内蒙古苹果树腐烂病病原菌鉴定

【目的】明确内蒙古地区引起苹果树腐烂病的病原种类。【方法】采用形态学结合分子生物学的方法,对内蒙古呼和浩特市周边果园的苹果腐烂病病菌进行分离、鉴定和致病力测定。【结果】从感病’金红’苹果树上分离到2株苹果腐烂病病菌,命名为QH1和QH2。QH1与QH2的致病力与分离自陕西杨凌的参照菌株YL1相同;菌落、分生孢子及子实体的形态特征均符合Cytospora属的特征;基于内转录间隔区、核糖体大亚基片段、转录延长因子和β微管蛋白4个基因的序列一致性和系统发育的分析证明,QH1属于Cytospora schulzer,QH2属于Cytospora mali。【结论】内蒙古呼和浩特地区苹果腐烂病病菌为C.schulzer和C.mali两种致病菌。     

琯溪蜜柚炭疽病病原鉴定

【目的】确定引起琯溪蜜柚炭疽病的病原种类,为针对性地防治炭疽病提供理论依据。【方法】2014—2015年从平和县4个乡镇采集发病材料,对病原菌进行分离、纯化、致病性测定以及形态特征观测、r DNA-ITS序列分析,对病原菌的种类进行鉴定。【结果】经单孢分离后,所获得的菌株对琯溪蜜柚果实可致病,并产生典型症状,对病原菌进行显微形态观测,病原菌分生孢子及附着孢的形态为炭疽菌属真菌,以菌株GX(3)的DNA为模板,扩增得到全长为600 bp的DNA片段,并获得该菌的rDNA-ITS序列,发现其与胶孢炭疽菌Colletotrichum gloeosporioides Penz的相似性高达100%。【结论】根据病害症状、病菌的形态特征及ITS序列同源性比较的结果,将琯溪蜜柚炭疽病的病原菌鉴定为胶孢炭疽菌C.gloeosporioides。     

南昌市郊梨轮纹病病原菌鉴定

为了明确江西省南昌市郊区梨轮纹病菌的种类归属,本文从果园采集呈典型症状的梨轮纹病样本,采用组织分离法进行病菌分离和病菌纯化,获得5个梨轮纹病菌分离株,其培养性状相同且与已报道的葡萄座腔菌Botryosphaeria dothidea的培养性状一致。用菌饼对离体梨枝条进行接种,结果5个分离株均导致典型病斑,对该病斑进行再分离,又分离到与原接种菌一致的病原菌。任选其中的一个分离株NC-1进行rDNA-ITS序列扩增和序列测定,获得片段长为543bp的核苷酸序列,通过BLAST分析,发现该序列与GenBank中葡萄座腔菌的同源性高达100%。结果表明,南昌市郊区梨轮纹病菌属于葡萄座腔菌。     

海南龙眼红粉病的病原鉴定

【目的】确定海南省近年发生的新病害——龙眼红粉病病原菌种类,为科学防治提供理论依据。【方法】采集海南省龙眼主产区龙眼红粉病病果样本,通过对病原菌形态观察、致病性测定,以及病原菌的rDNA 28S和rDNA ITS序列分析进行病原鉴定。【结果】经分离纯化获得病原菌,培养后回接健康龙眼果实,出现的病害症状与田间发病症状一致,再次分离得到同样病菌,确定其为致病菌;对病原菌进行传统形态学观察,病原菌分生孢子的形态为粉红单端孢菌属真菌,将待测菌株rDNA-ITS和rDNA-28S序列与GenBank中相关菌株的序列进行比较,发现其致病菌与Trichothecium roseum的相似性达到99%。【结论】确定海南省龙眼主产区新病害龙眼红粉病的病原菌为粉红单端孢菌Trichothecium roseum。     

