向日葵黄萎病菌不同培养型产毒能力和致病力分化

为了明确向日葵黄萎病菌间毒素产生能力以及致病力存在着分化现象,本文选取5种不同培养型的向日葵黄萎病菌对其菌落生长速度、粗毒素含量、毒素致萎活性及致病力进行测定。结果表明,不同培养型的黄萎病菌分生孢子的形态没有显著差异,但是菌株生长速度、粗毒素产生量及其致萎能力存在一定的差异。粗毒素产生能力高的菌株,其致萎能力也强,如菌株V33(产生大量微菌核)、V21(不产生微菌核)、V27(产生一定量的微菌核及气生菌丝)的粗毒素分泌量分别为0.36、0.34、0.23mg/mL,其72h的致萎指数为58.33、52.08、37.50。采用纸钵撕底蘸根法对供试菌株的致病力进行测定,结果表明,不同培养型黄萎病菌的致病力存在一定的分化现象。其中致病力最强的菌株是V33,其病情指数为53.97;其次是菌株V21和V39(产生大量微菌核)其病情指数分别为45.91和43.35;菌株V27的致病力最弱,其病情指数为37.44。相关性分析的结果表明,菌株致病力的强弱与其分泌的粗毒素含量呈显著的正相关关系（R2=0.8169,P<0.05）,但与其菌落生长速度以及微菌核的数量没有相关性。向日葵黄萎病菌毒素的分泌量是决定其致病力分化的关键因子。     

一种快速检测向日葵地块土壤中黄萎病菌微菌核的新方法

由大丽轮枝孢菌侵染引起的向日葵黄萎病是一种重要的土传病害,微菌核是该病害主要的初侵染来源。目前,土壤中大丽轮枝孢菌微菌核的定量检测方法多操作步骤复杂繁琐,如利用PCR方法进行检测,对仪器设备和操作人员的素质都有较高的要求,而常规的土壤梯度稀释湿筛法的实验周期长且检测效率低,因此,建立一种快速定量检测土壤中大丽轮枝孢菌微菌核的方法,对于向日葵黄萎病的预报预测和防控非常重要。为了能够快速的定量检测土壤中微菌核的数量,以期探明不同耕作方式地块中土壤微菌核数量的差异,本实验建立了一套操作相对简单,实验周期较短的微菌核快速分离和定量检测的方法,即采样器—干筛法。该方法将微生物采样器和选择性培养基相结合,基于微生物采样器的撞击法原理,使土壤微生物粒子加速撞击到选择性培养基的培养皿表面,经培养后可见单菌落形成。利用该方法对内蒙古巴彦淖尔市不同的向日葵黄萎病发病地块中采集到的土壤样本中微菌核进行了定量检测,结果表明：两年向日葵连作地（样地1）土壤中微菌核的数量最多,平均每克土样中含有微菌核32.80个;与非寄主作物玉米轮作地块（样地2）土样中微菌核的数量最少,平均每克土样中含有微菌核11.80个,与寄主作物打籽葫芦轮作地块（样地3）微菌核数量介于二者之间。利用该方法能够明显区分不同地块土壤中微菌核的数量。通过和荧光定量PCR检测的结果进行相关性分析发现,该方法能够准确检测土壤中大丽轮枝孢菌微菌核的数量。     

