热激对玉米大斑病菌生长和发育的影响

通过对玉米大斑病菌进行热激处理,观测热激对病菌孢子萌发、菌丝生长速度、菌落形态、菌丝形态等方面的影响。结果表明:热激处理对分生孢子萌发率的影响与热激温度有关,42℃热激促进孢子萌发,45℃热激对孢子萌发没有显著影响,48℃热激则会显著抑制孢子萌发;42℃～48℃热激处理会降低病菌的菌落生长速度,热激温度越高菌落生长速度越慢;42℃～48℃热激对菌丝形态、分生孢子形态、菌落颜色和菌落形态均无明显影响,但菌丝细胞中的内容物减少,有时出现内容物缺失的菌丝细胞。     

玉米大斑病菌StSte12基因对H_2O_2氧化胁迫的应激调节

通过比较野生型菌株Wt01-23与StSte12基因RNAi沉默突变体菌株StRNAi9-10和StRNAi3-6在H_2O_2胁迫下生长和发育方面的差异,分析转录因子基因StSte12对玉米大斑病菌氧化胁迫的调节能力。在不同浓度H_2O_2胁迫条件下,测定野生型菌株和突变体菌株的菌落生长速度、菌丝形态、产孢量和菌丝萌发率。结果表明,随着H_2O_2浓度的增加,玉米大斑病菌野生型菌株和突变体菌株的菌落生长速度、产孢量和菌丝萌发率均显著降低,但突变体菌株的降低程度显著高于野生型菌株,表明StSte12基因对玉米大斑病菌的氧化应激调节具有重要的调控功能。     

玉米灰斑病菌产孢特性的初步研究

应用玉米叶粉碳酸钙琼脂培养基(MLPCA)和高粱粒培养基,通过基质含量、培养基类别以及温度和光照条件不同处理,对玉米灰斑病菌产孢特性研究结果表明:(1)玉米叶粉含量相同时,病菌在CaCO3含量为1.5 g培养基上产孢量最高,表明玉米叶粉和CaCO3含量比为10∶1的玉米叶粉碳酸钙琼脂培养基为最佳产孢培养基;在CaCO3含量相同时,病菌在玉米叶粉含量为24 g的培养基上产孢量最高,产孢量与玉米叶粉含量成正比;(2)在高粱粒培养基上病菌只产生菌丝体和分生孢子梗,而不产生分生孢子,可能是由于基质营养含量较高、水分较少而仅利于病菌营养生长所致.(3)病菌在玉米叶粉碳酸钙琼脂培养基上适宜培养时间为5～7 d,产生分生孢子量达到高峰.     

玉米秸秆腐解液酚酸物质含量检测及对玉米大斑病菌的影响

通过提取不同时期玉米秸秆腐解液,研究其对玉米大斑病菌菌丝生长和孢子萌发的影响。利用HPLC检测腐解60 d的腐解液,推测其含有对羟基苯甲酸、邻苯二甲酸、香草酸、丁香酸和苯甲酸。通过外源添加法研究酚酸物质对玉米大斑病菌菌丝生长和孢子萌发的影响,结果表明,5种酚酸物质抑制玉米大斑病菌菌丝生长,抑菌率在14.5%~100%,且随浓度的增加抑制作用趋势增强。苯甲酸和邻苯二甲酸在0.125~1 mg/m L浓度下抑制孢子萌发;羟基苯甲酸在0.062 5~1.0 mg/m L浓度下促进孢子萌发。通过田间调查发现,在开始发病时,秸秆还田抑制玉米大斑病病情指数的发展。     

顶孢霉菌代谢产物对玉米圆斑病菌生长和发育的影响

利用菌丝生长速率法和孢子萌发法研究顶孢霉代谢产物对玉米圆斑病菌生长的抑制能力。结果表明,顶孢霉发酵液对玉米圆斑病菌分生孢子萌发和菌丝生长均有抑制作用。菌丝生长速率测定表明,含有顶孢霉菌代谢产物的培养基（D+P）圆斑病菌菌丝的生长速率低于含有玉米圆斑病菌代谢产物的培养基（Y+P）和空白对照PDA的生长速率,菌丝生长速率分别为65.0、86.5、87.5 mm/d;以Y+P和PDA为对照,D+P对玉米圆斑病菌在第1天和第2天时抑制率最高,均达58%以上;在1 mL PDA体系中,顶孢霉发酵液添加量为0.5 mL时,抑制率可达100%,不同浓度处理间及其与对照处理间顶孢霉发酵液抑制率差异显著（P=0.05）;同一处理不同培养天数顶孢霉发酵液抑制率也有显著差异（P=0.05）。孢子萌发实验表明,经顶孢霉发酵液处理后的玉米圆斑孢子萌发率降低,在发酵液浓度为0.9 mL/mL时,萌发率仅为24%,抑制率可达66.67%, EC50约为68 mL/100 mL,且孢子经发酵液处理后产生畸形,不能正常发育。     

