适用于SSR分子标记的玉米单粒种子DNA快速提取新方法

研究了玉米单粒种子DNA的提取新方法,利用该方法提取DNA,液氮、研磨、离心、沉淀、SDS、CTAB及氯仿都不用,一个工作人员提取100粒种子(1个检测样品)DNA只需30min左右,一天可以提取1600粒种子(16个检测样品)的DNA,并且提取的DNA分子量大,不降解,完全可以满足利用SSR分子标记进行DNA指纹分析的需要,为DNA指纹技术在玉米种子纯度及真伪快速鉴定中的广泛应用解决了关键性技术难题。     

分子标记技术在玉米和高粱品种分析中的初步应用

以玉米丹2100和高粱辽杂10号的可见叶片为材料,应用RAPD筛选技术,对玉米、高粱基因进行分子标记.主要结果如下:(1)对玉米丹2100和高粱辽杂10号叶片总DNA提取纯化的方法进行优化,确定提取总DNA的最佳方法.即CTAB法.(2)初步建立了玉米丹2100和高粱辽杂10号RAPD反应体系,并确定了RAPD反应体系中最佳的引物种类及PCR扩增的最佳反应条件,获得了稳定高效的RAPD扩增结果及多态性较好的DNA.(3)应用RAPD技术筛选14个随机引物,共扩增出45条谱带.A2、G4、Y13分别扩增出3条差异谱带分别为OPG-04800、OPA-02450、OPY-13500.     

茧蜂标本基因组DNA提取及RAPD分析

对茧蜂标本总DNA的3种提取方法进行了比较试验。结果表明，改进的十六烷基三乙基溴化铵(Cetyllrirnethyl Ammonium Bromide，CTAB)法效果最好。在优化反应条件下用25个随机引物对蚜茧蜂亚科下的6种蚜茧蜂供试材料进行RAPD(Random Amplified Polymorphic DNA)技术分析，共得到159条带，各片段长度为200～3000bp。依据RAPD标记数据聚类分析，确定它们之间的亲缘关系，结果与传统分类的一致。     

高粱DNA提取纯化方法的比较及RAPD反应条件的建立与优化

以高粱叶片为试材，采用4种方法提取DNA，并对这4种方法进行比较，选择高粱DNA提取纯化的最佳方法，同时对高粱RAPD反应条件进行研究，从而建立了一个适合高粱RAPD分析的最佳反应系统。     

玉米单粒和单叶片DNA快速提取及SSR标记分析

优化建立了玉米单粒种子胚和单叶片基因组DNA快速提取方法.琼脂糖凝胶检测结果表明,提取的DNA主带清晰,无降解现象,质量好,可以满足SSR-PCR分析的需要.结合采用SSR分子标记技术,此DNA提取方法可有效地用于玉米种子纯度检验和分子标记辅助育种。     

多重引物SSR技术鉴定玉米杂交种子纯度的研究

采用热碱法提取玉米种子DNA,并且运用多重引物(3对SSR引物)PCR对其进行SSR扩增,进行种子纯度鉴定。结果表明:①利用热碱法可以实现玉米种子的DNA快速提取,同时降低了检测成本;②利用三重引物PCR技术降低了检测结果的误差,提高了检测结果的准确性。因此,将这两种技术结合起来,将极大地推动SSR技术在玉米种子纯度鉴定中的推广和应用。     

利用聚合酶链式反应技术研究单粒古代稻谷(公元800年)离体DNA片段的扩增

 在东南亚地区已发掘出很多古代稻谷，如果能从这些古稻谷中把DNA提出加以分析，可以得到有关栽培稻的系统分化和地理传播方面的直接信息。古代稻种的基因型相当复杂，必须要能从单粒种子开始分析，方能得到有价值的资料。为此，我们进行了从单粒古稻谷中提取DNA的研究工作。本研究采用通常提取植物组织中DNA的方法，从在日本挖掘出的古代稻谷单粒种子中提取出了50-100 ng左右的DNA片段。以这些DNA作为模扳，用聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction，PCR)技术将DNA加以扩增．由其中几个DNA片段初步合成了相当于水稻光敏色素基因的DNA序列。     