向日葵枯萎病菌的分离鉴定及其生物学特性

为明确向日葵枯萎病的病原菌种类,调查来自不同地区2014-2015年田间向日葵枯萎病株(50份),经过柯赫氏法则鉴定,将分离获得的31株分离物鉴定为镰刀属下的7个不同的种,即尖孢镰刀菌(F.oxysporum)、轮枝镰刀菌(F.verticilloides)、砖红镰刀菌(F.lateritium)、锐顶镰刀菌(F.acuminatum)、芬芳镰刀菌(F.redolens)、木贼镰刀菌(F.equiseti)和层出镰刀菌(F.proliferum)。以每个种随机选取的菌株为研究对象,对其生物学特性进行了比较研究。结果表明:轮枝镰刀菌BC012的生长速度最快,而砖红镰刀菌BC03生长速度最慢;产孢量以轮枝镰刀菌BC012最多,而木贼镰刀菌NMG1的产孢量最少。在不同的培养温度下,除锐顶镰刀菌TBB212可在5℃低温下生长外,其余菌株的最适生长温度均为25℃~30℃。所有供试的菌株在p H 4~11的培养条件下均可生长。不同种的镰刀菌株产毒能力的比较结果表明,尖孢镰刀菌BC102的产毒能力最强,粗毒素含量为0.651 mg/m L;砖红镰刀菌BC03的产毒能力最弱,粗毒素含量仅为0.075 6mg/m L。不同种的镰刀菌的致病力测定结果表明,接种21d后,轮枝镰刀BC012、芬芳镰刀菌WLJ1和锐顶镰刀菌TBB212的病情指数分别为65.0、55.0、55.0,症状表现为侵染快、发病早、病叶边缘变黄变褐且叶面上出现斑驳状病斑;木贼镰刀菌NMG1、层出镰刀菌T5、尖孢镰刀菌BC102和砖红镰刀菌BC03病情指数在30.0至40.0;症状表现为发病较晚,病叶少且症状轻。而对照菌株向日葵黄萎病菌株大丽轮枝菌的病情指数仅为25.0。     

向日葵黄萎病病原鉴定

从自黑龙江、内蒙古东、西部、河北、陕西、宁夏、新疆向日葵黄萎病发生严重的地块采集有典型症状的200多个病株进行病原物分离,通过常规组织分离法分离到120个菌株。在PDA培养基上,其菌落表现黑色、白色及灰白色。显微镜下观察其营养菌丝透明、有分隔,呈轮状分枝;分生孢子卵圆或椭圆形、单细胞;大多产生黑色微菌核。提取DNA并进行ITS序列分析（ITS1/ITS4）,证实该120个向日葵黄萎病菌株均为轮枝孢属大丽轮枝菌（Verticillium dahliae Kleb.）。     

品种抗性与接种棉株中大丽轮枝菌的分布及与茎切面上单孢生长的关系

不同棉花品种,茎基针刺接种大丽轮枝菌中等毒力小种(SS—4)或强毒力小种(T—1)3日内,经室内培养,自棉茎端部维管束和叶柄组织分离到该病原菌.在所有供试的感耐,抗病品种温室培养的幼苗中均观察到大丽轮枝菌在棉茎中的这种传导。7—9日后叶部显现症状。自抗病品种SBSl 上分离到病原菌的频率低于自耐、感病陆地棉品种分离到的频率。在茎段上接种萌发单孢,抗病品种棉茎段比之感、耐病品种茎段能更强烈抑制大丽轮枝菌菌丝的生长。在抗病品种茎干切段上,即使病菌能够生长,产生的微菌核也少,很晚。而感病品种切段上,菌丝生长旺盛,产生的微菌核也多。接种后不久,抗、感病品种棉茎端部和叶柄组织中大丽轮枝菌的存在,及抗、感病品种段上菌丝生长和微菌核形成的差异表明,这种抗性是一种被激活的寄主化学反应。这些结果与下一篇关于类倍半萜烯植保素的积累的论文中所报道的资料相一致。这种植保素可能是棉花抗黄萎病的关键因子。     

五倍子粗提液对棉花黄萎病的防治效果

以五倍子为对象,研究其粗提液对大丽轮枝菌的抑菌效果及对棉花黄萎病的田间防治效果,为研制用于棉花黄萎病防治的新型植物源制剂提供技术支持。结果表明,当五倍子粗提液体积分数达到0.6%时,其对分离自不同棉区的大丽轮枝菌强致病力菌株Vd080、Vd147、Vd021的菌落生长抑制率和产孢量抑制率均达到100%。田间叶面喷施五倍子粗提液对棉花黄萎病的防治效果最高可达到58.8%,40、80倍液处理能显著提高棉花纤维的断裂伸长率,且前者能显著提高籽棉产量。推荐生产上在棉花黄萎病发生前或发生初期叶面喷施40～80倍的五倍子粗提液进行防治。     

Cry2Ab 蛋白对棉花黄萎病菌、枯萎病菌和红腐病菌的影响

研究Cry2Ab蛋白对棉花黄萎病菌、枯萎病菌和红腐病菌生长速率及对黄萎病菌分生孢子产量、分生孢子大小和粗毒素分泌量的影响。结果发现,当Cry2Ab蛋白质量浓度为1.0 μg·mL^－1时,显著降低黄萎病菌分生孢子的大小;当其质量浓度大于5.0 μg·mL^－1时,显著抑制棉花黄萎病菌、枯萎病菌和红腐病菌在PDA培养基上生长及黄萎病菌分生孢子的大小,促进黄萎病菌产孢和粗毒素分泌。     

