芒果尖孢炭疽病病原菌的绿色荧光蛋白基因标记

芒果炭疽病是世界性的主要病害之一,引起芒果炭疽病的病原菌有胶孢炭疽菌和尖孢炭疽菌2种。通过溶壁酶酶解菌丝体成功制备尖孢炭疽菌原生质体,用抗潮霉素基因作为选择标记,采用PEG介导的原生质体转化法,用绿色荧光蛋白表达载体(pCT74-sGFP)转化原生质体,获得表达GFP尖孢炭疽菌的转化子菌株;转化子菌株在含潮霉素平板上经多次单孢纯化后,在无选择压下连续继代培养仍能发出稳定而强烈的绿色荧光,用GFP特异性引物PCR扩增转化子菌株基因组DNA获得预期大小片段,表明gfp基因已成功导入芒果炭疽病病原菌基因组中,且稳定遗传;GFP标记菌株生长正常,致病性和野生型菌株无明显差别,这为进一步研究该病菌在自然界的生物学及侵染方式奠定了基础。     

棉苗炭疽病菌研究初报

 从湖北黄冈农科院温室的发病棉苗上分离到一种炭疽菌,并对病害在棉苗上的症状特点,病原菌的形态特征、培养性状进行了研究,同时进行柯赫氏法则验证,结果表明,分离到的病原菌为半知菌亚门、腔孢纲、黑盘孢目、刺盘孢属(Colletotrichum sp.)真菌。     

棉苗炭疽病菌研究初报

从湖北黄冈农科院温室的发病棉苗上分离到一种炭疽菌，并对病害在棉苗上的症状特点，病原菌的形态特征、培养性状进行了研究，同时进行柯赫氏法则验证，结果表明，分离到的病原菌为半知菌亚门、腔孢纲、黑盘孢目、刺盘孢属（Colletotrichum sp．）真菌。     

电子鼻在芒果采后病原菌种类判别中的应用研究

利用电子鼻对胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides Penz.)、可可球二孢(Botryodiplodia theobromae Pat.)、芒果小穴壳(Dothiorella dominicana Pet.et Cif.)和芒果拟茎点霉(Phomopsis mangiferae Ahmad.)4种芒果采后病害病原菌发酵液的挥发性气味进行检测,以评估电子鼻用于芒果不同真菌病原菌种类判别的可行性。结果表明,对气味响应值进行的主成分分析(PCA)、线性判别分析(LDA)及聚类分析均能够正确区分不同病原菌种类。多因素方差分析(MANOVA)结果显示,不同病原菌之间的差异显著(p0.05)。结果为芒果采后病原菌种类判别提供新的方法,为其他病原菌的种类判别提供参考。     

海南降香黄檀炭疽病病原鉴定及防治

针对海南降香黄檀炭疽病的病原进行研究,结合危害症状、病原菌的菌落形态以及分生孢子特征等将海南降香黄檀炭疽病病原鉴定为胶孢炭疽菌Colletotrichum gloeosporioides(Penz.) Sacc.,并提出一些防治措施。     

希金斯刺盘孢全基因组候选效应分子的预测

希金斯刺盘孢（Colletotrichum higginsianum Sacc.）是一种世界性分布的重要植物病原真菌，可引起严重的十字花科植物炭疽病，影响作物品质并造成严重的经济损失。效应分子在植物病原真菌侵染寄主植物过程中发挥着重要的作用。根据已公布的希金斯刺盘孢的全基因组信息，以其全基因组蛋白序列为材料，通过生物信息学方法，对其候选效应分子及其功能进行了预测和分析。首先利用SignalP、TMHMM、Protcomp、big-PI Predictor 和TargetP程序依次预测出其分泌类型的蛋白，再通过其序列大小和半胱氨酸含量作进一步筛选，最后利用blastp工具与非冗余蛋白质数据库进行比对，找出数据库中没有蛋白同源性的序列，从而获得候选效应分子；同时对希金斯刺盘孢全基因组的16 150个蛋白序列进行分析，最终预测到135个符合条件的候选效应分子，而大多数都是功能未知的假定蛋白。本研究采用生物信息学分析方法预测出了希金斯刺盘孢的候选效应分子，为进一步研究这些效应分子的功能奠定了基础，其研究技术和手段也为其它真菌效应分子的预测提供了重要的参考资料。     