大麻RAPD分子标记的引物筛选

利用RAPD分析技术对野生型大麻Ym43及栽培品种大麻Ym36的基因组DNA进行分析,优化了大麻总DNA的提取方法和PCR扩增条件,从Operon公司的OP系列280个随机引物中筛选出42个扩增效果良好的引物,为以后RAPD技术应用于大麻的遗传研究奠定了基础。     

适于AFLP分析的大麻干叶DNA快速提取方法研究

基因组DNA提取是分子生物学实验研究的一项基础技术,而高质量DNA是AFLP试验成功的关键.本研究在传统CTAB法的基础上进行4种处理来提取大麻干叶片基因组DNA,以β-巯基乙醇,PVP-40和抗坏血酸不同组合及浓度为因素进行了试验.试验结果表明:在4种处理中,采用在提取液添加2%β-巯基乙醇(V/V)和3%PVP-40(M/V)提取的DNA质量最高,无褐化,紫外分光光度计测定其OD260/OD280为1.8～2.0,经酶切消化,AFLP-PCR扩增的带型清晰稳定,重复性好,说明这种改进DNA提取方法适于大麻AFLP分析.     

大麻RAPD分子标记的引物筛选

利用RAPD分析技术对野生型大麻Ym43及栽培品种大麻Ym36的基因组DNA进行分析,优化了大麻总DNA的提取方法和PCR扩增条件,从Operon公司的OP系列280个随机引物中筛选出42个扩增效果良好的引物,为以后RAPD技术应用于大麻的遗传研究奠定了基础.     

几种麻类作物及其近缘种植物总DNA的提取与鉴定

采用Pich和 Schubert 1993年发展的SDS方法，经适当改进后，成功地从苎麻、红麻、黄麻、青麻四种麻类作物及其近缘种植物中提取了细胞总DNA，并对其得率、质量和纯度进行了鉴定。所得的DNA可进行限制性内切酶消化、PCR扩增和RAPD分子标记。本研究发展的这一快速、简便、适于麻类作物及其近缘种植物的总DNA提取方法，将有助于在DNA分子水平研究麻类种质资源的遗传多样性。     

甘蔗基因组DNA提取方法的比较

采用2×CTAB法和两种改进的SDS法分别从甘蔗不同的器官中提取DNA。通过对所提取的DNA浓度和纯度进行方差分析,并将所提取的DNA进行基因克隆和多态性扩增(RAPD),得到了较清晰的扩增图谱,克隆出目的基因片段,证明改进的SDSⅡ法是一种高质量去除多糖、色素和蛋白质等杂质的有效方法,所提取的DNA适合于甘蔗各分子生物学研究。     

利用聚合酶链式反应技术研究单粒古代稻谷(公元800年)离体DNA片段的扩增

在东南亚地区已发掘出很多古代稻谷,如果能从这些古稻谷中把DNA提出加以分析,可以得到有关栽培稻的系统分化和地理传播方面的直接信息。古代稻种的基因型相当复杂,必须要能从单粒种子开始分析,方能得到有价值的资料。为此,我们进行了从单粒古稻谷中提取DNA的研究工作。本研究采用通常提取植物组织中DNA的方法。从在日本挖掘出的古代稻谷单粒种子中提取出了50—100ng左右的DNA片段。以这些DNA作为模板,用聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)技术将DNA加以扩增。由其中几个DNA片段初步合成了相当于水稻光敏色素基因的DNA序列。     

苎麻属植物RAPD反应体系影响因子的研究

以苎麻属植物中的4个种为材料，用SDS和CTAB2种方法提取基因组DNA并比较其RAPD分析的效果；对RAPD反应体系中的一些重要参数进行了优化，建立了适合苎麻属植物RAPD分析的反应体系。即在25μL的反应总体积中Mg^2 浓度为1.5mmol/L，dNTPs浓度为0.20mmol/L，40ng模板DNA，Taq酶1.0单位；反应程序为95℃预变性5min；前5个循环为94℃变性1min，36℃结合1min，72℃延伸2min；后40个循环为94℃30s，℃36℃1min，72℃2min（最后1个循环为10min）；共45个循环。该反应体系具有良好的稳定性和重复性。     

玉米品种德美亚多重SSR-PCR系统的建立及应用

玉米杂交种纯度的优劣直接决定其产量,常规检测方法采用若干单引物进行若干次电泳检测,鉴定周期长,效率低,不能及时反映杂交种纯度,难以及时指导大田生产.为了提高玉米种子纯度检测的准确性,建立稳定高效的多重PCR检测技术,本研究以'德美亚1号'、'德美亚2号'、'德美亚3号'及其父母本为试验材料,通过比较不同DNA提取方法,...     

