酶解法制备大豆小肽的工艺研究

以豆粕为发酵原料,利用复合酶酶解方法制备大豆小肽,筛选碱性、中性蛋白酶和胰蛋白酶进行复配酶解豆粕。结果表明:复合酶的最佳配比为碱性蛋白酶∶中性蛋白酶∶胰蛋白酶为3∶2∶1;酶解条件:p H8.5,反应温度50℃,反应时间4.5 h,水解度为94.55%,苦味值为3;小肽显示分子量分布范围:≤1 000 Da可达74.67%以上,其中≤500 Da占55.61%以上。综上试验结果可知,对比单酶、双酶及3种酶酶解豆粕的水解度和苦味值两项指标,3种酶组合使用更适合于制备水解度高、苦味低的大豆小肽。     

大豆功能肽的研究进展

大豆功能肽是以大豆分离蛋白或者豆粕为原料酶解生成的具有生理功能的小分子量肽类。大豆功能肽的分子量小、溶解性好,在食品工业中的广泛应用。并且,具有降低血清胆固醇、降低血压、消除疲劳作用和抗氧化等许多活性作用。本文对大豆功能肽的特性、制备方法以及生物学活性等方面进行综述。     

大豆蛋白呈鲜组分的制备及其性质研究

大豆经酶解后可产生呈现鲜味的物质。为了研究产品中鲜味的来源及产生鲜味组分的主要组成，本研究以大豆分离蛋白为原料，经风味蛋白酶改性，感官分析后发现，水解度达到43％时的酶解液呈鲜较强、苦味较弱；该酶解产物过截留分子量为10000Da，6000Da，3000Da的超滤膜，分成四个组分，发现是平均分子量小于3000Da的肽组份，而大于3000Da和小于500Da的组分只有微弱的鲜味，苦味和涩味明显。研究结果同时发现该酶解产物与肌苷酸间有显著风味增强效果。     

抗氧化大豆多肽纯化的研究

利用超滤技术分离大豆多肽酶解物,得到分子量在5 KDa～10 KDa与小于5 KDa的多肽,利用高速逆流色谱技术(HSCCC)对分子量小于5 KDa的多肽进行分离,并利用反相高效液相色谱技术(RP-HLPC)进一步纯化,得到纯度为73.68%的大豆多肽.与未纯化的大豆蛋白酶解物相比,纯化后的大豆多肽清除超氧阴离子自由基和过氧化氢的能力分别提高了43.72%和71.64%.因此,该系列纯化方法所得产物的纯度高,抗氧化能力强,适合于抗氧化大豆多肽的制备.     

复合酶法制备澳洲坚果蛋白肽及其抗氧化活性研究

本研究以前期制备的澳洲坚果蛋白为原料,经复合酶（木瓜蛋白酶和中性蛋白酶）酶解制备澳洲坚果蛋白肽,采用水解度为指标,利用单因素试验与正交试验考察各酶解因素对澳洲坚果蛋白水解度的影响,同时通过不同分子量（3、10、30 kDa）的超滤离心管对制备的蛋白肽进行初步的分离,并基于DPPH自由基清除能力对不同分子量的澳洲坚果蛋白肽的抗氧化活性进行评价。结果表明：各酶解因素对复合酶酶解制备澳洲坚果蛋白水解度的影响依次为酶解初始pH>复合酶配比>酶添加量>酶解时间;最佳复合酶酶解条件为复合酶配比1∶5、酶添加量12 000 U/g、酶解液初始pH 9.0、酶解时间360 min,在此条件下澳洲坚果蛋白的水解度为21.88%;同时,通过分析不同分子量的澳洲坚果蛋白肽组分发现,不同分子量的澳洲坚果蛋白肽均具有抗氧化活性,分子量在3~10 kDa的肽段组分具有较强的抗氧化能力,其DPPH自由基清除能力达到80.97%,且随着蛋白肽组分浓度的增加,其抗氧化能力也逐渐增强。     

糖基化大豆蛋白酶解物的分离纯化及耐消化稳定性的研究

以糖基化大豆蛋白为原料,经碱性蛋白酶酶解制得具有抑制致病菌粘附功能的糖肽,并分析功能性糖肽的消化稳定性。酶解物用Sephadex G-25层析可获得表观分子量分别为20 000 Da、6 500 Da和小于3 000 Da组分。对酶解物胃蛋白酶和胰蛋白酶体外模拟依次消化2 h后,20 000~6 500 Da的大豆糖肽分子量变化不大,较稳定,而分子量小于3 000 Da的大豆糖肽中有5%被消化,稳定性略有变化。说明糖基化大豆蛋白酶解物其功能性成分可以较稳定存在于消化系统。     

