橡胶树PR107原生质体的分离和培养研究

以橡胶树PR107花药愈伤组织建立的胚性悬浮细胞为材料,进行原生质体的酶解分离和培养研究。结果表明：在酶组合为纤维素酶1.5 %+果胶酶0.15 %+离析酶0.5 %的酶解处理下,继代培养第6天、直径小于0.5 mm悬浮细胞团获得最高产量的原生质体,达到2.2×107个/mL PCV;原生质体在看护培养基上培养1周后观察到细胞开始发生分裂,培养2周后细胞分裂形成含8-10个细胞的小细胞团。看护培养45 d后原生质体持续分裂并发育成肉眼可见的小愈伤组织。     

苎麻不同来源原生质体的分离和培养的比较研究

比较了苎麻子叶与子叶悬浮细胞两种材料的原生质体在分离和培养时的差异。取真叶初露期的绿色子叶，用３％纤维素酶、０．５％离析酶的０．６Ｍ甘露醇混合溶液处理５小时，原生质体产量可达５×１０￣６个／ｇｆｒ·ｗｔ，但其原生质体以海藻酸钠包埋方式培养在附加２，４—Ｄ０．５ｍｇ／Ｌ、ＫＴ０．５ｍｇ／ＬＫＭ＿８Ｐ培养基上，原生质体仅发生二次分裂；子叶悬浮细胞只有在纤维素酶４．５％，离析酶０．８％、半纤维素酶０．８％的０．５５Ｍ甘露醇混合液中处理１１小理，原生质体才达最大程度释放，每克悬浮细胞可得原生质体２×１０￣６个，但其原生质体易于诱导分裂，在与前者相同的培养条件下，５０天左右可形成肉眼可见的小愈伤组织，该愈伤组织经过扩增，在不同的培养基上可诱导芽、根的分化，从而形成完整植株。     

咖啡叶片原生质体分离条件的研究

以中粒种咖啡（Coffea. canephora）叶片组织为材料,研究酶液组合、酶解时间、酶液渗透压及预处理措施对其原生质体分离效果的影响,以期确定能够酶解出高数量且高活力的原生质体的酶解条件。结果表明：获得有活力原生质体的最佳酶液组合为2％纤维素酶+0.5％果胶酶+0.3％离析酶,同时酶解时间为20 h、酶液渗透压即甘露醇浓度为0.7 mol/L,预处理措施为黑暗24 h的咖啡叶片组织得到8.1×105个/g、活力达到73％的原生质体。     

人参悬浮细胞原生质体培养的研究

以人参幼叶为外植体,在MS+2ppm2.4—D+0.5ppmKT+500ppmLH培养基上诱导产生愈伤组织.将生长旺盛的愈伤组织转移到MS+1ppm2.4—D+O.5ppmNAA+0.5ppmKT+500ppmLH液体培养基上建立细胞悬浮系.用含2.0%Onozuka R—10,0.5% Pectinase和11%甘露醇的混合酶液在PH5.8、25℃下分离原生质体.原生质体在培养后的第3天形成再生细胞并进行第一次分裂,第8天形成细胞团,40天形成愈伤组织.当再生的愈伤组织转移到MS+0.1ppmNAA+0.5ppmKT上时分化产生大量不定根.     

大豆幼苗根和叶片原生质的分离与纯化

研究了大豆幼苗根和叶片原生质体的分离、纯化方法及其影响因素.结果表明:适宜大豆根和叶片原生质体分离的酶种类、浓度分别为CPW-13M{CPW(细胞清洗液)+13%(W/V)甘露醇}+3%纤维素酶(cellulose R10)+1.1%果胶酶(macerozyme R-10)+1.0%半纤维素酶(hemicellulase)和0.15%CaCl2·2H2O+9%甘露醇+1%cellulase R-10+0.20%pectolase Y-23,pH 5.8,酶解温度为28℃.在根酶解时间为16 h时,原生质体产量可高达1.46×105个·g-1FW,活力达57.8%;叶片酶解时间为4 h时,原生质体产量可高达1.74×106个·g-1FW,活力达70.3%.对于根而言,从产量和活力两方面考虑,其原生质体用23%蔗糖和CPW-18M混合后的下沉法纯化效果较好,而叶片用25%蔗糖的上浮法纯化效果较好.     