特异性MAPK抑制剂U0126对玉米大斑病菌细胞膜透性及防御酶活性的影响

依据实验室前期研究发现,MAPK特异性抑制剂U0126对玉米大斑病菌分生孢子及附着胞发育、HT-毒素的产生和活性以及致病性都有着较显著的影响。以不同浓度的U0126处理玉米大斑病菌菌株,研究该抑制剂对病菌细胞膜透性及防御酶活性的影响。结果表明,U0126对病菌菌丝电导率和PAL活性均无显著影响,但对POD及PPO活性均有显著影响,且U0126对POD活性的影响具有浓度依赖性,即低浓度U0126可提高POD活性,高浓度U0126抑制POD活性;U0126对PPO活性的影响具有菌株特异性,且对菌株01-27的PPO活性的影响与对POD活性的影响相似,都具有浓度依赖性;随着U0126浓度增加菌株01-19的PPO活性反而显著下降。U0126对玉米大斑病菌细胞膜透性和苯丙氨酸代谢没有显著影响,但与过氧化物代谢和多酚代谢密切相关;U0126对过氧化物代谢和多酚代谢的影响具有一定的菌株特异性和浓度依赖性。     

继代培养对玉米大斑病菌生长、发育和致病性的影响

经连续单孢分离和培养,获得玉米大斑病菌(Setosphaeria turcica)的22次继代培养菌株.前13代菌株没有明显的生长和发育变化,从第14代开始,继代培养对病菌的生长和发育存在显著影响.随继代次数增加,菌丝生长速度变慢,产孢量下降,分生孢子变小,致病性显著降低,表现出明显退化现象.随着继代培养,菌丝呈变粗趋势.     

GFP 标记杧果露水斑病病原菌及其侵染部位的确定

由枝状枝孢霉（Cladosporium cladosporioides）侵染引起的杧果露水斑病是近年杧果上新发生的病害,主要为 害果实。明确该菌能否穿透果皮侵入果肉,可为防治该病害选择合适的药剂提供依据。本 研 究 将 绿色荧光蛋白基因 gfp 和潮霉素抗性基因 hygB 表达盒插入了经定点突变后 Cl. cladosporioides 的 ITS 序列中,成功构建了 pITGH 重组载 体,将其用 PEG 介导方法转化杧果露水斑病菌原生质体,获得了在菌丝、分生孢子、萌发的分生孢子中稳定发出绿色 荧光的 GFP 标记菌株,该标记菌株与野生菌的菌落形态、颜色及致病力无明显差异,生长速度明显慢于野生菌。用该 标记菌株观察侵染过程,发现杧果露水斑病菌可以在杧果果皮上侵染和扩展,但不能扩展至果肉中。该结果为选择农 药类型提供了依据,也为进一步研究该病菌在活体杧果上的生物学、预测病害和通过观察定殖情况确定杧果品种的抗 病性等奠定了良好的材料基础。     

三环唑影响玉米大斑病菌致病力的机制

玉米大斑病菌主要通过附着胞的机械穿透力侵染寄主,三环唑能够降低玉米大斑病菌对寄主的致病力。对三环唑培养下玉米大斑病菌附着胞形成、膨压变化过程以及病菌的侵染效能等进行分析,探讨三环唑抑制玉米大斑病菌侵染的机制。结果表明,5μg/m L三环唑药剂培养下的玉米大斑病菌在附着胞发育时期和附着胞成熟期的膨压较不加药剂处理分别下降了0.22 MPa和1.72 MPa,接菌后72 h对寄主的侵染效率也明显下降,三环唑主要通过影响成熟期附着胞形成高膨压降低病菌的侵染能力。     

西南地区玉米线形圆斑病生物学特性和品种抗性鉴定

对西南地区普遍发生的玉米线形圆斑病菌生物学特性和50个推广品种对线形圆斑病的抗性进行鉴定.结果表明,该病菌生长温度为10℃～35℃,最适生长温度为20℃～25℃;病原菌对酸碱度的适应范围较广,在pH值4～11都能生长,以pH值为5～7最适;分生孢子在5c℃～35℃均能萌发,最适温度为20℃～25℃;光照对菌丝和孢子萌发无显著影响.玉米品种间对玉米线形圆斑病表现的抗性差异明显,50个品种中表现抗病品种有7个,占14％;中抗品种24个,占48％;感病品种19个,占38％,无免疫品种.     

