利用ISSR构建甜菜品种指纹图谱

为了快速、准确鉴定甜菜品种,采用ISSR分子标记对39个甜菜品种进行扩增并构建其指纹图谱。利用8个不同的甜菜品种DNA进行引物筛选,在100条ISSR引物中筛选出4条扩增条带清晰、多态性好的引物,对39个甜菜品种进行PCR扩增,构建甜菜品种指纹图谱。结果表明,2条ISSR引物ISSR826和ISSR827扩增条带多态性为71.4%～90.0%(平均85.2%),利用该2条构建的指纹图谱就可以完全区分39个甜菜品种的真实性和纯度。甜菜品种指纹图谱的构建为甜菜品种的鉴定、区分,为科学、快速、高效鉴定甜菜品种,保护科研工作者以及农民的利益提供理论依据。     

利用SCoT引物鉴别15个甜菜品种

为了探讨利用SCoT引物鉴别甜菜品种的可能性,利用3个多态性较好的SCoT引物对15个已经登记的甜菜品种进行扩增。结果表明3条引物SCoT2、SCoT12和SCoT21均表现出了很好的多态性,利用特征谱带法,SCoT12和SCoT21这两条引物单独使用均可鉴别全部的15个甜菜品种,而SCoT2也可以鉴别除了2号和9号以外的其它13个品种。利用SCoT分子标记技术可以实现较少引物快速鉴定甜菜品种真实性的目的,为保护甜菜育种家以及农民的利益,促进我国甜菜产业的健康发展发挥重要的作用。     

11个德国甜菜品种指纹图谱的构建

为了保护育种家以及农民的利益,从上百对甜菜SSR引物中选择出5对多态性好的引物用于德国引进品种指纹图谱的构建.结果表明,只需要其中的4对SSR引物,即SB04、S6、S7和S2就可以完全区分这11个德国甜菜品种,其中SB04、S2、S6和S7单独使用均能鉴别3个品种,利用特殊引物法可以鉴别除6号品种以外的其余10个品种,S6和S7配合使用可以鉴别6号品种.     

基于荧光标记SSR的CID法快速鉴定福建茶树品种

茶树品种真实性鉴定是茶树种质资源研究的重要组成部分,是茶树品种知识产权保护的前提。在茶树基因组上按照均匀分布的原则选择45个SSR标记合成荧光标记引物,利用这些标记引物对54个福建无性系茶树品种进行PCR扩增,标记基因型分型后进一步筛选出9个SSR标记核心引物。这批核心引物的多态性信息含量(Polymorphism information content,PIC)均大于0.5,等位位点数在3~5之间,基因型数在5~10之间,属于高度多态性引物且方便进行基因型数据统计,适宜用来进行无性系茶树品种的真实性鉴定。利用其中的6个标记核心引物建立了54个福建无性系茶树品种的品种鉴别图(Cultivar identification diagram,CID),该CID能直观地提供对其中任意品种进行鉴定所需要的标记引物以及相应的标记基因型,且能够方便地进行扩容以用来对更多的无性系茶树品种进行真实性鉴定。利用该方法对无性系茶树品种进行真实性鉴定,操作方便、快速准确、稳定性高、实用性强。本实验所获得的茶树品种鉴定图(CID)对茶树品种知识产权保护,以及促进茶树品种选育工作健康可持续发展具有重要的意义。     

茶树PVP申请品种的SSR分子标记鉴定和系谱关系分析

利用30对SSR引物,对26个植物新品种保护(PVP)申请茶树品种及其13个近似品种与亲本进行了分子鉴定和系谱关系分析,探讨SSR分子标记在茶树新品种保护工作和DUS测试中的应用。研究结果显示,30对SSR引物共检测到131个等位基因,每对引物检测的等位基因数为3~7个,平均4.4个。平均Shannon信息指数(I)和多态信息含量(PIC)分别为1.04和0.51。39个参试品种的遗传距离在0.03~0.70之间。在遗传距离为0.15时,可将39个品种划分为7类,其中地理来源一致或遗传背景相似的材料基本上聚为一类。30对引物的品种鉴定能力差异较大,每对引物能鉴定的品种数为3~16个。通过4对核心引物的组合可以鉴定全部39个参试品种,并依此构建了SSR指纹图谱。     