棉花细胞悬浮培养体诱导产生棉毒素衍生物

引言以前研究指出倍半萜醛(设想的植物抗毒素)的形成,能从大丽轮枝菌(Verticilliumdahliae)活体或蒸气高压灭菌的分生孢子诱导亚洲棉(Gossypium arboreum)中棉(Nan-kin)细胞悬浮培养体产生。为了采用这种系统,以鉴别与轮枝菌属-棉属互作的生理和生化机制,需研究许多实验参数。其中有些如大丽轮枝菌分生孢子对棉属不同品种的影响,比较棉茎组织和细胞悬浮培养体合成的棉毒素衍生物,悬浮体内的亚洲棉细胞的倍数性,和分离与大丽轮枝菌关连的抽取物,这种提取物能诱导倍半萜醛形成。这些将在本文报导。材料和方法1987年用LS 盐类加0.18mg/1α-萘乙酸,0.22mg/12,4-D 建成了棉属细胞悬浮体。暗培,23±1℃,连续旋转振荡100     

品种抗性与接种棉株中大丽轮枝菌的分布及与茎切面上单孢生长的关系(续上期)

结果1.接种棉株中大丽轮枝菌的分布。接种大丽轮枝菌中等菌力非落叶型小种SS-4的抗病品种SBSI 和感病品种岱15的棉株,经过连续培养,证明该小种在其茎干组织中的分布无差异(图2A)。两品种取自茎基的切段均于接种当天产生病菌,中部切段接种后24小时产生病菌,端部切段接种后48小时产生病菌。接种后第3天,两品种各重复茎段切面上均出现了大丽轮枝菌,但观察到茎段切面上的菌丝生长及产孢活动有些差异。接种后4—5天进行抽样调查表明,感病品种岱15培养至第5或6天时产生     

水稻小球菌核菌无性世代分生孢子双曲孢菌(Nakataea sigmoidea)的发现及产孢条件研究

报道了黑龙江省水稻小球菌核菌无性世代的分生孢子双曲孢属 (Nakataea sigmoidea Hara) ,并对其人工培养条件进行了初步探讨。结果表明 ,在黑暗条件下 ,不同的营养条件、环境条件及培养方式病原菌均不能产生分生孢子 ;在自然光条件下 ,病原菌的菌核和菌丝在水琼脂培养基上均可产生分生孢子。生长物质和微量元素均不能促进孢子产生。C/ N对菌核萌发直接产生分生孢子有影响 ,其中 C/ N为 10 / 1时产孢率最高 ,达 5 4 .2 3%。     

水稻小球菌核菌无性世代分生孢子双曲孢菌（Nakataea sigmoidea）的发现及产泡条件研究

报道了黑龙江省水稻小球菌核菌无性世代的分生孢子双曲孢属（Nakataea sigmoidea Hara)，并对其人工培养条件进行了初步探讨。结果表明，在黑暗条件下，不同的营养条件、环境条件及培养方式病原菌均不能产生分生孢子；在自然光条件下，病原菌的菌核和菌丝在水琼脂培养基上均可产生分生孢子。生长物质和微量元素均不能促进孢子产生。C／N对菌核萌发直接产生分生孢子有影响，其中C／N为10／1时产孢率最高，达54.23%。     

巴西橡胶树棒孢霉落叶病菌毒素基因cc004-cas克隆及致病作用

为了探明多主棒孢菌(Corynespora cassiicola)毒素基因cc004-cas序列特征及其功能,以巴西橡胶树棒孢霉落叶病菌为材料,采用SEFA-PCR和RT-PCR技术对毒素基因cc004-cas进行扩增,并通过插入潮霉素B基因获得其突变体。序列特征分析结果表明,cc004-cas基因DNA和cDNA全长分别为2 800 bp和180bp,编码区含2个内含子(67 bp和49 bp),推测编码59个氨基酸,其分子量约为5.92 ku,等电点pⅠ为5.70,与NCBI中报道的C.cassiicola毒素基因cas编码的毒素前体pro-cassiicolin的氨基酸序列(0HABV25895.1)相似性达85%。cc004-cas突变体表型测定结果表明:在菌落和菌丝形态、生长,产孢量、孢子萌发,菌丝生长对温度、pH要求,产生漆酶和纤维素酶的能力方面与野生型无显著差异;但用菌饼接种橡胶树嫩叶,致病力略有下降,用粗毒素接种时,致病力明显减轻,可见毒素是多主棒孢菌的一个重要的毒力因子,但不是唯一的因子。     

