橡胶树胶孢炭疽病菌致病相关基因CgATG8的功能分析

ATG8是病原真菌中细胞自噬过程中的重要基因,并参与致病过程。基于橡胶树胶孢炭疽菌HBCg01全基因组数据库,采用PCR和RT-PCR扩增得到橡胶树胶孢炭疽病菌的CgATG8基因并进行序列分析。采用Split-Marker Recombination法获得该基因的敲除转化子。表型分析结果表明,缺失该基因后,橡胶树胶孢炭疽病菌的致病力丧失,产孢能力、孢子萌发率、附着胞形成率和膨压均降低,而且孢子萌发和附着胞的形成延迟。     

胶孢炭疽菌侵染橡胶树叶片染色方法的建立及显微观察

本研究建立了一种橡胶树叶片中胶孢炭疽菌的染色方法,通过显微观察明确胶孢炭疽菌在橡胶树叶片中的侵染结构,为橡胶树炭疽病的预测预报提供理论依据。在脱色剂（0.15%三氯乙酸乙醇溶液∶氯仿=5∶1）处理12 h,1%刚果红染色剂抽滤染色3 h的条件下,能清晰观察到胶孢炭疽菌在橡胶树叶片上的发育进程和侵染结构。结果表明,在28 ℃、100%相对湿度培养条件下,接种橡胶树淡绿期叶片2~6 h为分生孢子萌发高峰期,12 h后分生孢子萌发率大于85%;8~12 h为附着胞形成高峰期,接种12 h约75%的芽管顶端产生附着胞,少数附着胞中央部位开始形成侵染钉;24 h为侵染钉形成高峰期,同时分生孢子萌发形成多个芽管;36 h时附着胞顶端再次萌发产生次级附着胞,从而进一步侵染周围细胞,叶片出现零星病斑;48 h时芽管不断分支异化成菌丝并产生次级分生孢子,叶片出现大量典型的炭疽病病斑;72 h后菌丝在叶片表面纵横扩展,随机分支,逐步形成网状分布。随着菌丝的扩展,叶片组织发生一系列的病理变化,侵染部位组织出现褐色坏死病斑。本研究建立了一种着色效果好,简便易行,经济有效的橡胶树叶片中胶孢炭疽菌的染色方法,进一步明确了胶孢炭疽菌的侵染结构。     

橡胶树胶胞炭疽菌T-900突变体生物学研究及其假定基因LV1敲除载体构建

从构建的橡胶树胶孢炭疽菌RC178(Colletotrichum gloeosporioides)突变体库中筛选获得一株致病力明显减弱突变体T-900,与野生菌株相比其菌落生长速率、产孢能力,孢子萌发率及附着孢形成率均明显降低。通过对突变菌株T-900 T-DNA侧翼序列克隆、比对和基因预测结果表明外源片段的插入破坏了一个预测基因的功能,该基因和组蛋白H3同源性为99%,暂命名为LV1。通过同源臂克隆构建了该基因敲除载体900-1A-900-1B-p CT74,为进一步研究该基因在病原菌致病过程中的作用机理提供了基础。     

橡胶树炭疽菌生物学和侵染特性研究

橡胶树炭疽病是危害我国橡胶树的一种重要叶病病害,致病菌为胶孢炭疽菌（Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｉｍ ｇｌｏｅｏｓｐｏｒｉｏｉｄｅｓ（ｐｅｎ２）Ｓａｃｃ）。对其生物学特性研究结果表明,在２８℃下,有利于菌丝体生长,产孢和孢子萌发。最适合菌丝体生长的ｐＨ值为６。黑暗下有利于孢子萌发和菌丝体生长,但产孢则不如在光照条件下。在１００％相对湿度下孢子萌发率最高。在葡萄糖,橡胶叶汁和琼脂胶等营养液中,孢子萌发     

戊唑醇与苯醚甲环唑混配对橡胶树炭疽病菌的联合毒力

采用室内生长速率法，研究戊唑醇和苯醚甲环唑混配对橡胶树炭疽病菌的增效作用。结果表明，不同配比的戊唑醇和苯醚甲环唑对橡胶炭疽病菌的联合作用表现为拮抗性、加和性及增效性3种不同作用，不同的炭疽病菌株对同种配比的药剂表现出不同的敏感性。戊唑醇与苯醚甲环唑以1∶3混配对胶孢炭疽菌RC178的增效最明显；1∶3和2∶5混配时，对尖孢炭疽菌RC169增效最佳；2∶5混配时，对胶孢炭疽菌RC227增效最优。     