海南橡胶树炭疽菌Colletotrichum siamense和C. fructicola的鉴定及系统发育分析

橡胶树炭疽病是橡胶树上一种重要叶部病害,胶孢炭疽菌复合群为我国橡胶树炭疽病的重要病原菌,但至今未知具体是由复合群下哪些种引起。为了对前期已经确定为属于胶孢炭疽菌复合群的来自海南13株胶孢炭疽菌进行进一步种属鉴定,本研究继续克隆了供试菌株的Ap Mat和GS 2个基因,并分别采用Ap MAT单基因、GS/Ap MAT双基因和采用ITS/CHS-1/GAPDH/ACT/GS/Ap MAT 6个基因的多基因拼接序列分别进行分析。结果表明:无论是采用Ap Mat单基因、GS/Ap Mat双基因还是6基因拼接序列,都能将供试的13株炭疽菌分属胶孢炭疽菌复合群下的C.siamense和C.fructicola 2个种。该结果说明危害海南橡胶树炭疽病的胶孢炭疽菌复合群主要有C.siamense和C.fructicola 2个种,同时也说明了利用Ap MAT基因和GS/Ap MAT双基因能对胶孢炭疽菌复合群下的种进行鉴定。      

13种苯丙烷代谢物对6种炭疽菌的抑菌活性研究

炭疽病是广泛影响热带、亚热带植物的真菌性病害。开发绿色农药是有效防治炭疽病的重要手段。热带牧草柱花草的转录组和代谢组研究表明,苯丙烷代谢通路在响应炭疽菌侵染过程中显著上调。为评价苯丙烷代谢物的抑菌活性,本研究采用体外抑菌试验,测定了13种苯丙烷代谢物对柱花草胶孢炭疽菌、橡胶胶孢炭疽菌、大薯胶孢炭疽菌、芒果胶孢炭疽菌、番木瓜胶孢炭疽菌和橡胶尖孢炭疽菌等6种炭疽菌的菌丝生长抑制作用;进一步测定了活性较好的代谢物及其两两组合对6种炭疽菌菌丝生长和5种炭疽菌孢子萌发的抑制作用。结果表明,13种代谢物对6种炭疽菌的抑制效果不同,在500 μmol/L和1000 μmol/L的浓度下,紫檀芪对6种炭疽菌菌丝生长的抑制效果最好,高浓度时平均抑制率可达47.47%~80.74%;在1000 μmol/L的浓度下,根皮素和香豆素对6种炭疽菌菌丝生长也有一定的抑制效果,而其他9种代谢物对6种炭疽菌抑制作用较弱或者无明显抑制作用。代谢物两两组合时,含紫檀芪的代谢物组合对6种炭疽菌菌丝生长有显著的抑制作用,平均抑制率为31.07%~89.05%;紫檀芪及含紫檀芪的代谢物组合对5种炭疽菌孢子萌发有显著的抑制作用,对柱花草胶孢炭疽菌、橡胶胶孢炭疽菌、橡胶尖孢炭疽菌、芒果胶孢炭疽菌和番木瓜胶孢炭疽菌毒力最强的代谢物或组合分别为紫檀芪+根皮素、紫檀芪+阿魏酸、紫檀芪+阿魏酸、紫檀芪+根皮素、紫檀芪,IC₅₀值分别为293.475、67.660、184.764、108.671、68.417 μmol/L。本文所发掘的代谢物及其组合可为进一步研究防治炭疽病的绿色农药提供理论基础。     

真菌蛋白的提取及其对玉米病害的抗性诱导

以4种病原真菌为材料,提取其蛋白进行试验,比较了蛋白对玉米大斑病和玉米锈病的抗性作用。结果表明:烟草赤星病的病原菌链格孢属链格孢菌Alternariaalternata(Fries)keissler的提取蛋白对两种病害的抗性都极其显著,很好的应用前景和开发价值。     

中国橡胶树苗圃2种炭疽病菌分子鉴定及分布分析

根据胶孢炭疽菌和尖孢炭疽菌特异引物对,对采自中国云南、海南、广东和广西植胶区的138株炭疽病菌进行分子鉴定。结果显示:138株炭疽菌中鉴定为胶孢炭疽菌的有100株,占总测定株数的72.46%,尖孢炭疽菌的有38株,占总测定株数的27.54%。其中海南、云南和广东橡胶苗圃中胶孢炭疽菌占所分析菌株总数比例分别为81.82%(54/66)、60.0%(15/25)和77.27%(17/22),而广西3个橡胶苗圃中的2个苗圃地尖孢炭疽和胶孢炭疽病菌各占一半。总体来看,国内橡胶树苗圃地炭疽病病原菌仍以胶孢炭疽菌为主,部分苗圃同时存在胶孢和尖孢炭疽菌的危害。     

狐尾椰子炭疽病病原菌的初步鉴定

通过对狐尾椰子炭疽病症状及其病原菌形态进行观察,按照柯赫氏法则对该病原菌进行分离培养鉴定,初步鉴定结果认为该病原菌为胶孢炭疽菌属（Colletotrichum sp）,并根据发病规律提出防治建议。     