啶酰菌胺与咪鲜胺复配对核盘菌的联合毒力测定

为筛选防治向日葵菌核病的有效药剂,明确不同杀菌剂复配对核盘菌的联合毒力,测定了啶酰菌胺与咪鲜胺复配对核盘菌菌丝生长、菌核的萌发及生理代谢的影响。试验结果表明,不同比例啶·咪复配对核盘菌均有良好的抑制作用,二者复配比例为1:1时,增效系数为1.7657,增效作用最强;啶·咪复配能够有效抑制核盘菌的生长,降低菌核的萌发率和子囊盘形成率,其效果明显优于两单剂;啶·咪复配处理下,核盘菌草酸的分泌量和细胞壁降解酶的活性显著降低,核盘菌的Ss-oah1、Ss-pg1和Ss-pg3等3个致病相关基因的表达量与空白对照相比分别下调了69.90%、55.00%和71.30%。结果表明,啶酰菌胺与咪鲜胺复配,能有效抑制核盘菌的生长,降低核盘菌的致病力,是防治向日葵菌核病的有效复配药剂。     

东北三省大豆根腐镰孢菌种类及其致病力分析

于2007~2010年连续4年从东北三省大豆主产区采集大豆根腐病株,分离大豆根腐镰孢菌,并进行了形态学鉴定和致病力测定。结果表明,分离到的1199个镰孢菌菌株属于 8 个种,分别为尖镰孢菌（F. oxysporum）、 腐皮镰孢菌（F. solani）、 禾谷镰孢菌（F. graminearum）、 半裸镰孢菌（F. semitactum）、 轮枝镰孢菌（F. verticillioides）、燕麦镰孢菌（F. avenaceum）、木贼镰孢菌（F. equiseti）和厚垣镰孢菌（F. chlamydosporum）,其出现频率依次为36.45 %、25.35 %、11.43 %、10.76%、6.76%、4.42%、3.84%和1.00 %。以上8种镰孢菌在黑龙江省都存在,且在黑龙江省首次发现了厚垣镰孢菌。在吉林省没有分离到F. avenaceum和F. verticillioides,在辽宁省没有分离到F. avenaceum和F. chlamydosporum。以合丰25号大豆品种为接种材料进行的致病力测定结果显示：8种镰孢菌对大豆均有致病力,其中尖镰孢菌为强致病力,腐皮镰孢菌、禾古镰孢菌、半裸镰孢菌、燕麦镰孢菌、木贼镰孢菌和厚垣镰孢菌均为中等致病力,轮枝镰孢菌为弱致病力;8种镰孢菌引起的大豆根腐病症状不尽相同。     

玉米弯孢菌毒素理化性质及致病机理的研究

对玉米弯孢菌产生毒素的理化性质和致病机理进行了初步研究。结果表明:毒素的化学成分包括蛋白质和可溶性糖;毒素对不同玉米自交系种子萌发和叶片致萎程度的影响有明显差异,研究结果与弯孢菌对不同抗性自交系的致病能力基本一致。     

影响向日葵菌核菌（Sclerotinia sclerotiorum）生长和毒素产生的条件研究

为探讨向日葵菌核菌生长和毒素产生的营养和环境条件。笔者研究了在不同培养液、培养时间、培养温度、pH值、碳源、氮源条件下菌核菌生长和毒素的产生情况。结果表明：向日葵菌核菌菌丝生长和产生毒素所需的营养和环境条件不同。有利于菌丝生长的最佳培养液有PD、马铃薯麦芽糖培养液和Richard,最适生长温度为20℃,最适pH为4.0~8.0,最佳碳源为淀粉,最佳氮源为NH4Cl。含有琥珀酸钠的培养液B最有利于菌核菌产生草酸毒素,草酸毒素积累的最适温度为25℃,最适pH为6.0~7.0,最佳碳源为乳糖,最佳氮源有天门冬酰胺和谷氨酸。菌核菌在最佳培养条件下培养10d时菌丝干重和草酸含量都达到最大值。     

