3种热带兰感染2种病毒的症状探讨

建兰花叶病毒(Cymbidium mosaic virus,CymMV)和齿兰环斑病毒(Odontoglossum ringspot virus,ORSV)是危害海南兰花最普遍的2种病毒。CymMV侵染蝴蝶兰后引发黄化斑、坏疽凹陷斑、畸形生长等多种症状;侵染石斛兰引发花叶、黄化斑、全叶黄化或红化、契形坏死、疱状突出等症状;侵染文心兰引发花叶、黄化、坏死、畸形生长等症状。ORSV的症状种类则相对简单,蝴蝶兰上引发环斑、系统性黄化、凹陷坏死、疱状突出等症状;文心兰上主要表现花叶;石斛兰上未检测到ORSV。     

文心兰2种主要病毒的快速检测及其组培脱毒方法

利用感染了建兰花叶病毒和齿兰环斑病毒的文心兰叶片,建立同步检测文心兰2种病毒的双重RT-PCR方法,该方法可一次性扩增出2种病毒的DNA条带,最低可检测到相当于1μg的带毒叶片。同时采用花梗组织培养脱毒并结合培养基添加病毒A的脱毒方法,对感染2种病毒的文心兰进行外植体脱毒试验,获得文心兰组培苗脱毒方法。用建立的双重RT-PCR检测脱毒效果,脱毒率为75.3%。     

兰花花色化学及相关功能基因研究进展

总结近年来蝴蝶兰、石斛兰、文心兰等几类重要兰花的花色表型、花色素化学成分、参与花色素生物合成的功能基因的分离和功能研究等方面的研究进展。探讨转录组测序(RNA-Seq)和病毒诱导的基因沉默(VIGS)技术在兰花花色功能基因研究中的应用前景,并提出一种兰花花色相关功能基因研究策略。     

海南番木瓜PRSV和PLDMV病毒发生情况及分子鉴定

对海南昌江、乐东、澄迈、文昌和三亚5个主要番木瓜产区的病毒病发生情况进行调查。对76份番木瓜疑似病毒样品进行检测,检测结果表明海南番木瓜病毒病主要有2种：由番木瓜环斑病毒（Papaya ring spot virus,PRSV）引起的番木瓜环斑病毒病和由番木瓜畸形花叶病毒（Papaya leaf-distortion mosaic virus,PLDMV）引起的番木瓜畸形花叶病毒病。其中,番木瓜环斑病毒病最为常见,检出率达77.63％,是影响海南地区番木瓜产业健康发展的主要病毒病;畸形花叶病毒病发生率很低,仅检出2例番木瓜畸形花叶病毒病样品。以PRSV病毒基因组P1和Hc-Pro作为靶标基因进行分子克隆、测序,结果表明海南地区PRSV病毒可明显分为2个株系：HN-PRSV-1株系和HN-PRSV-2株系。此外,基于CP基因的系统进化树分析结果表明在海南新发现的PLDMV病毒可能源于台湾和日本。本研究可为开展番木瓜花叶病的防控和创制抗花叶病毒番木瓜新种质提供数据参考。     

西番莲病毒病

西番莲病毒病是西番莲第二大病害.在一些国家和地区,已成为限制西番莲生产发展的主要因子.目前,较为明确的西番莲病毒病主要有3种:即西番莲木质化病毒病、西番莲花叶病毒病和西番莲环斑病毒病.其中以木质化病毒病的发生最为普遍、为害最重,造成的经济损失也最大.西番莲病毒病的传播方式主要有机械汁液传播,嫁接和扦插的苗木带毒传播以及媒介昆虫传播等,但未见有种子带毒传播.在防治上,抗性的利用以及抗病品种的选育是主要的措施:而做好田间卫生,及时防治传播媒介也是关键.有关西番莲病毒病交互抗性方面的探讨是今后一个主要研究方向.     

两种主要兰花病毒的快速检测初报

采用组织涂抹酶联免疫吸附技术，对本单位近年引入的部分优良洋兰品种进行２种主要病毒（即ＯＲＳＶ和Ｃｙｍｖ）的快速检测。结果表明，蝴蝶兰和心兰极易感染Ｃｙｍｖ病毒，带毒品种分别占被测品种的４５．５％和５７．１％；石斛兰对这２种病毒具有较强的抗性，大花蕙兰较易感染ＯＲＳＶ病毒。     

我国大豆病毒病发生、危害情况发展趋势及其原因分析和防治建议

本文为作者从1977—1985年在九个省市38个(市)县24个科研单位40个乡338个地块对大豆病毒病田间调查和实验室、温室试验的结果及分析后提出的防治建议。大量资料指出:品种资源圃内一些种子带毒率很高的品种是主要的毒源中心,杂交亲本和新品种在选育繁殖过程中往往已带有病毒,致使新品种在推广后遇到流行年发病较重,又波及附近的地块,并可远距离传播至轻病地区,潜在威协很大。对大豆病毒病应进行综合治理,除抗病育种外须着重应用现代检测技术,选育无毒种子,建立制度,严格控制良种的带毒率,科学治理育种圃的毒源,防止蔓延,达到将病毒病压低至危害限度以内。     