毛叶枣与冬枣原生质体分离体系的建立

研究了毛叶枣及冬枣的原生质体分离条件,为以后应用体细胞融合技术创造优异的毛叶枣体细胞杂种材料提供技术支持。结果表明:枣叶片分离出的原生质体活性显著高于悬浮培养物,但是产量低于悬浮培养物分离出的原生质体。毛叶枣酶解所需酶液最佳浓度为纤维素酶10g/L 离析酶4g/L 甘露醇0.7mol/L;冬枣酶解所需酶液最佳浓度为纤维素酶15g/L 离析酶4g/L 甘露醇0.7mol/L,酶解时间均为14￣16h。     

播娘蒿与甘蓝型油菜的原生质体融合与植株再生

以播娘蒿叶片和甘蓝型油菜子叶为材料提取原生质体.采用PEG-高pH、高钙附加DMSO融合方法,液体浅层静置培养,研究影响播娘蒿与甘蓝型油菜原生质体融合的因素,获得了再生植株.结果表明:4%纤维素酶 0.5%离析酶 5mmol/L MES酶解10b可获得高产率播娘蒿原生质体,1%纤维素酶 0.2%离析酶 3mmol/LMES酶解14h可获得高产率油菜原生质体;30%PEG 0.3mol/L葡萄糖 50mmoL/L CaCl2·2H2O 15%DMSO可获得10%的融合率;改良B5培养基的原生质体培养效果最好;最佳分化培养基为MS 4.0mg/L 6-BA 0.3mg/LNAA 5.0mg/L AgNO3;最佳生根培养基为MS 0.1mg/LIBA 0.1mg/L NAA.     

番木瓜种子原生质体制备技术的研究

以番木瓜（Carica papaya L.）成熟种子为材料,通过正交和单因素实验研究不同酶液浓度、甘露醇浓度、酶解时间、酶解pH等因素对番木瓜种子原生质体分离的影响。结果表明,高存活的番木瓜种子原生质体分离最佳条件是酶液组成为2.2％纤维素酶+0.6％离析酶、甘露醇浓度为0.7 mol/L、酶解9 h、酶解pH值为5.5。本研究奠定了原生质体遗传转化的基础,为番木瓜种子相关活性物质代谢途径的研究创造了良好的条件。     

马铃薯单细胞分离技术的研究

以马铃薯栽培品种“甘农薯1号”的无菌苗、子叶以及已建立的细胞悬浮培养系为材料,分别用酶解法和过滤细胞悬浮培养系的物理方法进行了马铃薯单细胞分离技术的研究。结果表明,酶解时,果胶酶浓度为0.20%～0.25%,解离4h获得的单细胞产量最高,且单细胞分裂频率可达16%以上;另外,酶解愈伤组织分离单细胞,比酶解子叶和叶片效果更好。而在用细胞悬浮培养物进行单细胞分离研究时,发现瓶壁法是一种最好的细胞悬浮液继代方法,可直接获得90%的单细胞频率,且细胞形状圆、胞质浓厚。采用过滤法分离单细胞,可得到98%的单细胞频率;3层细胞筛过滤法可有效提高所得单细胞的植板率。总体比较,过滤细胞悬浮培养物的物理操作方法获得的单细胞比酶解法获得的单细胞分裂能力更强。     

荔枝胚性悬浮培养物的建立,保持和优化原生质体分离的研究

将松散颗粒状的荔枝胚性愈伤组织转入液体培养基,２－３周后即可建立起优质的悬浮培养物,长时间悬浮培养后,荔权胚性悬浮培养物的生长势和分化能力下降,但液体培养基＋固体培养基交替培养可使其保持稳定良好的状态。材料来源,继代时间,酶液浓度,酶液渗透压和高渗预处理对胚性悬浮培养物的原生质体分离均有明显影响。     

大豆与豌豆原生质体融合的初步研究

我们采用PEG—高pH—高钙的方法对大豆和豌豆原生质体进行融合,获得了10—36％的融合率。大豆原生质体游离的混合酶液为2％ Cellulase ONOZUKA R-10,2％ Hemicellulase-Rhozyme, 1％ Pectinase Sigma;豌豆原生质体游离的混合酶液为2％Cellulase ONOZUKA R-10,2％ Hemicellulase sigma,1％ Pectinase Sigma。原生质体的密度对融合的影响很大,以10~4—10~(?)/毫升的密度适合原生质体融合及有利细胞分裂。品种间融合率有差异。融合体用高国楠的KM8P培养基培养,经过多次分裂,获得了愈伤组织。     

硼对大豆愈伤组织的细胞结构及形态的影响

硼是植物生长发育必需的微量元素之一,对维持植物细胞壁与细胞膜的结构和功能发挥起着重要的作用.在对大豆愈伤组织诱导培养技术成熟的基础上,研究高浓度的硼对大豆愈伤组织的细胞结构和细胞形态的影响,探讨组织培养中硼对愈伤组织诱导与再生的调节作用采用植物组织培养的方法,在硼酸含馈不同的培养基上诱导大豆下胚轴产生愈伤组织,并进行继代培养试验结果表明:下胚轴在硼酸浓度大于70 mg·L-1的培养基上诱导20 d后.一些新生的愈伤组织结构疏松,细胞分散,细胞间的正常连接无法形成.把这些结构疏松的愈伤组织在正常的培养基MS+2,4-D0.4 mg·I-1上进行继代试验,发现细胞仍具有分裂能力,新生的愈伤组织细胞结构更加松散,单细胞的数日增多,并凡细胞的形态也符异.     

