亚麻花药培养高频率的植株再生

本文主要研究亚麻花药培养的诱导培养基组成成份的效果,目的是提高愈伤组织的诱导和植株再生的效率.花药接种于改良的MS培养基上(培养基添加了五种不同配比的植物激素).培养基中含有2mg/L2.4-D和1mg/LBAP比相同成分培养基中含有1mg/LNAA和2mg/L6-BA(CK),愈伤组织再生苗的百分率及总的植株再生频率有显著提高.在五个处理的盐酸硫胺素的实验中,改良的MS培养基含有10mg/L盐酸硫胺素比含有2.4mg/L盐酸硫胺素愈伤组织再生苗的百分率及总的植株再生频率显著提高.在麦芽糖的五个处理中以培养基中含有6%或9%的麦芽糖,总的植株再生频率最高.蔗糖的浓度主要影响愈伤组织再生苗的百分率,总的植株再生效率、花粉植株的频率以及花粉植株染色体自然加倍的频率.本研究获得的单倍体品系已被应用于育种程序中.     

苯乙酸促进水稻花药愈伤组织的再分化和直接成苗

 研究了苯乙酸（phenylacetic acid，PAA）应用于水稻花药培养的效果。以 2,4-D 为对照，发现PAA不影响愈伤组织诱导率，但显著提高了愈伤组织分化率（p<0. 05），从而显著提高了植株再生率（p<0. 05）。其促进效果与品种、培养基无机盐成分有关，对籼稻品种效果较好。PAA还能有效地促进花药愈伤组织不经转移到分化培养基上而直接在诱导培养基上分化成苗。直接再生的绿苗大多具有旺盛的不定根，可直接移栽到土壤中去。当PAA浓度为10 mg/L 时，特青、02428和亚优2号的直接植株再生率分别达0. 56%, 1. 64%和2. 69%。提高PAA浓度可进一步提高直接植株再生率。利用基于PAA的一步成苗培养法已构建成了3个水稻杂种花培后代加倍单倍体（DH）群体。     

高粱花药和花序培养诱导愈伤组织及再生植株

小麦、水稻、玉米及木本植物的花药培养诱导花粉植株已经取得了成功,而高粱的花粉或花药培养诱导单倍体的方法、培养基及程序还不完善,基因型和培养基对高粱再生植株的影响也没有报道。Rose 等(1985)用栽培品种(Advance)从1000多个花药形成的愈伤组织中仅得到4株不知倍数的白化苗。利用高粱体细胞组织或器官,如未成熟的胚、芽尖和叶圆片来诱导愈伤组织和再生植株已经成功,但     

亚麻花药培养高频率的植株再生

本文主要研究亚麻花药培养的诱导培养基组成成份的效果，目的是提高愈伤组织的诱导：和植株再生的效率。花药接种于改良的MS培养基上(培养基添加了五种不同配比的植物激素)。培养基中含有2mg／L2．4-D和1mg／LBAP比相同成分培养基中含有1mg／LNAA和2mg/L6-BA(CK)，愈伤组织再生苗的百分率及总的植株再生频率有显著提高。在五个处理的盐酸硫胺素的实验中，改良的MS培养基含有10mg／L盐酸硫胺素比含有2．4mg/L盐酸硫胺素愈伤组织再生苗的百分率及总的植株再生频率显著提高。在麦芽糖的五个处理中以培养基中含有6％或9％的麦芽糖，总的植株再生频率最高。蔗糖的浓度主要影响愈伤组织再生苗的百分率，总的植株再生效率、花粉植株的频率以及花粉植株染色体自然加倍的频率。本研究获得的单倍体品系已被应用于育种程序中。     

大麦的花药培养(一)

作为一种单倍体育种新技术,花药培养已被成功地用于小麦和水稻等重要粮食作物的育种实践中,并已培育出了一批优良品种在生产上推广使用。早在1971年和1973年Clapham就分别做了由花药培养诱导出愈伤组织及再生出大麦单倍体植株的报道。从那以后,该项研究广泛开展起来,并取得了巨大进展。迄今已探明影响大麦花培成败的因子很多,包括基因型、供体植株的生理状况、花粉发育时期、低温预处理、花药密度、培养基组成及培养条件等等,而且各因子之间常常发生互作。虽然经过许多学者的努力,培养方法得到了改进,愈伤组织诱导率和植株再生率有了较大提高,但对大多数基因型来说,绿苗分化率低及基     