大豆小分子多肽制备工艺和质量标准的研究

采用酶法水解脱脂豆饼粕制备具有生物活性的大豆小分子多肽,确定了先以粗胰酶预酶解5%豆饼粕蛋白,再以中性微生物蛋白酶进一步水解提取大豆小分子多肽的工艺流程.粗胰酶酶解最佳条件:添加量为9 000 U·g-1,酶解温度55℃,pH 8.5,时间6 h.中性微生物蛋白酶水解粗胰酶乳最佳条件为:加酶量8 500 U·g-1,pH 7.5,温度45℃,时间2 h.在此条件下,肽得率可达到73.98%.同时还构建了大豆小分子活性多肽的质量检测标准.     

Protex7L中性蛋白酶改性大豆分离蛋白的工艺研究

利用中性蛋白酶Protex 7L对大豆分离蛋白进行改性研究,以水解度和蛋白质分散指数为评价指标,确定了中性蛋白酶Protex 7L改性大豆分离蛋白的最佳酶解反应条件:加酶量13.5AU/g大豆分离蛋白(SPI)、反应温度55℃、底物浓度为10%、pH值为7.0,酶解时间为1h.在上述条件下大豆分离蛋白的分散性得到显著改善,蛋白质分散指数(PDI值)达到91.8%.     

双酶法制备大豆降胆固醇活性肽的研究

通过比较4种酶对大豆分离蛋白的水解效果,并通过单因素及L9(34)正交试验优化其水解工艺条件,研究其最佳水解工具酶及最佳酶解参数。结果表明:木瓜蛋白酶和植物蛋白酶联合应用可作为大豆分离蛋白的水解工具酶;其最佳酶解参数为:酶解温度55℃、初始pH7.0、底物浓度12%、酶添加量8%、植物蛋白酶与木瓜蛋白酶的质量之比为1∶2,水解度可达14.20%;用双蛋白酶水解大豆分离蛋白,水解度为14.71%的产物降胆固醇活性最高,对胆固醇胶束溶解度的抑制率为61.67%。     

酶法制备大豆多肽的研究

本文研究了以Alcalase碱性蛋白酶和风味蛋白酶水解大豆蛋白制备大豆肽的工艺。确定了酶水解的最佳温度、底物浓度、酶与底物浓度比,得到了Alcalase碱性蛋白酶和风味蛋白酶水解大豆分离蛋白的最佳水解工艺。     

Characterization of ACE Inhibitory Peptides from Mactra veneriformis Hydrolysate by Nano-Liquid Chromatography Electrospray Ionization Mass Spectrometry (Nano-LC-ESI-MS) and Molecular Docking

Food-derived bioactive compounds are gaining increasing significance in life sciences. In the present study, we identified angiotensin I-converting enzyme (ACE)-inhibitory peptides from Mactra veneriformis hydrolysate using a nano-LC-MS/MS method. Mactra veneriformis hydrolysate was first separated into four fractions (F1–F4) based on molecular weight by ultrafiltration. The fraction with molecular weight lower than 1 kDa (F1) showed the highest ACE inhibitory activity. F1 was then analyzed by a high throughput nano-LC-MS/MS method and sequences of peptides in F1 were calculated accordingly. The 27 peptides identified as above were chemically synthesized and tested for ACE-inhibitory activity. The hexapeptide VVCVPW showed the highest potency with an IC₅₀ value of 4.07 μM. We then investigated the interaction mechanism between the six most potent peptides and ACE by molecular docking. Our docking results suggested that the ACE inhibitory peptides bind to ACE via interactions with His383, His387, and Glu411 residues. Particularly, similar to the thiol group of captopril, the cysteine thiol group of the most potent peptide VVCVPW may play a key role in the binding of this peptide to the ACE active site.     

pH值和热处理对大豆肽稳定性的影响

分别采用Folin-酚法、SE-HPLC、火焰原子吸收分光光度法研究了pH值和加热处理对大豆肽的稳定性(包括溶解性、分子量分布、可溶性钙结合量)的影响.结果表明:在pH值3～11时对大豆肽的溶解性和分子量分布均无显著影响,pH值9时大豆肽的钙结合能力最大;高温热处理(温度为80℃、100℃)对大豆肽的溶解度无显著影响,但都不同程度的增加了大分子(>20 KDa)的相对含量,100℃时肽的聚合速度更快;80℃加热10 min提高了大豆肽的钙结合能力,热处理温度升高或加热时间延长均会导致钙结合能力的下降.     