海南龙眼红粉病的病原鉴定北大核心CSCD

【目的】确定海南省近年发生的新病害——龙眼红粉病病原菌种类,为科学防治提供理论依据。【方法】采集海南省龙眼主产区龙眼红粉病病果样本,通过对病原菌形态观察、致病性测定,以及病原菌的rDNA 28S和rDNA ITS序列分析进行病原鉴定。【结果】经分离纯化获得病原菌,培养后回接健康龙眼果实,出现的病害症状与田间发病症状一致,再次分离得到同样病菌,确定其为致病菌;对病原菌进行传统形态学观察,病原菌分生孢子的形态为粉红单端孢菌属真菌,将待测菌株rDNA-ITS和rDNA-28S序列与GenBank中相关菌株的序列进行比较,发现其致病菌与Trichothecium roseum的相似性达到99%。【结论】确定海南省龙眼主产区新病害龙眼红粉病的病原菌为粉红单端孢菌Trichothecium roseum。     

进境美国苹果牛眼果腐病病原真菌(Neofabraea perennans)的鉴定

【目的】探明进境截获的美国苹果牛眼果腐病的病原真菌种类,为评估病菌的入侵风险提供科学依据。【方法】对苹果(Malus domestica)腐烂果实的症状特点、病菌的形态特征与培养特性进行观察,对分离物的致病性和DNA序列进行分析。【结果】32批次腐烂果实均表现果梗凹腐烂症状,病部较坚硬,病斑圆形褐色,中央色浅形似牛眼状。累计从病果上分离46株菌株,菌落圆形,气生菌丝稀少,白色至乳白色,加深至黄褐色至黑褐色,并形成深浅褐色相间同心轮纹,菌丝体最适生长温度15~20℃,经柯赫法则证实为病原菌。在病果及PDA上,病菌形成奶油色胶质状分生孢子盘,分生孢子梗瓶梗状,大型分生孢子及小型分生孢子圆柱形、直或下部稍弯曲、无色透明、单胞。基于β-微管蛋白基因序列的系统发育分析,8个代表性的分离物与已知的苹果牛眼果腐病菌Neofabraea perennans聚在同一簇。【结论】根据症状学、形态学与致病性及系统发育分析,将屡次从进境美国苹果中截获的苹果牛眼果腐病病原真菌鉴定为Neofabraea perennans,是我国高度关注的进境植物检疫性有害生物,对我国果树的生产存在安全隐患。     

山东桃褐腐病病原菌种群鉴定及致病性分析

【目的】明确山东省桃褐腐病病原菌种群结构及其致病力差异，为山东桃褐腐病病原菌的多样性研究及有效防控提供理论依据。【方法】采集烟台、威海、临沂等地桃褐腐病样本，利用形态学鉴定、rDNA-ITS序列分析、欧氏距离非加权组平均法(UPGMA)等技术手段，对桃褐腐病病原菌种类、致病力等进行分析。【结果】采集桃树叶片、果实、枝条褐腐病样品，通过组织分离获得41株桃褐腐病病原菌，这些菌株在菌落形态上存在较大差异，结合rDNA-ITS序列分析，分别鉴定为Monilinia fructicola、Monilia yunnanensis及Monilia polystroma，三者占比分别为80.48%、9.76%、9.76%。桃褐腐病病原菌菌丝生长速率为0.47～1.09 cm·d^-1,UPGMA聚类分析证实，其生长速率可被划分为慢、中、快三大类。采用桃叶片有伤接种菌饼方法，确定桃褐腐病病原菌引起的病斑大小范围为0～2.32 cm,UPGMA聚类分析证实，其致病力可被划分为强、中、弱三类。桃褐腐病病原菌菌丝生长速率及产孢量与致病力相关性分析发现，相关系数r分别为0.297 5、0....     

甘肃地区梨树腐烂病的病原种类鉴定

明确甘肃省梨树腐烂病病菌的分布、组成及其亲缘关系，为有效防治腐烂病及筛选抗病种质资源提供理论依据。以甘肃省8个市州主要梨产区不同品种梨树上典型腐烂病症状的枝干为材料，采用常规组织分离法分离纯化得到53株梨树腐烂病病菌，经柯赫氏法则验证，通过形态学及多基因序列（rDNA-ITS、EF-1α和tub2）构建系统发育树，明确致病菌种类及分类地位。结果表明，分离得到的53株菌株均与模式菌株Valsa pyri聚为一支，支持率为99%，确定引起甘肃省梨产区梨树腐烂病的病原只有1种，即V. pyri（无性型为Cytospora mali），且菌株在PDA培养基上表现出不同类型的培养性状。     