国家玉米主产区预试品种的SSR分析 Ⅰ. 预试品种的真实性和一致性评价

建立简单、快速、准确的品种真实性检测技术体系对于农作物品种管理有重要意义。本文应用SSR技术构建了2004～2005年国家玉米主产区预试参试品种的DNA指纹图谱,并根据SSR指纹图谱分析了参试品种的真实性和一致性。两年参试品种的分子标记差异均在3对引物以上,大多数品种的标记差异在10～12对引物之间,没有发现近似品种。选用19对SSR引物对2005年参试品种的一致性进行了分析,一致性好和比较好的分别占16%和69%,一致性差的和比较差的各占1%。本研究表明,SSR分子标记具备环境的稳定性、品种间变异的可识别性,最小的品种内变异和实验结果的可靠性,同时具有快速、准确、多态性丰富、可操作性强的特点,在玉米品种真实性和一致性的鉴定中具有良好的应用前景     

玉米品种SSR分子标记与田间小区种植一致性鉴定结果的比较

利用国家玉米区域试验品种DNA指纹鉴定所用的20对SSR核心引物,对10个参试玉米品种进行了一致性鉴定,检测SSR标记应用于玉米品种一致性鉴定的可靠性。每个品种选取20个单株,同时对这200个单株进行田间小区种植鉴定。结果显示：田间鉴定结果与SSR分子标记鉴定结果相吻合的植株占总株数的83%。同时表明,分子标记方法比田间小区种植鉴定的精确度高,存在分子标记未能检测到的性状差异,需要筛选与这些性状相关的标记添加到核心引物中。     

棉花品种指纹图谱构建及棉种鉴定技术研究

采用单粒棉种DNA快速提取方法,以18份陆地棉和3份海岛棉品种为材料,从78对棉花SSR引物中筛选出55对具有多态性的引物,并确定了33对棉种鉴定用的备选核心引物。通过构建棉花品种DNA指纹图谱,所选21份材料只需要6对引物就可以完全鉴别。该方法也可以用来鉴定棉花种子真实性和检测品种纯度。     

吉林省新育成大豆品种SSR指纹图谱身份证的构建

为快速鉴定和准确评价大豆新品种,以吉林省98个大豆品种为材料,从大豆20个连锁群上均匀分布的320对SSR标记引物中初筛出12对扩增稳定、条带清晰、多态性高的引物,为以最少引物组合有效区分品种,揭示参试材料间丰富的遗传多样性,又进一步依据每对引物多样性指数的高低,复筛出了由7个SSR标记构成的核心引物组合,并最终以此构建吉林省近年育成大豆品种的SSR指纹图谱身份证。结果表明:98个参试大豆品种都有唯一的指纹图谱身份证代码,说明所选用的7个SSR核心标记可靠且有效;此外,以SSR标记扩增的整体带型作为编码依据能够有效提高大豆品种指纹图谱身份证构建的准确性。本研究完善了大豆品种指纹图谱身份证技术体系,能够满足当前吉林省乃至全国大豆品种分子鉴定的需求。     

2个杂交籼稻和2个粳稻品种SSR指纹图谱的构建及双重PCR技术的初步研究

 用460对水稻SSR引物对5个杂交籼稻及其双亲和16个粳稻品种（系）进行了PCR扩增和聚丙烯酰胺凝胶电泳,筛选出12对稳定性好、多态性高、杂带少的SSR引物作为核心引物,构建了国稻6号和两优培九的SSR指纹图谱。另外,还筛选出9对核心引物,构建了粳稻品种盐稻8号和徐稻4号的分子指纹图谱。其中,筛选出国稻6号的特异性标记5个,两优培九的特异性标记3个,盐稻8号的特异性标记1个,徐稻4号的特异性标记2个。这些特异标记可用于种子纯度的快速鉴定。另外,挑选扩增条带稳定、特异性较好的引物组合,进行了双重PCR分析。     