CsSSK1基因调控暹罗炭疽菌胁迫应答和致病性的功能分析

暹罗炭疽菌（Colletotrichum siamense）是热带、亚热带地区许多农林作物炭疽病的主要病原菌。SSK1是双组分系统中的应答调节蛋白,已有研究显示病原真菌中的SSK1与病原菌的形态建成、胁迫反应、耐药性和致病力有关,但在不同菌中其功能存在差异。为了解暹罗炭疽菌中同源基因CsSSK1的功能,本研究利用同源重组法构建了CsSSK1基因缺失突变体ΔCsSSK1和回补菌株ΔCsSSK1(CsSSK1),对其进行表型观察。结果显示：与野生型菌株相比,形态发育上,缺失突变体ΔCsSSK1的菌丝生长速率略有降低,分生孢子较短且产孢量低,孢子萌发率也降低;胁迫应答上,ΔCsSSK1显著提高了炭疽菌对NaCl、山梨醇、蔗糖、葡萄糖、刚果红胁迫的敏感性,提高了对氟康唑和戊唑醇的敏感性,但降低了对咯菌腈的敏感性;致病功能方面,CsSSK1基因缺失明显降低了致病力。研究结果表明CsSSK1基因参与调控暹罗炭疽菌的形态建成,应答盐胁迫、渗透胁迫、刚果红胁迫反应,参与药剂敏感性调控,影响暹罗炭疽菌的致病能力。本研究结果为深入了解暹罗炭疽菌CsSSK1基因功能,解析病原真菌应答胁迫反应的分子机理奠定基...     

海南常见杂草病原真菌资源调查及初步鉴定

通过对海南部分地区常见杂草病原真菌初步镜检,分离培养,共鉴定出17种杂草上的21种病原真菌。它们是香附子(Cyperus rotundus L)、白茅[Imperata cylindrical(L.)]、异型莎草(Cyperus difformis L.)和一点红[Emilia sonchifolia(L)DC.]上的夏孢锈菌(Uredo sp.);车前草(Plantago asiatica L)、土牛膝(Achyrantnes aspera L)、大飞扬草(Euphorbia hirta L)、象鼻草(Helioeropium indicum L)的粉孢属(Oidium sp.);飞机草(Eupatoriumodora-tum L)的泽兰尾孢(Cerospora eupatorii Peck.)、刺盘孢(Colletotrichum sp.);青葙(Celosiaar gentea L)的交链孢(Alternaria sp.);马唐草(Digitaria sanguinalis(L)Scop)的长蠕孢霉(Helminthosporium sp.)、弯孢霉(Curvularia sp.)、夏孢锈菌(Uredo sp.)、黑孢霉(Nigrospora sp.);野茼蒿(Gynura crepidioides Benth)的交链孢霉(Alternaria Nees sp.)、银花苋(Gomphrena globosa L)的弯孢霉(Curvularia sp.);粗叶耳草(Hedyotis hispida Retz)的弯孢霉(Curvularia sp.);水葫芦(Eichhornia crassipes)的刺盘孢(Colletotrichum sp);牛筋草(Eleusine indica(L.)Gaertn.)的长蠕孢霉(Helminthosporium sp.)以及三叶鬼针草上的黑孢霉(Nigrospora sp.)。     

橡胶树炭疽菌CsHog1基因的克隆和原核表达分析

HOG MAPK途径在植物病原真菌生长发育、致病过程和对杀菌剂敏感性等方面发挥重要功能,但在不同的病原真菌中具有一定差异。为研究Hog1蛋白在橡胶树炭疽菌(Colletotrichum siamense)中的功能和调控机制,本研究利用同源克隆法克隆获得橡胶树炭疽菌(C. siamense)的CsHog1基因,构建GST-CsHog1融合表达载体,利用SDS-PAGE和WesternBlot检测蛋白表达情况。结果表明:橡胶树炭疽菌(C.siamense)的CsHog1基因大小1383 nt,编码459个氨基酸,包含5个内含子,具有丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶催化结构域;聚类分析显示橡胶树炭疽菌的CsHog1基因编码的氨基酸序列与黄瓜炭疽菌的ClOsc1(Hog1同源基因)同源性最高。所构建的蛋白融合表达载体在供试条件下(IPTG0.3、0.5、0.8、1.0 mmol/L;温度16、25、28℃)均可较好诱导表达,GST-CsHog1融合蛋白大小约为70 ku。用GST亲和层析柱纯化获得蛋白,经Western Blot检测显示该蛋白可与GST单克隆抗体特异性结合。     