橡胶树炭疽菌生物学和侵染特征研究

橡胶树炭疽病是危害我国橡胶树的一种重要叶部病害,致病菌为胶抱炭疽菌。对其生物学特性研究结果表明,在28 ℃下,有利于菌丝体生长、产孢和孢子萌发 。最适合菌丝体生长的pH值为6。黑暗下有利于孢子萌发和菌丝体生长,但产孢则不如在光照条件下。在100 %相对湿度下孢子萌发率最高。在葡萄糖、橡胶叶汁和琼脂胶等营养液中, 孢子萌发率高于清水对照。对其侵染特征研究结果表明,主要侵染源为受害嫩梢和半枯死枝条,寄主范围广泛。病菌可从伤口、气孔和表皮3种途径入侵,风雨是传播媒介。潜育期一般3~6d,条件最适宜时潜育期为1~ 2d。田间气温21~24℃、相对湿度大于95%时,病菌产孢多,侵人迅速,病斑扩展快     

13种苯丙烷代谢物对6种炭疽菌的抑菌活性研究

炭疽病是广泛影响热带、亚热带植物的真菌性病害。开发绿色农药是有效防治炭疽病的重要手段。热带牧草柱花草的转录组和代谢组研究表明,苯丙烷代谢通路在响应炭疽菌侵染过程中显著上调。为评价苯丙烷代谢物的抑菌活性,本研究采用体外抑菌试验,测定了13种苯丙烷代谢物对柱花草胶孢炭疽菌、橡胶胶孢炭疽菌、大薯胶孢炭疽菌、芒果胶孢炭疽菌、番木瓜胶孢炭疽菌和橡胶尖孢炭疽菌等6种炭疽菌的菌丝生长抑制作用;进一步测定了活性较好的代谢物及其两两组合对6种炭疽菌菌丝生长和5种炭疽菌孢子萌发的抑制作用。结果表明,13种代谢物对6种炭疽菌的抑制效果不同,在500 μmol/L和1000 μmol/L的浓度下,紫檀芪对6种炭疽菌菌丝生长的抑制效果最好,高浓度时平均抑制率可达47.47%~80.74%;在1000 μmol/L的浓度下,根皮素和香豆素对6种炭疽菌菌丝生长也有一定的抑制效果,而其他9种代谢物对6种炭疽菌抑制作用较弱或者无明显抑制作用。代谢物两两组合时,含紫檀芪的代谢物组合对6种炭疽菌菌丝生长有显著的抑制作用,平均抑制率为31.07%~89.05%;紫檀芪及含紫檀芪的代谢物组合对5种炭疽菌孢子萌发有显著的抑制作用,对柱花草胶孢炭疽菌、橡胶胶孢炭疽菌、橡胶尖孢炭疽菌、芒果胶孢炭疽菌和番木瓜胶孢炭疽菌毒力最强的代谢物或组合分别为紫檀芪+根皮素、紫檀芪+阿魏酸、紫檀芪+阿魏酸、紫檀芪+根皮素、紫檀芪,IC₅₀值分别为293.475、67.660、184.764、108.671、68.417 μmol/L。本文所发掘的代谢物及其组合可为进一步研究防治炭疽病的绿色农药提供理论基础。     

稻瘟病菌分生孢子发芽和附着胞形成的影响因素研究

在8种培养基膜,多种cAMP、IBMX浓度梯度的琼脂表面膜,不同营养液及pH值条件下,研究了稻瘟病分子孢子发芽和附着胞形成的状况,并对稻瘟病拮抗细菌培养液的作用进行了研究。稻瘟病菌(Magnaporthe grisea) 91-11B1的分生孢子悬浮液浓度在10000~1000个/mL 和pH值在7.0为最适孢子萌发条件,但不影响附着胞的形成。疏水基物表面、营养饥饿或洋葱表皮细胞表面可以刺激附着胞形成。2.5 mmol/L cAMP和8.0 mmol/L磷酸二酯酶抑制剂IBMX显著地促进附着胞的形成。与去离子水和水洗法相比,自来水和振落法获得的分生孢子更有利于附着胞的形成。筛选到3株对孢子发芽及附着胞形成有强烈抑制作用的拮抗细菌     

香蕉黑星病菌侵入前发育的Ca2+/CaM依赖信号研究

测定Phyllosticta musarum 在不同疏水性的人工表面上的孢子萌发率和附着胞形成率,以及Ca2+,CaM依赖信号系统是否参与了P.musarum侵入前阶段的发育调控.结果表明,P.musarum在侵染寄主时形成一种专门的附着胞作为侵染结构,刚性的疏水表面有利于诱导P musarum分生孢子的萌发.刚性表面则有利于附着胞的形成,而对这种与侵染相关的特化结构即附着胞的发育影响不显著.加入外源Ca2+,不论浓度如何都能促进分生孢子萌发,而附着胞形成率在高浓度外源Ca2+存在时则明显下降.Ca2+敖合剂EGTA有抑制孢子萌发和附着胞形成的作用,但在EGTA中加入Ca2+载体A23187和CaCl2可部分缓解EGTA的这种抑制作用.磷酸酯酶C(PLC)抑制剂Neomycin可以抑制附着胞形成.Ca2+通道阻断剂TMB-8和Nicaldipine,CaM拈抗剂Chloropromazine在微摩尔剂量水平上均可抑制附着胞形成.证明由Caz+/CaM信号系统控制的生化过程参与了P.musarum在寄主香蕉表面侵入前的形态建成.     