甜菜DNA提取新方法初探

本文报道了一个全新的甜菜DNA提取方法，该方法较以往的甜菜DNA提取方法有所不同。它是利用鲜嫩的花蕾为试材，以略有改进的苯酚／氯仿抽提法提取DNA。利用冷冻研磨或者用玻璃棒直接捣碎试材，来提取DNA。该方法简单，易操作，DNA纯度较高，可以直接用于RAPD分析，实验效果较好。     

槟榔基因组DNA提取方法及RAPD分析体系的初步优化

采用CTAB法、改良CTAB法和高盐低pH法等3种不同的方法比较了槟榔基因组DNA提取的效果,其中改良CTAB法最优,提取的DNA质量高,DNA降解少,杂质含量少。通过对退火温度、DNA模板用量、TaqDNA聚合酶浓度等因素的优化实验,建立了槟榔RAPD分析体系,从PCR扩增程序和反应体系两个方面对槟榔RAPD分析体系进行了优化并验证了优化后的体系扩增谱带清晰、多态性强稳定性好。     

花生不同部位对提取DNA的影响

采用CTAB法和SDS法，分别从花生的根尖、下胚轴、种子、幼叶中提取基因组DNA，所提DNA片段长度都在21 kb以上；同种方法中部位之间的DNA纯度没有差异，产率差异极其显著，从种子、根尖、下胚轴到幼叶产率依次升高，CTAB法中产率从128．5～498．5ng／mg，SDS法中产率从225．O～542．6ng／mg；两种方法中，相同部位之间只有叶片在纯度上差异显著，产率上相同部位之间的差异极其显著。用CTAB法从叶片中提取DNA，采用RAPD方法，对19个花生品种的基因组进行扩增，结果显示所提DNA满足分子分析的要求。RAPD可用于亲本和品种的鉴定。     

一种快速高效的DNA提取方法研究

DNA提取技术是分子实验的一个重要步骤,快速、高效的植物DNA提取方法是样品需要量大的分子实验的一个关键技术。本实验通过改进传统的DNA提取方法,使用96孔联体试管板,而不是单个离心试管,对叶片进行冷冻干燥后粉碎,无需使用液氮。在实验过程中,使用排枪操作,CTAB法提取DNA。以小麦为例,依据该方法提取幼苗叶片DNA,并选取6对引物对DNA样品进行PCR扩增,使用ABI PRISM 3730 DNA分析仪对扩增产物进行分析,以检测提取的DNA质量。结果表明,本实验的DNA提取方法所得到的PCR扩增条带均有较高的强度。在6对实验引物的扩增结果中,扩增条带强度最好的引物有98%的样品在6 935～16 786 RFU( Relative Fluorescence Unit)之间;扩增条带强度较低的引物有93% 的样品在532～1 111 RFU之间;在所有的PCR扩增反应中,最低PCR扩增条带强度为205 RFU,缺带样品数量平均只有0.8%。按照本实验的方法操作,每人每天可提取上千个样品的DNA。因此,该DNA提取方法是一种高效、快速、能获得高质量DNA的有效方法。     

高粱抗蚜的分子标记RAPD初步分析

以高粱BTAM428I、CS-12B、124B的叶片为材料,应用RAPD筛选技术对高粱基因进行分子标记。用CTAB法对高粱BTAM428I、CS-12B、124B的叶片DNA提取纯化。初步建立了高粱BTAM428I、CS-12B、124B的RAPD反应体系。在此实验条件下确定了RAPD反应体系中最佳的随机引物种类,共筛选了41个RAPD随机引物,获得了较稳定的RAPD扩增结果及多态性较好的DNA。其中有11个引物能对DNA扩增,产生差异谱带。