ ｍａｘｉｍｕｓ）进行基因组随机扩增多态性ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）遗传分析。发现：（１）多个引物具有种的特异性扩增带。其中引物Ｓ７扩增的６９０和１１６０ｂｐ带,引物Ｓ２扩增的６８０ｂｐ带为牙鲆的种的特异性谱带;而引物Ｓ７扩增的６５３和８８９ｂｐ带,引物Ｓ２扩增的６５０、８７０、９９０及１１     

扩增香螺SSR指纹研究的试验条件的优化

利用SSR技术对香螺进行了PCR扩增,探索香螺基因组DNA的提取方法。从香螺23对近缘种引物中筛选出8对可以扩增的引物,对引物浓度、Taq酶浓度、循环次数、模板浓度等方面进行了研究,从而探索出一个适合香螺SSR分析的反应体系和反应条件并对微卫星引物通用性进行初步分析。     

条纹斑竹鲨基因组的RAPD分析初报

利用１１种随机引物对５要条纹斑竹鲨基因进行了ＲＡＰＤ检测，结果表明，１１种引物在每个个体上扩增的ＤＮＡ片段总数在７７－８４之间，单个随机引物扩增的ＤＮＡ片段数目由至１１条不等，平均为７．５条ＤＮＡ片段，片段的大小在３００－２８００ｂｐ之间，个体之间的相似率在９０％以上。     

鳙鱼不同组织基因组DNA提取方法的探讨

分别采用试剂盒和常规苯酚/氯仿抽提法提取新鲜的鳙鱼肌肉、肝脏、尾鳍以及用乙醇保存的3种组织基因组DNA,并对其进行综合分析。结果表明,对3种组织的新鲜样品2种方法均能提取高质量的DNA,而用乙醇保存的3种组织,DNA样品质量最好的是尾鳍,其次是肌肉,肝脏最差;总的来看,试剂盒法提取的DNA纯度较好,但是浓度低,而苯酚法得到的DNA浓度高,质量好,且相对成本低。综合比较,苯酚/氯仿抽提法提取乙醇保存的尾鳍组织基因组DNA是一种行之有效的方法,可以在鱼类分子研究中推广应用。     

对虾一种杆状病毒多角体蛋白基因的PCR扩增

根据已发表的几种杆状病毒的多角体基因的序列比较与分析，设计并合成两对ＰＣＲ简并引物Ｐ—６０／Ｐ７４０和Ｐ１６４／Ｐ６４０，从纯化的对虾皮下及造血组织坏死杆状病毒提取ＤＮＡ并进行ＰＣＲ扩增，Ｐ—６０／Ｐ７４０的扩增片段较为复杂，基中１条的长度为８００ｂｐ的主带与设计的ＤＮＡ片段长度相近。Ｐ１６４／Ｐ６４０经优化ＰＣＲ的反应条件后，成功地扩增出与设计相同的约４８０ｂｐＤＮＡ片段。进一步的实验表明，Ｐ—６０／Ｐ７４０扩增的分子量为８００ｂｐ的片段可被Ｐ１６４／Ｐ６４０引物对扩增，分子量与预期的相同，初步研究结果显示，Ｐ—６０／Ｐ７４０可用于杆状病毒多角体蛋白全基因的克隆，Ｐ１６４／Ｐ６４０对于对虾杆状病毒的调查和研究有实际应用价值。     

鲫鱼基因组DNA提取方法的探讨

以鲫鱼的血液、肌肉、肝、肾为材料，采用苯酚一氯仿法、试剂盒法提取鲫鱼基因组DNA，对不同方法提取的结果进行了紫外分光光度、琼脂糖凝胶电泳、微卫星PCR扩增等方法的鉴定。结果表明不同方法提取的鲫鱼基因组DNA浓度在385．8～3167．5ng/μL，A260／280比值处于1．66～1．87，所提取的DNA适合微卫星PCR扩增。因此，用苯酚-氯仿法对鲫鱼的血液、肌肉、肝、肾，用试剂盒法对鲫鱼的血液均能提取鲫鱼基因组DNA。