提高水稻花培育种效率研究

通过对7个杂交组合F1代的花药培养,探讨了花培材料不同低温处理、不同诱导分化培养基激素配比、不同添加物以及培养条件对花药培养效率的影响,结果表明:低温预处理可提高花培的诱愈率,以8℃、8 d处理效果最好;改良N6培养基+YD2处理为粳稻、偏粳材料愈伤组织诱导最佳培养基,MS培养基+FH4处理为粳稻、偏粳材料愈伤组织分化的最佳培养基;多效唑(MET)对绿苗分化具有很大的促进作用;水解乳蛋白(LH)等有机附加物对多数材料的愈伤组织诱导和分化都有一定的作用;光、温培养条件对愈伤组织诱导分化有影响。     

卡那霉素在小麦愈伤组织遗传转化中的应用

为建立利用卡那霉素筛选的小麦遗传转化的有效体系,采用不同浓度的卡那霉素对小麦品种的幼胚愈伤组织进行处理,系统地研究了不同品种、不同愈伤组织诱导培养基、不同诱导培养时间下愈伤组织对卡那霉素筛选的反应。结果表明,不同小麦品种的愈伤组织对卡那霉素的抗性存在显著差异;同一品种不同培养条件下产生的愈伤组织对卡那霉素的反应存在显著差异;小麦品种河农827在N培养基上诱导培养14d得到的愈伤组织在含有15mg.L-1卡那霉素的分化培养基上筛选,效果较好。基因枪介导转化河农827的愈伤组织,用卡那霉素筛选得到的抗性再生苗经PCR检测,检测出12.5%的阳性株。     

柱花草花药离体培养研究

以热研2号柱花草花药为外植体,研究不同植物生长调节剂 、培养基以及低温预处理等对柱花草花药培养的影响,以期建立柱花草花药培养体系,获得再生植株,为柱花草倍性、基因组学及分子生物学研究提供材料。结果表明：花药4 ℃低温预处理24 h诱导效果较好;N6培养基对愈伤组织的诱导效果比MS培养基好;最佳愈伤组织诱导培养基组合为N6＋2,4-D 0.5 mg/L＋KT1.0 mg/L;分化培养的最佳组合为MS＋NAA 0.2 mg/L＋6-BA 3.0 mg/L。     

大麦胚性和非胚性愈伤组织的研究

利用幼胚培养诱导愈伤组织分化产生再生植株的方法,可产生大量的变异体,能克服花药培养染色体加倍而得到的二倍体的许多缺点,有倍体性稳定、出愈率高、分化率高、绿苗得率高和变异率高等优点,而且变异很容易被检出,为育种提供原始种质,能被育种     

双单倍体马铃薯染色体加倍的方法

本试验研究了马铃薯双单倍体(双单倍体是由四倍体栽培种花药培养产生的)植株加倍的两种方法。第一种方法:在MS培养基内附加NAA 0.1mg/1,而后加入秋水仙素0.2mg/l,用马铃薯双单倍体植株切断接种。经过40天培养,获得了加倍的四倍体植株,加倍频率为63.6%。第二种方法:将马铃薯双单倍体植株的茎,接种在含有2.4-D 1mg/l,萘乙酸0.025mg/l,KT 2mg/l的MS培养基上,在产生愈伤组织后诱导出再生四倍体植株,加倍频率为22.3%。     

TDZ在小麦花药培养中的作用

为了进一步提高小麦花药培养效率,以8个小麦杂交F1代为供试材料,通过在培养基中添加不同浓度的噻重氮苯基脲(thidiazuron,TDZ)探讨其对小麦花药培养的作用。结果表明,TDZ的作用与添加剂量及小麦基因型密切相关。在诱导培养基中添加TDZ对基因型中麦875/郑豫麦043具有负向调控作用,但对兰考198/黄明118、郑麦7698/西农979以及天禾7号/0836H-3则具有正向促进作用。TDZ的最佳添加剂量为0.05mg·L-1,可显著提高3个基因型的胚性愈伤组织诱导率和绿苗产率,其中兰考198/黄明118胚性愈伤组织诱导率和绿苗产率最高,分别达到25.1%和8.7%。同样,在分化培养基中添加一定剂量的TDZ,对4个基因型的愈伤组织分化均表现正向促进作用,TDZ的适宜浓度范围为0.5~1.0mg·L-1,以添加0.5mg·L-1的处理表现最优,能够显著提高绿苗分化率和绿苗/白苗比率;基因型兰考198/黄明118的绿苗分化率和绿苗/白苗比率最高,分别达50%和1.87。研究还表明,在诱导培养基或分化培养基中添加TDZ还能够促进绿苗增殖,提高单倍体自然加倍效率。本研究结果将有助于小麦花药培养技术的优化,进而提高花培育种效率。     