一种核桃腐烂病新病原菌的分离与鉴定

核桃■是南疆重要的经济果树之一，近年来，核桃腐烂病给核桃带来了严重的为害，关于南疆核桃腐烂病病原菌的报道也并不是唯一的。为明确核桃腐烂病病原菌的种类，通过对病斑组织分离纯化、致病性检测、病原菌形态学观察及分子生物学鉴定相结合的方法，对南疆核桃腐烂病的病原菌进行分离鉴定。结果表明，分离得到的真菌菌株3-2-3能够侵染核桃枝条导致发生腐烂病，菌株3-2-3菌落呈现白色，菌丝蓬松且茂密，在PDA培养基上能够产生担子果。以ITS基因序列构建的系统发育树中，病原菌3-2-3与裂褶菌■聚为一枝。结合菌落形态特征和分子生物学鉴定结果，确定裂褶菌■在新疆能够引起核桃腐烂病，这在南疆是首次报道。     

人参果贮藏期腐烂病病原菌研究

以腐烂人参果为试材,采用致病力检测、形态观察和rDNA-ITS序列分析等方法,研究了贮藏期腐烂病病原菌种类及致病力。结果表明:接骨木镰刀菌Fusarium sambucinum、立枯丝核菌Rhizoctonia solani、灰葡萄孢Botrytis cinerea均能引起人参果和番茄果实腐烂,2株接骨木镰刀菌形态特征、致病力有一定差异,也能引起带伤马铃薯出现典型干腐病症状。     

苹果种间杂种对苹果腐烂病感病性的遗传分析

【目的】为分析苹果实生树对苹果腐烂病抗病性的遗传规律,【方法】2010—2011年连续2 a用2个苹果腐烂病菌株对‘紫塞明珠’ב富士’的杂种实生树1 150株进行离体接种鉴定,采用次数分布分析法研究了苹果腐烂病抗病性遗传。【结果】结果表明,连续2 a接种2菌株主基因遗传率均在78.5%～85.5%。该实生群体对菌株03-8的感病性的变异由5个主基因位点分离所致,而对菌株xc56的感病性分离与4个主基因位点有关,且年份间表现稳定。【结论】离体枝条接种病原后,发病/不发病表现为质量性状遗传,发病对不发病为显性。感病的实生树接种后发病的病斑长度表现为多基因数量性状遗传。     

解淀粉芽孢杆菌BaA-007鉴定及其对苹果腐烂病的抑制作用

从苹果韧皮组织分离获得1株潜在的生防菌菌株。基于形态和16S rDNA、gyrA鉴定其为解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens），命名为BaA-007（中国农业微生物菌种保存中心，菌种编号：ACCC60382）。该菌株及其次生代谢物对苹果腐烂病菌（黑腐皮壳菌，Valsa mali）生长具有抑制作用，离体条件下可显著降低腐烂病病斑的扩散速度。以BG培养基为基础培养基，筛选其最佳培养条件为蔗糖0.5%、细菌学蛋白胨1%、硫酸二氢钾0.1%、温度36 ℃、pH 7.0。BaA-007处理后，苹果水杨酸（SA）响应性基因PR1、PR2和NPR1，茉莉酸（JA）响应性基因PDF1.2、CORONATINE INSENSITIVE 1（COI1）和AOS，乙烯（ET）响应性基因ETR1、ERF1和HEL以及几丁质合成酶B基因（Chitnase B，ChiB）在接种处理后的不同时间点均上调。综上所述，菌株BaA-007对苹果腐烂病有显著的拮抗效果，有望作为防治苹果腐烂病制剂开发的生防菌株。     