4种菊科外来杂草致病菌的调查及初步鉴定

通过对海南昌江和白沙县4种菊科外来入侵杂草的调查发现,飞机草、假臭草和蟛蜞菊分布广泛、危害严重;从4种外来杂草上共分离获得7种病原真菌,分别为:侵染假臭草的链隔孢(Alternaria sp.)、飞机草的炭疽菌(Colletotrichum sp.)、飞机草的泽兰尾孢(Cerospora eupatorii Peck.)、飞机草的链格孢(Alternaria sp.)、胜红蓟的弯孢(Curvularia sp.)、蟛蜞菊的链隔孢(Alternaria sp.)和蟛蜞菊的炭疽菌(Colletotrichum sp.),这些病原菌的生防潜力有待进一步研究。     

橡胶树RRIM600品系的内生真菌多样性

从海南省儋州市的橡胶树RRIM600品系上,采集花、叶、枝、果、根组织分离内生真菌,共分离了504个组织块,获得内生真菌545株.根据形态特征对482株产生孢子的菌株进行鉴定,分别归入21个属,大部分为半知菌,共19属,其中丝孢纲真菌12属,腔孢纲真菌7属;少数为子囊菌,共2属.初步研究结果表明:拟茎点霉属(Phmopsis)为橡胶树5种组织中的优势属,刺盘孢属(Colletorichum)为叶片组织中的优势属,侧多隔孢属(Pleurophragmium)为根组织中的优势属.这5种组织中的内生真菌定殖率为50%～100%、分离率为0.74～1.52.内生真菌群落组成的相似性比较结果表明,部分内生真菌具有一定的组织偏好性.     

建兰炭疽病病原菌分离、鉴定及培养条件优化

以福建漳州和福州地区的建兰炭疽病病株为试验材料,分离、鉴定病原菌,优化培养条件.结果表明:建兰炭疽病病原菌为胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides).病原菌生长的最适培养基为PDA,最适温度为28℃,最适pH值为7.0,最适光照为完全黑暗或12h光暗交替,最适碳源为蔗糖或淀粉,最适氮源为NH4NO3.     

芒果炭疽病菌多重巢式PCR检测体系建立及田间快速检测

以芒果炭疽病病原菌rDNA-ITS为靶标,建立并完善多重巢式PCR检测技术,结合常规形态学特征分析,对中国华南地区10个田间样品进行检测分析.结果表明:该技术特异性强、灵敏度达2fg/μL、重复性强、可操作性强,能同时检测、区分2种病原菌,能够应用于田间炭疽病害的检测工作,也是常规形态学鉴定的补充.利用该技术检测到田间芒果炭疽病存在胶孢、尖孢2种病原菌的复合侵染,该结果为后续开展有效防控措施提供理论指导和技术支撑.     

广东省凤梨科观赏植物真菌病害鉴定

为给观赏植物病害的防治提供科学依据,根据病害症状和病原菌的形态特征以及有关文献的分类系统,鉴定了1998-2000年在广东调查的12种凤梨科观赏植物真菌病害,即围小丛壳[Glomerrellacinghlata(Stonem.)Spauld.etSchrenk]、辣椒刺盘孢[Colletotrichumcapsici(Syd.)Butl.etBisby]、水塔花星裂盘菌(PhacidiumbillergiaeL.ZengetP.K.Chi)、凤梨顶多毛孢菌(BartaliniaananassaL.Zeng,Z.D.JiangetP.K.Chi)、可可球二孢(BotryodiplodiatheobromaePat.)、钝头粘盘孢菌(ColletogloeumobtusumSutton)、油球拟茎点霉[Phomopsisdiplodinoides(Sacc.)Punith.]、筒凤梨拟茎点霉(PhomopsisspectabilisV.G.Rao&B.R.D.Yadav)引起的叶斑病,灰霉(BotrytiscinereaPers.)引起的花腐及分别由强雄腐霉(PythiumarrhenomanesDrechsler)、簇囊腐霉(PythiumtorulosumCoker&Patterson)和蕨柱帚霉(Cylindrocladiumpteridis Wolf)引起的根茎腐、叶基茎基腐和茎基腐。其中,星裂盘菌叶斑病、顶多毛孢叶斑病为凤梨科观赏植物的新病害;钝头粘盘孢菌、油球拟茎点霉为中国真菌新记录种。在温室生产中,以围小丛壳引起的叶炭疽病、筒凤梨拟茎点霉引起的叶斑病发生普遍而严重;根茎腐、叶基茎基腐和茎基腐在部分生产单位常引起死苗或死株     

胶孢炭疽菌侵染芒果的过程及寄主的组织病理学研究

炭疽菌是一类地理分布广泛、寄主范围广泛的真菌,在作物成熟前和成熟后都能侵染植株和果实,特别对成熟的热带作物危害极大,造成果实腐烂,导致严重的经济损失并影响产品的出口质量.为探讨胶孢炭疽菌侵染芒果的过程及其与寄主的互作关系,揭示该病菌对果实和叶片的侵染方式和扩展途径,以元江本地品种'三年芒'病果上分离、筛选的强致病菌株C...