麦芽糖提高水稻花药培养效率的研究

 研究了浓度均为150 mmol/L的9种碳源(含组合)对3个籼稻品种花药的愈伤组织诱导率的影响，发现麦芽糖为碳源的培养基效果最佳。进一步以7个籼稻2个粳稻和4个杂交组合为材料，系统比较了150 mmol/L的麦芽糖与蔗糖作为诱导培养基的碳源对花药培养的影响，结果表明，以麦芽糖为碳源的培养基上，平均愈伤组织诱导率和随后的绿苗分化率分别为54.81%与9.70%，而在相应的蔗糖培养基上只有11.85%和3.30%，差异极显著。讨论了提高籼稻花培效率的簧略，井建议采用统一的方法计算愈伤组织诱导率．     

节节麦幼胚再生体系的建立

为建立高效的节节麦幼胚再生体系,以节节麦幼胚为外植体,通过正交设计,探索基本培养基、2,4-D、碳源、KT等因素对幼胚愈伤组织诱导、分化及植株再生效果的影响。结果表明,4种因素中,基本培养基对节节麦幼胚愈伤组织诱导的影响最显著(P0.05),2,4-D浓度对节节麦幼胚愈伤组织诱导也有显著影响(P0.05),添加3.0mg·L~(-1) 2,4-D的培养基诱导出的愈伤组织质量高,淡黄色,表面呈不规则颗粒状,质地致密,再生频率可以达到17.62%。KT浓度对节节麦愈伤分化影响最显著,基本培养基、2,4-D和碳源对节节麦幼胚愈伤分化均无显著影响。不同碳源对节节麦幼胚愈伤组织诱导和分化的影响均不显著,为节约成本可直接选用30g·L~(-1)蔗糖作为碳源。节节麦幼胚组织培养的最佳组合是:愈伤诱导培养基为MS培养基+3mg·L~(-1) 2,4-D+15g·L~(-1)蔗糖+15g·L~(-1)甘露醇,愈伤分化培养基为MS培养基+15g·L~(-1)蔗糖+15g·L~(~(-1))甘露醇+1.0mg·L~(-1) KT。     

基因型和2,4 D浓度对小麦不同外植体离体培养特性的影响

为了探讨不同基因型、不同外植体和不同培养条件对小麦愈伤组织诱导、分化及再生的影响,以小偃22、西农1376、西农1012和西农1013为材料,对各小麦品种(系)的幼穗、花药、幼胚和成熟胚组织的培养特性及影响因素进行了研究.结果表明,愈伤组织的诱导和再生与外植体类型、基因型和培养条件密切相关.以幼穗和花药为材料,西农1376平均出愈率均最高,达98.97％和3.85％,成苗率和花培效率均值亦最高,达12.83％和2.39％;以幼胚为材料,西农1376平均出愈率也最高,达99.27％,西农1012平均成苗率最高,达51.03％;以成熟胚为材料,小偃22平均出愈率最高,达93.22％,西农1376平均成苗率达19.78％.离体培养条件下,不同小麦品种(系)的4种外植体愈伤诱导和分化率与2,4-D浓度密切相关,1.0～3.0 mg·L-1 2,4D浓度能较好地诱导4种离体组织愈伤的产生及分化.不同基因型和同一基因型的不同外植体在2,4-D最佳诱导浓度上也有差异.供试小麦4种离体组织培养再生特性比较表明,离体幼胚培养再生效率最高,成熟胚次之,幼穗最差.     

Haploid Plantlet Production through Somatic Embryogenesis in Anther-Derived Callus of Bupleurum falcatum

Abstract

This study was carried out to verify the production of haploid plantlets through somatic embryogenesis of Bupleurum falcatum in anther culture (2n=16). Flowers with anthers at the uninucleate stage, less than 200 µm in anther length, were exposed to 10ºC for 5 days (cold pretreatment) and the anthers were cultured on MS medium supplemented with 2,4-D and/or picloram at various concentrations at 30ºC. The optimal supplement for callus formation was a mixture of 0.075 mg L-¹ 2,4-D + 0.075 mg L-¹ picloram or 0.75 mg L-¹ 2,4-D without picloram. Only a few calli were induced from the anthers without cold pretreatment. The calli were transplanted to MS medium without phytohormones and cultured at 25ºC for plant regeneration. Among one hundred twenty root tips of the regenerated plantlets examined, 14.2% were haploid (n=8). However, in the plantlets regenerated from anthers without cold pre-treatment only 2.5% was haploid. In both haploid and diploid regenerated plantlets, the chromosome number was fixed without variation. Among the regenerated plantlets, one was albino. Haploid plantlets were transplanted to the field after acclimation in pots filled with vermiculite under 90% humidity for a month, and haploid plant were produced. The potential of haploid plants derived from anther culture for production of high-yield and good-quality cultivars is discussed.     