咖啡腐皮镰孢黑果病病原鉴定及其生物学特性测定

本文针对云南咖啡园在雨季出现的一种咖啡果实变黑的黑果病害进行病原菌分离,获得CPE5和CPE12菌株。这2个菌株在PDA培养基上菌落呈圆形,毡状,菌丝体灰白色,表面稀疏,背面出现浅黄色色素。分生孢子具1~8个隔膜,长6.08~65.3 μm,宽2.76~9.03 μm。小型分生孢子呈肾形,大型分生孢子镰刀型。致病性测定表明,无论是接种健康新鲜的咖啡离体叶片还是果实,产生的症状以及再分离后获得的分生孢子形态特征均与初始接种菌株的一致。分子鉴定结果表明,无论是ITS、β-tubulin、TEF、28S rDNA单个基因聚类树,还是ITS-TEF加合基因序列聚类结果均一致,表明菌株CPE5与CPE12均属于腐皮镰孢（Fusarium solani）。这是国内腐皮镰孢危害咖啡果实的首次报道。病原菌的生物学特性研究表明,咖啡腐皮镰孢菌最适宜生长的培养基是PDA和玉米粉琼脂培养基;最适生长温度为28 ℃;完全光照有利于病原菌的生长。病原菌对碳源甘露醇以及氮源牛肉浸膏、甘氨酸、尿素利用率最高;菌株在75 ℃,10 min条件下即可致死。咪鲜胺锰盐和戊唑醇2种药剂的EC₅₀值分别为1.8352 μg/mL和1.4826 μg/mL,对菌株CPE5菌丝体生长具有十分显著的抑制效果。     

橡胶树内生真菌ITBB2-1的形态学和分子生物学鉴定

为了解巴西橡胶树与其内生真菌的相互关系以及机理,通过平板划线分离法从巴西橡胶树健康茎段分离到内生真菌菌株ITBB2-1,并对该菌株的形态学和分子生物学进行初步鉴定,结果表明:其菌落为白色,生长缓慢,有分生孢子和厚坦孢子;其菌丝透明有隔,约13 d 出现少量渗透液.ITBB2-1菌株具有喜高渗透压的特性,中等NaCl浓度(0.6、1.0mol/L)显著促进其菌落生长.在0.6mol/L NaCl下,菌落生长最快;但随着NaCl浓度继续提高,其作用逐渐由促进生长转化为抑制生长;NaCl浓度增加到5mol/L时,ITBB2-1菌株停止生长.利用18SrDNA和ITS(ITBB2-1)序列进行系统发育分析,初步确定ITBB2-1菌株为麦轴梗霉属(Tritirachium Limber)真菌.     

橡胶树臭根病菌的鉴定及其生物学特性研究

利用海南省橡胶树臭根病病株上采集的病根样本,采用菌索组织分离法获得菌落后,进行子实体诱导产生分生孢子,再经单孢分离纯化获得菌株HNDZ001,通过柯赫氏法则验证、形态学特征观察及分子生物学技术对该菌株进行鉴定,确定菌株HNDZ001为引起橡胶树臭根病的匐灿球赤壳菌(Sphaerostilbe repens Berk.&Br.)。生物学特性测定结果表明,菌株HNDZ001在PDA培养基上菌落近圆形,表面黄白色,致密,背面呈深褐色至浅黄色,后期会产生黄褐色菌索和孢梗束;该菌菌丝生长的适宜条件为温度25~34℃、p H 7~9,最适生长条件是温度28℃、pH值为8、甘露醇为碳源、牛肉浸膏为氮源、完全黑暗,且在黄瓜汁培养基上菌丝生长最好。     

花生疮痂病菌生物学特性研究

由疮痂病菌（Elsinoë arachidis) 引起的花生疮痂病,近年来在辽宁省大面积发生,严重制约花生产业的健康发展。本文对花生疮痂病菌生物学特性开展了系统研究。结果表明,花生疮痂病菌在PSA上菌落褶皱、隆起,生长缓慢,在最适培养基PSA上培养30d菌落直径仅为28.1mm,最适碳氮源分别为半乳糖和酵母浸粉,最适温度25℃,pH4~6时菌丝长势良好,黑暗有利于该菌的生长,菌丝致死温度为48℃;分生孢子萌发最适pH值为5,最适温度为25℃,最适碳源为1%葡萄糖,最适氮源为1%丙氨酸和1%甘氨酸,光照对分生孢子萌发差异不显著,分生孢子致死温度为47℃。     