橡胶树胶孢炭疽菌组蛋白乙酰转移酶CgGCN5调控致病力功能研究

胶孢炭疽菌引起的炭疽病害是造成海南省橡胶减产的主要原因之一。研究该病原菌致病力的分子机制能够为新型防控策略的研发提供理论依据。在橡胶树胶孢炭疽菌中,存在1个编码组蛋白乙酰转移酶的基因CgGCN5。在本研究中,通过同源重组原理及原生质体转化法构建了橡胶树胶孢炭疽菌CgGCN5的敲除突变株和互补菌株,并对其生长、产孢及致病力等表型进行了初步分析。结果表明,与野生型菌株相比,CgGCN5敲除突变株的生长速率、产孢能力均显著下降;并且突变株对橡胶树叶片的致病力也显著下降;进一步分析表明,突变株丧失了对玻璃纸的穿透力。与此同时,互补菌株能够恢复突变株的相应表型。以上结果表明,CgGCN5在调控胶孢炭疽菌的生长及致病力中起重要作用。     

阿米西达控制杧果果实采后病害的技术

进行了阿米西达控制杧果采后病害的研究。结果表明:在测试的3种药剂中,阿米西达对杧果炭疽病病菌(Colletotrichum gloeosporioides) 的菌丝体生长、产孢及孢子萌发均有明显的抑制作用,而对杧果蒂腐病菌(Botrydiplodiatheobromae) 菌丝体生长的抑制效果较施保功差;采后用100~200μgmL的阿米西达控制杧果贮运期间炭疽病的发生具有较好的效果,而在此质量浓度时,对杧果蒂腐病和酸腐病的防效则不稳定;阿米西达结合热处理防治杧果炭疽病的效果更好。      

Effect of pre-harvest calcium chloride applications on fruit calcium level and post-harvest anthracnose disease of papaya

Anthracnose disease of papaya, caused by Colletotrichum gloeosporioides Penz, can cause extensive postharvest losses. The goal of this research was to use pre-harvest calcium applications to reduce anthracnose disease. Six pre-harvest foliar calcium sprays were applied biweekly to papaya trees in experimental orchards at Universiti Putra Malaysia. Additional in vitro and in vivo tests were carried out to test the effect of calcium on fruit calcium content, spore germination, mycelial growth and disease severity. Calcium chloride at 1%, 1.5% and 2.0% concentrations significantly decreased spore germination. Calcium content of papaya fruit was significantly increased by calcium sprays at a concentration of 2.0% in 2012 and 2013. In vivo studies showed that increasing calcium content in fruit by calcium sprays at 1.5 and 2.0% concentrations significantly reduced anthracnose incidence of fruits during five weeks storage at 12 ± 2 °C, and delayed initiation of disease symptoms by four weeks.     

解淀粉芽孢杆菌HAB-7对18株植物病原真菌的抑制作用

HAB-7是一株分离自豇豆根际土壤、具有较强抑菌作用的解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。研究HAB-7对18株植物病原真菌及其发酵液粗提蛋白对植物病原的抑制作用，并测定其对番茄种子的促生作用。采用平板对峙法测定其对18株植物病原真菌的抑制活性，以橡胶树炭疽菌为指示菌，对其发酵上清液经60%、80%硫酸铵盐析获得的抗菌粗蛋白进行测试；并将HAB-7菌液稀释成6个浓度梯度，分别用来对番茄种子进行促生测试。结果显示：HAB-7对18株植物病原真菌的平均抑菌率为61.03%；     

阿米西达对芒果炭疽病的防治

进行了室内药剂对芒果炭疽病菌的毒力测定及2 a大田喷药防治芒果炭疽病的试验。结果表明,阿米西达具有很好的抑制产孢和孢子萌发的能力,在芒果刚抽嫩稍或花穗抽出3 cm时,每隔7-10 d喷150-200μg·mL-1阿米西达SC可有效地控制芒果叶片炭疽病的为害程度,防效达44.84％-87.06％;同时还可减少炭疽病的潜伏侵染菌量,并减轻果实贮藏期间的病情。      

芒果炭疽病菌生防细菌的筛选,鉴定及生防潜能的初步研究

从热带作物,果树,蔬菜的叶,果上和根系周围土壤中分离到了１１０个芽孢杆菌分离物,以炭疽病菌－芽隐杆菌对峙培养法筛选出拮抗力较强的Ｂａ２４,Ｂａ６和Ｂａ２３。经形态特征,培养特性和生理生化性状的测定,这３株芽孢杆菌被鉴定为桔芽孢杆菌。抑菌谱的测定结果表明,这３株芽孢杆菌为广谱性的拮抗菌。经离心,过滤,除去菌体后的Ｂａ２４,Ｂａ,Ｂａ２３的培养滤液对芒果炭疽病菌的菌丝生长和分生孢子萌发均有较好的抑制作