大麦成熟胚培养高再生率品种的筛选

为了对大麦遗传转化受体进行筛选,本文比较分析了30个大麦品种的成熟胚在改良过的培养基上的培养效率。结果表明,大麦成熟胚在组织培养中,品种间愈伤组织的出愈率的差异非常显著。Morex的出愈率高达94.95%,短芒紫青稞的出愈率则低于6%。在成熟胚形成愈伤组织的时候,将胚刮碎相比整胚接种,可以获得出芽少、相对较好的诱导效果;不同品种的大麦愈伤组织,其分化率也有显著差异,浙秀22的分化率高达97.6%,驻大麦5号的分化率则较低,仅为11.85%。在再生率方面,不同的品种间具有显著的差异,Goldenpromise的再生率较高,达到了44.7%,垦啤麦9号的再生率较低,仅为1.4%。扬农啤9号白化苗的发生率较高,达到13.25%,有23个品种的白化苗发生率均不超过10%。综合分析,Golden promise、浙皮8号、浙秀12、Metcalfe、Franklin、浙大8号六个大麦品种具有良好的成熟胚培养效果以及较高的再生能力,可以作为大麦遗传转化的受体进行利用。     

Growth optimization and organogenesis of Gerbera jamesonii Bolus ex. Hook f. in vitro

Regeneration potentials in Gerbera jamesonii Bolus ex. Hook f. from tissues culture system was studied using leaf, petiole and root explants. In vitro regeneration, callus induction and root formation were optimized by manipulation of growth regulators during organogenesis. Various kinds of plant growth regulators such as 6-Benzylaminopurine (BAP), alpha-Naphthalene acetic acid (NAA), 2, 4-Dichlorophenoxyacetic acid (2,4-D), Indole-3-acetic acid (IAA), Indole-3-Butyric acid (IBA), N6-[2-Isopentenyl]adenine (2iP), Kinetin and Zeatin were used to initiate cultures. These plant growth regulators were added to Murashige and Skoog medium in different combinations and concentrations. Adventitious shoots were obtained from petiole explants cultured on Murashige and Skoog (MS) medium supplemented with 2.0 mg L(-1) BAP and 0.5 mg L(-1) NAA. Effectiveness of shoot regeneration medium, type of growth regulator used and duration of induction period were investigated. Leaf explants cultured on MS medium supplemented with 1.0 mg L(-1) BAP and 2.0 mg L(-1) 2, 4-D showed the best results for callus induction. Root explants were found to be non-regenerative in all experiments conducted. Petiole segment was identified as the best explant for regeneration of this species. Regenerated plants were rooted on Murashige and Skoog basal medium. Plantlets were then transferred to field with 75% survival rate.     

小麦不同外植体的组织培养效果研究

良好的组织培养效果是提高植物基因转化效率的基础。以山东省近年来育成并大面积推广的10个优良品种（系）为材料，对这些品种的花药、幼穗、幼胚和成熟胚的组织培养效果进行研究，旨在筛选每一基因型最适合于组织培养的外植体类型，为应用基因工程技术进行小麦遗传改良提供基础材料。结果表明，禽伤诱导率和再生成苗率与基因型和外植体类型（花药、幼穗、幼胚和成熟胚）密切相关。8802在花药和成熟胚培养中表现突出，花药出愈率达119．5％，愈伤分化成苗率19．9％;烟农19的幼穗愈伤直接分化成苗率最高，这43．5％；8802、烟农19和潍麦8号三个基因型的幼胚培养效果差异不显著，其愈伤分化成苗率分别为26．3％、24．5％和24．8％。蔗糖浓度在3％～9％之间，对成熟胚的愈伤组织诱导率影响很小。高浓度蔗糖降低愈伤生长速度。在一定蔗糖浓度下，愈伤诱导率与2，4-D浓度密切相关，高浓度的2，4-D对愈伤组织再生不利。MS＋4mg／L2，4-D对于成熟胚的脱分化相对较好，MS和MS＋0．4mg／L NAA＋0．6mg／L KT作为成熟胚的愈伤组织再生培养基，对不同基因型具有一定的适用性。     

不同生态型普通野生稻花药培养力的研究

对我国匍匐、倾斜和直立型普通野生稻进行了花药培养力的研究。供试的37份普通野生稻其花药培养力存在明显差异,愈伤诱导率变幅0～9.1%,绿苗率变幅0～32.1%,其中有31份材料可得到花培绿苗,占83.8%％。花药培养力的高低顺序为：栽培籼稻＞栽培稻／野生稻杂种＞直立型普通野生稻＞倾斜型普通野生稻＞匍匐型普遍野生稻。不同培养基对不同生态型普遍野生稻具有不同的花培效率。改良N6一号培养基具有显著提高花培效率的作用,适合各型普通野生稻的花药培养。