大豆原生质体的游离、培养和愈伤组织的生成

从大豆未成熟荚的子叶游离出大量原生质体,经培养保持分裂,并获得了肉眼可见的愈伤组织。     

花生与其近缘野生种间细胞融合及培养

对花生与其近缘野生种间细胞融合及培养方法进行研究。将花生品种鲁花14号的体细胞胚和近缘野生种A．cannadacii的胚性愈伤组织分离得到的原生质体,用PEG方法融合后,培养在添加1mg/L NAA和5mg/L BAP的改良MS液体培养基中。培养4d后,细胞开始分裂。之后部分细胞继续分裂,并形成小愈伤组织。     

大豆单细胞培养和原生质体游离的细胞形态观察

本文将形状不同的大豆悬浮培养细胞分成三种类型;园形和椭园形(A类)稍长形(B类)和长形细胞(C类)。A类细胞分生能力强,经多次分裂形成多细胞团;C类细胞多数为老化细胞,能分裂但不能形成细胞团;B类细胞在悬浮细胞中含量很少,大部分能分裂形成细胞团。在用悬浮培养细胞游离原生质体的过程中,A类细胞几乎全能游离出原生质体,B类细胞大部分能游离出原生质体,C类细胞几乎不能游离出原生质体。因此,在游离悬浮培养细胞时,在原生质体中含有少量未去壁的C类细胞和极少数B类细胞可不必用其它的方法分离出去,因为C类细胞不能形成细胞团,那么经培养形成的愈伤组织和分化再生的完整植株可能几乎都是由原生质体产生的。     

大豆原生质体培养经胚胎发生高频率再生植株

大豆原生质体培养诱导再生植株一直为国内外学者所关注。如Kao(1970)和Miller等(1971)从悬浮培养的大豆细胞分离出原生质体,经培养获得了愈伤组织。但在以后的多年中进展不够大。据报道,已从幼荚子叶、幼苗根、叶肉组织和悬浮培养细胞等外植体游离出原生质体,经培养获得愈伤组织,并进行了大量的分化研究,但最终都未能得到再生植株。卫志明和许智宏于1988年首次由大豆幼荚子叶分离出     

大豆花粉离体培养获得愈伤组织

大豆花穗置低温(7°—8℃)冷处理5、8、10、12天,取花药置培养皿中,用盖玻片压出花粉粒,去掉残渣,加入液体培养基。基本培养基是改良的B_5,参照高国楠原生质体培养基附加糖、椰乳、水解酪蛋白等有机物,0.05—0.2mg/l 2.4—D,0 1～0.5mg/l Zeatin,0.5—1mg/l NAA。20天后见花粉分裂,30天见细胞团,40—50天形成肉眼可见的愈伤组织。分裂的花粉最后达接种时培养皿中花粉的60—70％以上。活体观察花粉分裂大致有多细胞型和游离核型。将直径2mm大小的愈伤组织转至固体培养基继代增殖而获得大量愈伤组织。分化培养获得根,未见芽的分化。     

一种机械分离马铃薯异核体改进的培养方法

把不同马铃薯双单倍体基因型间融合原生质体进行微滴的液体培养。如果这些融合了的原生质体,通过气相与其它活细胞接触,便能明显地看到它的分裂和持续的发育。影响这种效应的因子尚不清楚,然而在这种培养条件下,从马铃薯各种融合异核体中获得再生体细胞杂种的愈伤组织是可能的。     

柑桔细胞悬浮培养及再生植株的研究

取锦橙(Citrus sinensis Osbeck)试管实生苗下胚轴切段诱导愈伤组织,继代培养,再以该愈伤组织制备悬浮细胞系。在附加KT(0.75mg/L)和2,4—D(0.5mg/L)的MS液体培养基中悬浮单细胞能正常分裂和生长,形成多细胞团和愈伤组织,在MT添加BA(1.5mg/L)和IAA(0.5mg/L)的固体培养基上能进一步诱导小芽并形成完整小植株。文中还探讨了建立悬浮培养细胞系的最适蔗糖浓度以及单细胞悬浮培养过程的细胞密度和培养液的pH值变化情况。     

香蕉枯萎菌原生质体形成与再生条件

通过对菌丝菌龄、酶液浓度、酶解时间、酶解温度、渗透压稳定剂的种类和浓度等因素的实验研究,得到了一种制备香蕉枯萎菌(Fusarium oxysporum f.sp.cubense,FOC)原生质体的有效方法,并在固体再生培养基上实现了原生质体的再生,再生率为22.5%。