利用SSR荧光标记构建37个中国橡胶树栽培品种指纹图谱

以37个橡胶树栽培品种为材料,利用SSR荧光标记技术进行DNA指纹图谱的构建和遗传关系分析,构建我国橡胶树栽培品种的SSR指纹图谱。共计筛选和确定出34对SSR引物作为构建橡胶树品种DNA指纹图谱库的核心引物,其中30对SSR引物可用于品种鉴定,4对SSR引物可作为备选引物用于后续新选育品种的鉴定。筛选和确定出的核心SSR引物表现出较高的多态性信息含量（PIC值）,其中PIC值高于0.5的引物高达97%,PIC值大于0.7的引物多达12对,PIC值大于0.8的引物有2对。引物rbm28的多态性最高,可作为最佳引物用于鉴定中国橡胶树主栽品系的遗传多样性,其他4条引物HESR025、HESR163、H-084、H-122同时具备较高的杂合率和多态性,可考虑作为备选引物。34对核心SSR引物在37个橡胶树品种中共检测到161个等位变异,平均每对引物检测到5.4个等位基因,平均PIC值为0.65,表现出高度多态性。利用30对核心SSR引物对37份橡胶树品种进行扩增,得到相关品种的准确SSR位点信息,获得包含37个橡胶树品种的标准DNA指纹图谱库,其中33个橡胶树品种均具有唯一的DNA特征指纹,可作为各品种特定的图谱,为橡胶树品种鉴定和育种实践提供依据。     

基于NYT 1433-2014中48对SSR引物的94份杂交稻亲本DNA分子数字指纹库研究

建立方法简便、分辨率高的水稻品种遗传多态性和真实性鉴定的分子指纹技术对于指导水稻育种和规范种子市场都具有重要意义。农业部颁布的水稻品种鉴定技术规程行业新标准是基于35个不同遗传特点的代表性水稻品种建立的SSR分子标记技术规程。本研究根据该标准方法,对94份杂交水稻亲本材料的遗传多态性和特异性进行了比较分析,结果表明,供试品种间至少具有3对以上引物扩增的DNA片段差异,即利用该标准能很好地区分供试杂交水稻亲本的遗传差异。对新标准中48对推荐引物的比较与分析表明,46对引物扩增的DNA片段多态性较高,而RM176和RM551两对引物扩增带多态性较低,因此在其染色体的其他位点可进一步研究多态性更高的分子标记。与标准中35个水稻品种的指纹库进行比较,发现了16个新的等位变异,这些位点可作为标准指纹库的信息补充,丰富标准库中的遗传信息。对94个杂交水稻亲本的分子指纹比较分析,发现23个亲本材料具有特异性分子标记,这些特异分子标记可应用于杂交组合的真实性以及杂交种子纯度的分子鉴定。根据供试亲本的数字分子指纹,构建了87个不育系与7个父本杂交的虚拟组合数字分子指纹库以及虚拟组合的真实性和纯度快速鉴定的特异数字分子标记。     

利用SSR标记构建水稻核心亲本指纹图谱

利用农业行业标准(NY/T 1433-2014)中公布的48对SSR引物构建27个水稻核心亲本指纹图谱,并获得所有亲本的SSR分子身份证号。48对SSR引物在27个亲本中共扩增到162个多态性片段,平均每对引物可检测到3.53个等位基因。能扩增到2个以上等位基因的SSR引物共45对,PIC值变化范围0.07~0.80,平均0.46。聚类分析结果表明,27个亲本的遗传相似性系数在0.593~0.944之间,基本上反映了不同材料间的亲缘关系。核心亲本SSR分子身份证的确定,不仅为品种鉴定提供了一个平台和标尺,便于建立品种的遗传指纹档案,还为保护品种知识产权,鉴定品种真伪及纯度提供了可靠依据。     

ISSR分子标记技术在甜菜育种中的应用

主要介绍了ISSR技术的原理及特点,对ISSR分子标记技术在甜菜上抗病育种、种质资源和品种遗传多样性分析、指纹图谱构建、SSR引物开发等应用进行综述。旨在为甜菜育种技术的发展提供参考。     