蝴蝶兰与萼脊兰光合特性的比较

以蝴蝶兰和萼脊兰为材料,对其叶片的CO_2吸收速率、可滴定酸含量和叶绿素荧光参数的昼夜变化进行研究。结果表明:蝴蝶兰和萼脊兰的CO_2交换方式都具景天酸代谢途径(CAM)的特点,其叶片的净CO_2吸收速率分别在22:00和凌晨0:00左右达到最大值。蝴蝶兰暗适应下的叶绿素荧光参数最小荧光F_o、最大荧光F_m、最大可变荧光F_v、可变荧光产量与最大荧光产量之比F_v/F_m、光系统Ⅱ潜在活性F_v/F_o均高于萼脊兰。蝴蝶兰和萼脊兰叶绿素荧光参数日动态变化结果表明,蝴蝶兰所需要的光照强度显著低于萼脊兰,太高的光强将引起植株的光抑制,从而引起光化学效率的下降。总的来说,蝴蝶兰为专性CAM兰花,萼脊兰属兼性CAM兰花,在蝴蝶兰与萼脊兰杂交后代的栽培中,在避免过高的光强引起其光抑制的同时,可提供特定的环境条件以诱导其叶片更多地进行C_3途径光合,尽量减少CAM途径光合,从而有效地促进其干物质的积累,促进杂交后代的生长。     

大豆病毒的提纯鉴定和电镜观察

危害我国大豆的主要病毒病有三种,即花叶病、芽枯病和矮化病。应用差速离心法成功地从京黄3号、科黄2号和铁丰18号分离出花叶病的病毒;从丹东青豆的杂种中分离出芽枯病毒。花叶病毒颗粒为长而弯曲的线形,平均长度为661.2nm,宽度为13.9nm。芽枯病的病原为球形的烟草环斑病毒、平均直径为29.5nm。花叶病与籽粒褐斑的关系的研究结果证明,种子产生斑驳是由大豆花叶病毒引起的。抗病品种的褐斑率明显低于敏感品种。根据病毒病的鉴定结果,京黄3号等感染的花叶病,植株矮化不明显,种子容易生褐斑,称之为典型的普通花叶病(SMV—G);而铁丰18号感染的花叶病,植株矮化明显,籽粒不生褐斑,称之为矮缩型花叶病(SMV—D)。供试品种中抗花叶病最强的品种是科黄3号。丹东青豆的杂种以及日本的宫城白眉和大青豆则是烟草环斑病毒(TRSV)感染的芽枯病。这些品种严重染病,颗粒无收,利用价值不大。     

海南岛兰花种质资源考察报告

对海南岛15个县(市)不同生态类型区兰花种质资源进行了全面的考察,共搜集了野生兰57属161种(变种、型),栽培兰14属(剔除与野生种重复)50余个品种,其中海南特有种21个,东亚特有属8个,海南新记录属6个,海南新记录种13个,保存活种质180余种(品种、型),10多种野生兰有观赏价值。通过实地考察,基本摸清了海南岛兰花种质的分布(水平分布和垂直分布)、生态环境、多度、花果期及形态特征等情况。     

Incidence of Cymbidium mosaic virus and Odontoglossum ringspot virus affecting Oncidium orchids in Hainan Island,China

Oncidium is the most popular cut flower for the orchid industry in Hainan Island and several viruses have been reported to negatively impact their growth and yield. A survey of Cymbidium mosaic virus (CymMV) and Odontoglossum ringspot virus (ORSV) in Oncidium orchids cultivated in Hainan Island was conducted during 2009–2012 with indirect enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). A total of 171,585 samples from adult plant, tissue-culture flask, seedling, and medium seedling were tested for CymMV and ORSV. Of the 24,125 adult plant samples from eighteen commercial orchid farms, 77.58% were infected with CymMV, 16.04% with ORSV, and 10.19% with both CymMV and ORSV. Of the 67,080 samples cultivated in tissue-culture flasks from eight tissue culture laboratories, 41.18% were infected with CymMV, 6.11% with ORSV, and 4.46% with both CymMV and ORSV. Of the 54,450 seedling samples from eight seedling nurseries, 53.20% were infected with CymMV, 9.00% with ORSV, and 5.23% with both CymMV and ORSV. And of the other 25,930 medium seedling samples from twelve medium seedling nurseries, 44.96% were infected with CymMV, 7.90% with ORSV, and 5.15% with both CymMV and ORSV. Plant material must be tested for the presence of viruses before being used for mass production by tissue culture, and sanitation during propagation of orchid plants and harvesting of flowers is essential in order to prevent the virus from spreading. These findings emphasize the need to implement a virus-free certification programme that would greatly enhance the management of these two prevalent viruses in the Hainan orchid industry.     