醋制对黑豆蛋白含量及多肽ACE抑制活性的影响

为考察醋制对黑豆蛋白含量及多肽ACE抑制活性的影响,为对黑豆醋浸过程中蛋白组分及含量变化进行分析,并对相应ACE抑制肽活性进行测定。黑豆经醋浸不同时间后,采用顺序抽提法提取清蛋白、球蛋白、醇溶蛋白和谷蛋白,并采用凯氏定氮法及SDS-PAGE电泳进行定量和定性分析;各蛋白组分经胃蛋白酶水解,经超滤(截留分子量3 k D)后收集滤液,获得多肽组分,RP-HPLC法进行ACE抑制活性评价。结果表明:经醋浸14 d后,黑豆总蛋白含量变化幅度小于±0.5%;清蛋白含量由55.13%(0 d)降低至9.61%(14 d);球蛋白由7.04%(0 d)增加到20.34%(14 d);醇溶蛋白由0.81%(0 d)增加到1.72(14 d);谷蛋白由21.11%(0 d)增加到59.45%(14 d),含量最高。醋浸处理降低了清蛋白源多肽的ACE抑制活性,但提高了球蛋白、醇溶蛋白及谷蛋白多肽的ACE抑制活性,其中,谷蛋白多肽抑制率由18.18%(0 d)增加至37.58%(14 d),抑制活性升高。醋浸可改变黑豆各蛋白组分的含量和对应多肽的ACE抑制活性,其中,谷蛋白含量及其多肽ACE抑制活性均有增加。研究结果表明可进一步采用分离纯化技术从谷蛋白多肽中获得高活性降压肽。     

大豆肽的制备及其在养殖业中的应用

大豆肽是大豆蛋白经水解得到的低分子肽混合物,具有比大豆蛋白更优越的理化特性和生理功能,存很多领域引起广泛关注.综述大豆肽的制备方法及其在养殖业中的应用现状,为大豆肽应用于饲料添加剂提供参考.     

豆粕固态发酵产活性肽的发酵条件优化

以豆粕粉为原料,采用固态发酵法,接入产酶能力较强的米曲霉、黑曲霉和混合细菌进行发酵,以多肽转化率为指标对发酵过程中的发酵条件进行优化,单因素试验优化的发酵条件为:发酵时间102 h,发酵温度32℃,接种量4%。采用响应面分析法确定最适发酵工艺条件为:接种量2.6%,发酵温度32℃,发酵时间96～98 h,得到的大豆肽转化率为38.13%。层析柱分析得到分子量在500～1 000 Da之间的肽段是具有特殊生理活性的功能肽。     

不同分子量大豆多糖的表征和抗氧化研究

以酸提大豆多糖为原料,通过控制降解条件得到4种不同分子量的大豆多糖样品,分子量分别为550,347,285和21 k Da。对4种多糖进行了傅里叶红外(FT-IR)分析和X射线衍射(XRD)分析,并分别测定了4种多糖对DPPH自由基、羟基自由基的清除能力以及还原能力的大小,结果表明:4种大豆多糖都有一定的抗氧化活性,但抗氧化活性高低有所不同,分子量为285 k Da的大豆多糖对自由基的清除能力最强,还原能力最强,分子量为21 k Da的大豆多糖对自由基的清除能力最弱,还原能力最弱。     

大豆小分子肽增强小鼠免疫力的实验研究

为通过动物实验检测大豆小分子肽(分子量300～700 Da)对免疫系统的影响及其增强免疫力的作用,分别给受试组小鼠经口灌胃低、中、高剂量(分别为3、6、9 g.kg-1.d-1)的大豆小分子肽溶液30 d后,进行各项免疫指标的检测。结果显示:大豆小分子肽能促进小鼠脾淋巴细胞的转化和迟发型变态反应,提高抗体生成细胞数和血清溶血素水平,增强腹腔巨噬细胞的吞噬能力;但对小鼠的NK细胞活性,单核—巨噬细胞的碳廓清能力,体重及免疫器官重量均无显著影响。这表明,大豆小分子肽具有增强机体免疫力的作用。