SSR分子标记技术在杂交玉米种子纯度鉴定中的应用

玉米种子的纯度是产量的保证,把握好纯度非常重要。传统形态鉴定法及同工酶法不能对非常相似的系及品种进行鉴定,SSR分子标记技术能克服传统技术的缺陷,利用筛选的10个玉米纯度鉴定核心引物,对玉米种子进行纯度鉴定;结合玉米DNA图谱可以对玉米种子进行真实性鉴定。技术简单,结果可靠,随着技术的成熟,成本的降低,将会得到普及。     

利用SSR技术构建陕西省主要玉米自交系的指纹图谱

采用100对玉米SSR引物分析了陕西省23个主要玉米自交系的遗传多态性,从中筛选出扩增带型清晰、稳定的30对引物作为构建23个玉米自交系指纹图谱的核心引物。每对核心引物可以检测到3～8个数目不等的多态性片段,共153个多态性片段,平均为 5.01个,PIC介于0.524～0.884之间,初步构建了陕西省玉米骨干自交系的指纹图谱。结果表明,利用SSR技术构建玉米自交系指纹图谱是可行的,可利用其进行玉米自交系及杂交种的真实性和纯度鉴定。     

甜菜DAMD引物筛选及品种快速鉴定

为了筛选适用于甜菜品种鉴定的DAMD分子标记,建立高效的甜菜品种鉴定方法,利用从文献中获得的29条DAMD引物对40个甜菜品种进行PCR扩增。结果表明:URP1F、OGRB01、URP4R、URP2R、URP6R、URP13R、URP32F、URP17R具有高多态性,8条引物总计可以扩增101条带,其中99条为多态性条带,多态性百分比为97.22%,可确定为鉴定甜菜品种的核心引物。根据扩增产物,可采用特征谱带法,单独使用引物URP6R或引物URP1F和引物URP17R共同使用鉴别40个甜菜品种。同时根据扩增产物建立0、1数据库计算出品种间遗传距离范围为0.01～0.25,在遗传距离为0.25时,可将40个甜菜品种分为2个类群。类群之下可分成多个亚群,通过遗传距离建立的聚类图也可将甜菜品种逐一鉴别。研究表明基于DAMD引物建立的高多态性指纹图谱对今后鉴别甜菜品种的真实性提供了高效快捷的方法。     

SSR分子标记鉴定橡胶树F1真伪杂种

早期快速鉴定橡胶树F₁杂交子代,获取真杂种对橡胶树优良品系的创育和遗传学研究具有重要的意义。以橡胶树优良品系‘PR107’和‘93-114’进行杂交,获得杂交组合子代,以亲本作为模板从104对SSR引物中筛选出3对多态性引物对35株杂交子代进行真实性鉴定,结果表明：35株杂交子代均鉴定为真杂种苗;筛选出的3对多态性引物都具有较高的杂种鉴定率,并验证了1对引物鉴定真伪杂种的可靠性,后续可作为橡胶树杂交子代真实性鉴定的理想SSR分子标记。     

利用ISSR标记分析20份甜菜品种的遗传多样性

针对来源于德国的18份甜菜品种和来源于瑞士的2份甜菜品种进行遗传图谱的构建和聚类分析。以5份甜菜种质资源为材料,对引物UBC801~UBC900等100个引物进行筛选,筛选出多态性好的ISSR引物7个。利用7个ISSR引物扩增适宜新疆种植的20份甜菜种质资源,共获得39个等位变异,每对引物检测到的等位变异数的变幅为3~8个,平均等位变异数5.6个。其中多态性条带为30条,7对ISSR引物的多态信息含量(PIC)的变化范围为0.6273~0.8360,平均为0.7650,20份参试品种遗传相似系数的变异范围为0.4615~0.9231,平均为0.6923。供试20份甜菜品种遗传多样性丰富。ISSR分子标记技术可以有效地用于甜菜品种资源评价和指纹图谱构建。     

利用SSR分子标记构建邯棉559、邯棉802和邯郸885的指纹图谱

为了保护国审品种邯棉559、邯棉802和河北省审定品种邯郸885的品种权，减少棉种企业的经营风险，保障棉农种上优质的棉花品种，选择了44对SSR核心引物构建邯棉559、邯棉802和邯郸885的指纹图谱。利用指纹图谱检测品种的真实性和纯度。这44对核心引物多态性好，鉴别能力强，广适性好。