海南岛兰科植物区系的组成及其特征

海南岛是我国兰科植物分布最集中的地区之一,目前已发现有78属214种。其中,中国特有种31种(包括海南特有种14种),非中国特有种但在中国仅见于海南岛的有20种。种数在10种以上的属有羊耳蒜属(Liparis)、石斛属(Dendrobium)、毛兰属(Eria)、石豆兰属(Bulbophyllum)和兰属(Cymbidium)。海南岛兰科植物属的地理成分可划分为12个分布型和变型,其中热带亚洲成分占总属数的51.3%,热带分布属有71属,占绝对优势。海南岛兰科植物的生活型多样,附生兰有43属,地生兰有32属,腐生兰5属(其中羊耳蒜属和兰属中存在附生和地生2种生活型)。多个种在叶型和花色上变异较大,可作为优良育种材料。与邻近地区相比,海南岛兰科植物与西双版纳共有属最多(为56属),其次依序为台湾、广东、广西和福建。虽然海南岛与台湾和西双版纳同处热带北缘,受热带季风气候影响,但其兰科植物在属、物种和特有种的数量上比后两者要少。总的说来,海南岛的兰科植物区系较为多样,与亚洲热带兰科植物区系亲缘关系密切。     

文心兰 PAD4 基因克隆及表达分析

为了研究文心兰（Oncidium hybridum）抗病相关基因 PAD4 在文心兰抗病种质资源培育中的功能,采用 RT-PCR 结合 RACE 法,从巧克力文心兰(Oncidium Sharry Baby ‘Sweet Fragrance’)中克隆得到一条全长 2 214 bp 的基因的 cDNA 序列,开放阅读框长 1 894 bp,预测可编码 647 个氨基酸,5′UTR 长度为 65 bp,3′UTR 长度为 255 bp。生物信息学分 析表明：PAD4 编码的蛋白属于水解酶超家族,有 6 个跨膜螺旋,无信号肽,亚细胞定位预测其主要定位于细胞质膜上。 系统进化树表明,文心兰 PAD4 与同为兰科植物的小兰屿蝴蝶兰（Phalaenopsis equestris）、铁皮石斛（Dendrobium catenatum）、深圳拟兰（Apostasia shenzhenica）亲缘关系最近。同源分析结果显示,与铁皮石斛的 PAD4 蛋白同源性最 高（78.08%）。实时荧光定量 PCR 分析显示,PAD4 在文心兰不同组织部位中都有表达,在假鳞茎中的表达量最高,其 次是下端叶,在根中的表达量最低。接种软腐病病原菌显示,PAD4 在感病文心兰中表达量上调,侵染后 4 h 时快速响 应并达到最高值。SA（salicylic acid）和 CaCl2 都能够诱导 PAD4 的表达,都在 24 h 时达到最高峰。研究表明,PAD4 基因可能在文心兰抗病过程中有重要作用。     

建兰花叶病毒的分离,鉴定及检测研究

从石斛兰病株中获得一个病毒分离物，利用曼陀罗进行分离纯化和繁殖，并通过梯度离心获得提纯病毒，经生物学、血清学鉴定及电镜观察，鉴定该分离物属于建兰叶病毒。分别用纯化病毒及ＳＤＳ－ＰＡＧＥ回收病毒外壳蛋白免疫家兔。获得２种特异性抗血清，并用ＳＰＡ－ＥＬＩＳＡ方法对兰花样品进行了检测研究。     

兜兰查尔酮合成酶基因的克隆与表达分析

以同色兜兰为试材,采用RT-PCR和RACE方法从花中获得一个兜兰查尔酮合酶基因（chalcone synthase,CHS）的cDNA全长,命名为PcCHS,GenBank登录号JQ030889。序列分析表明,PcCHS全长1 424 bp,包含106 bp的5′非编码区、133 bp的3′非编码区和一个长度为1 185 bp编码394个氨基酸的开放阅读框。氨基酸序列分析显示,PcCHS具有CHS家族保守的功能活性位点和特征多肽序列。序列比对表明,PcCHS与兰科植物的蝴蝶兰、文心兰和石斛兰等的CHS蛋     

文心兰生物钟相关基因 PRR7 克隆与表达分析

利用转录组文库中的 PRR7 基因序列,从文心兰盛开期花瓣中扩增得到文心兰 PRR7 基因的 2 个成员,分别命名为 OnPRR7-1（GenBank 登录号：MG543993）和 OnPRR7-2（GenBank 登录号：MG543994）。OnPRR7-1和 OnPRR7-2 基因全长分别为 2 091 bp 和 2 154 bp,分别编码 696 和 717 个氨基酸大小的蛋白质序列。蛋白质二级结构分析表明,OnPRR7-1 和 OnPRR7-2 均为疏水性蛋白。BlastX 比对和系统发育分析表明,OnPRR7-1 和OnPRR7-2 基因和铁皮石斛和小兰屿蝴蝶兰的 PRR 基因同源性比较高。实时荧光定量 PCR 分析结果表明,OnPRR7-1和 OnPRR7-2 基因均呈现昼夜节律性表达格式,并且在正午 12 点时表达量达到峰值;在花发育和衰老过程中,OnPRR7-1 和 OnPRR7-2 基因在花瓣中的表达量均在绽口期和衰老初期达到峰值,表明其有可能在花发育的开花和花衰老的过程中发挥作用。