大豆灰斑病菌生长和产孢高效培养方法探讨

为明确大豆灰斑病菌菌丝生长和产孢的有效方法,探讨了V8培养基组分中V8蔬菜汁和碳酸钙含量对大豆灰斑病菌菌丝生长速率和产孢量的影响及最佳组分配比。利用5种不同浓度V8蔬菜汁和5种浓度碳酸钙组成25种不同组分处理,以广泛使用的PDA培养基为对照培养基,接种大豆灰斑病7号生理小种进行暗培养,每2 d测量其菌落生长情况和产孢子量并进行对比分析。结果表明:25种不同组分V8培养基的菌落直径、生长速率、生长面积及产孢子量均大于PDA培养基的菌落。V8培养基菌落直径生长最快为3.47 mm·d^-1;孢子产量最多达每皿9.87×106个。培养第5天时,病原菌的生长活力最大。最适宜培养时间为11~13 d,其产孢量达到高峰。培养基组合A4b4碳酸钙含量为1.5 g·L^-1、V8蔬菜汁浓度为15%时,最适合菌落直径生长,菌落生长面积最大。培养基组合A4b3碳酸钙含量为1.5 g·L^-1、V8蔬菜汁浓度为12%时,产孢子量最多。     

Morphological identification of foodborne pathogens colonizing rice grains in south Asia

The aim of this study was to identify the foodborne pathogens mainly, Aspergillus sp. colonizing rice grains using cultural and microscopic methods. Four differential media (Czapek Dox Agar (CZA), Czapek Yeast Agar (CYA), Malt Extract Agar (MEA) and Czapek yeast 20% sucrose agar (CYA20S)) were used for differentiation of five Aspergillus sp., colonizing rice grains comparing with standard cultures. We studied macroscopic (colony color and diameter, conidia color, exudates, sclerotia and colony texture) and microscopic (conidiophore color, length and breadth, conidia size, shape and surface texture, vesicle diameter and phialides length and breadth) characteristics for identification of 110 isolates of Aspergillus sp. isolated from 65 rice grain samples collected from various countries in South Asia (Cambodia, India, Indonesia, Malaysia and Thailand). According to morphological characters, all these isolates were belonging to Aspergillus flavus (45), A. fumigatus (8), A. ochraceus (7), A. niger (42) and A. tamarii (8). This is the first report on identification of large number of Aspergillus strains isolated from rice grains in South Asia.     

Identification and characterization of Didymella bryoniae causing gummy stem blight disease of watermelon (Citrullus lanatus) in Turkey

Watermelon (Citrullus lanatus (Thunb.) Matsum. & Nakai) is an important plant in the family Cucurbitaceae. Didymella bryoniae (Auersw.) Rehm [anamorph Phoma cucurbitacearum (Fr.) Sacc.] is the causative agent of gummy stem blight (GSB), a disease affecting members of the family Cucurbitaceae. Watermelon seedlings showing varied degree (20–90%) of suspected GSBs were collected from seedling companies in Antalya province, Turkey. The symptoms included angular water-soaked lesions, which turned tan over time; defoliation; dry, pale green stem; stem necrosis; gummy exudates; wilt; and the eventual death of the upper parts of the seedling plants. The growth of the fungal isolate in vitro showed white aerial and olivaceous mycelium, and olive to dark green or black substrate mycelium at the latter period of fungal growth. The colony surface was rough and undulated. The conidia were round-ended, cylindrical, monoseptate, and hyaline. The conidia ranged from 6.4 to 13.6 μm in length and 3.69–4.68 μm in diameter. The isolates were subjected to PCR using three primers, namely, DB-F3/DB-R3, GSBF1/GSBR1, and ITS1/ITS4, which produced fragment sizes of approximately 120, 780, and 560 bp, respectively. The real-time PCR using DB-F3/DB-R3 primer and SYBR Green fluorescence dye produced positive result for the samples tested. The D. bryoniae isolate was pathogenic to all the four different cucurbits tested and were consistently re-isolated from the diseased seedlings confirming their pathogenic status and thereby satisfying Koch's postulates. This is the second report confirming the presence of D. bryoniae in Turkey after its first detection in cucumber in 2015.