10种无机盐对橡胶树多主棒孢病菌的抑菌作用及对粗毒素的钝化

以橡胶树棒孢霉落叶病病原菌及其产生的粗毒素为供试材料,研究了10种无机盐对多主棒孢菌株菌丝生长、分生孢子萌发的抑制作用和对其粗毒素的钝化作用。结果表明:CuSO4.5H2O、FeCl3和FeSO4.6H2O在2～5mg/mL浓度范围内对多主棒孢病菌菌丝生长及其孢子萌发都有很强抑制作用,菌丝生长抑制率为100%,孢子萌发率为0。KMnO4在0.5～5 mg/mL浓度范围内能够完全抑制孢子的萌发,而1～5 mg/mL浓度范围内却促进菌丝的生长。KMnO4和FeCl3在浓度为0.5 mg/mL时对该毒素均有很强的钝化作用,萎蔫指数分别为2.04%和3.97%。     

花生网斑病原菌孢子差异及其致病力分析

花生网斑病（peanut web blotch），由花生亚隔孢壳菌（Didymella arachidicola）引起，病原菌又称花生茎点霉（Phoma arachidicola）或派伦霉（Peyronella arachidicola），在我国南北的各大花生产区均有发生，已成为生产上严重的叶部病害。为筛选产孢效率高、致病力强的菌株，研究病原菌进化机制和环境适应性，从来自不同地区的花生网斑病叶片样本中分离病原菌菌株，研究分生孢子及致病力差异。结果表明，18个菌株中YY187的产孢时间最短，22℃黑暗条件下燕麦琼脂培养基培养7 d即可产孢；菌株YY187和NY206产生的分生孢子器数量显著多于其它菌株；采用孢子悬浮液接种花生叶片，供试所有菌株均可造成叶片发病，其中菌株LY128和YY187在供试18个菌株中致病力相对较强。因此，综合评价产孢效率更高、致病力更强的本地菌株YY187适合作为花生抗网斑病研究的材料。     

辽宁省玉米穗腐病致病层出镰孢菌生物学特性、致病力与产伏马毒素B1比较

层出镰孢菌Fusarium proliferatum是辽宁省玉米穗腐病致病镰孢菌之一。比较 4株层出镰孢菌的生物学特性、致病力、伏马毒素生物合成基因的表达量和产伏马毒素能力。结果表明,供试层出镰孢菌适宜生长温度为25℃～30℃, Fp-2、 Fp-3、 Fp-6最适温度为 25℃, Fp-7最适温度为 28℃。适宜 pH值为 5～8, Fp-2、 Fp-7的最适 pH值为 7; Fp-3耐碱性,最适 pH值为 8; Fp-6耐酸性,最适 pH值为 5。12 h光暗交替有利于菌丝生长,适宜生长培养基为PSA、 PDA。不同菌株对碳氮源的利用存在差异,适宜碳源为可溶性淀粉和蔗糖,适宜氮源为亚硝酸钠、天冬氨酸和脯氨酸。4株层出镰孢菌均能产生毒素,菌株间产毒能力差异显著,菌株Fp-7产伏马毒素B₁能力最强,为77.65 mg/kg。菌株间产毒基因的相对表达量也存在差异,致病力无明显差异。     

椰子茎泻血病菌生物学特性研究

对椰子茎泻血病菌奇异长喙壳菌Ceratocystis paradoxa(Dade)Moreau[=Thie laviopsis paradoxa(De Seynes)V.Hohnel]xie331-4的生物学特性进行了研究。结果表明,马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)最适合该菌菌丝生长和产孢;以果糖为碳源最适合菌丝生长,以阿拉伯树胶粉为碳源最适合产孢;以磷酸氢二铵为氮源最适合菌丝生长,以蛋白胨为氮源最适合产孢;2%蛋白胨对孢子萌发有促进作用,2%葡萄糖、2%蔗糖对孢子萌发有抑制作用;25～35℃适合菌丝生长和产孢,25℃最适合孢子萌发,温度低于5℃或高于40℃孢子不能萌发;pH值4～11适合菌丝生长,pH为7产孢量最大,pH值为4孢子萌发率最高;光照对菌丝生长及孢子萌发无显著影响,但有利于产孢;分生孢子致死温度为52℃10min。