梨CRK家族基因及其腐烂病菌侵染响应成员的鉴定

在植物响应逆境过程中，半胱氨酸富集类受体激酶（Cysteine-rich receptor like kinase，CRK）起重要的调控作用。本研究中以结构域Stress-antifung（Pfam：PF01657）和Pkinase（Pfam：PF00069）的保守序列为种子序列，在全基因组范围鉴定了梨（Pryus spp.）CRK家族成员。此外，对其蛋白理化性质、进化特征、基因在染色体上的位置、顺式作用元件（cis-acting regulatory element，cis-element）和表达模式进行了分析。共获得32个CRK家族成员，其氨基酸数、分子量和等电点分别介于440 ~ 1 217、48.90 ~ 137.02 kD和5.31 ~ 8.59，主要位于质膜。根据进化分析，将来自梨、拟南芥、苹果、番茄和水稻的156个CRK分为6个亚组，梨CRK主要分布于亚组Ⅳ，Ⅴ和Ⅵ。梨CRK中存在5个串联重复的基因簇，共包含了20个成员。此外，该基因家族所有成员的启动子区域都存在多个响应激素和逆境信号的cis-element。接种腐烂病菌Valsa pyri（Vp）后，杜梨（Pyrus betulifolia，抗病）和‘早酥’梨（Pyrus bretschneideri，感病）中分别发现8个和10个CRK发生了差异表达，6个基因在两种资源中都发生了差异表达。差异基因中，Pbr001477.1和Pbr000205.4在抗、感病资源中都显著上调，而其他基因的表达量在两种资源中呈现不同的变化趋势。     

越橘葡萄座腔菌枝枯病的病原菌鉴定

 通过形态学观察、诱导产孢、致病力测定和分子生物学研究,对引起辽宁地区越橘枝枯病 的病原菌进行鉴定,确定其为葡萄座腔菌（Botryosphaeria dothidea）。病原菌在越橘植株上接种后表现枝 条枯萎、木质部变色等症状,与田间自然发病植株一致;在PDA 培养基上菌落初期为白色,后转为灰黑 色,分生孢子纺锤形或梭形,无色,单胞,内含多个油滴;水琼脂 + 麦芽提取物、苹果枝条和苹果幼果 3 种病原菌培养方法均可诱导产孢,苹果幼果是诱导病原菌产孢的最佳基质。供试菌株LB1 的rDNA-ITS 和β-tubulin 基因序列与GenBank 中已有的Botryosphaeria dothidea 序列相似性分别达到99%与100%。     

云南苹果产区苹果茎沟病毒(ASGV)的发现及其分子变异

【目的】为了查明云南省苹果产区的苹果茎沟病毒病毒(Apple stem grooving virus,ASGV)的侵染情况和不同来源分离物间的分子变异情况,【方法】以云南昭通、丽江、昆明、曲靖等地采集的325份苹果病毒样品为试材,采用RT-PCR技术对其是否携带ASGV进行检测,运用DNAMAN6.0、MEGA5.0对实验获得的6个分离物和GenBank上已登录的34个分离物进行序列比对分析。【结果】ASGV在云南各大苹果产区的发病率高达48%。序列比对结果显示,这些分离物的核苷酸序列相似性为87.3%～93.8%,氨基酸序列相似性为90.7%～98.7%。系统发育树显示,云南的6个分离物聚为一簇,而陕西省苹果分离物YL06与云南省分离物ZT1、TJX1亲缘关系比较近,聚为一支;ASGV苹果分离物要明显区别于ASGV梨分离物和CTLV柑橘分离物。【结论】云南省苹果产区苹果树的ASGV带毒率高达48%,推测可能是一种发生率比较普遍的病毒病,这是云南省发现的首次报道。系统发育树显示:本研究获得的6个苹果分离物明显区别于其他寄主分离物,并且与其他地区的分离物具有一定差异,推测在我国,ASGV的分子变异与寄主/地域来源存在着一定的相关性。     

枯草芽孢杆菌LF17与甲基硫菌灵协同防治苹果树腐烂病的效果研究

通过室内测定枯草芽孢杆菌LF17与3种化学药剂对苹果树腐烂病菌(Valsa mali)的毒力,而后将菌株LF17的菌悬液与化学药剂进行复配,探讨复配剂对苹果树腐烂病菌的室内毒力及其田间防治效果。结果表明:枯草芽孢杆菌LF17与甲基硫菌灵生物相容性最好;LF17的菌悬液与甲基硫菌灵复配剂(浓度为1.36×10⁷ cfu/mL+1.0271μg/mL,按体积比5∶5配制)对苹果树腐烂病菌的抑菌率为81.36%、毒性比率为1.66、表现为增效作用,离体枝条的防治效果为74.05%,显著高于2个单剂的防治效果,且复配剂中甲基硫菌灵的使用量减少约60%。     

苹果种质资源对苹果树腐烂病抗性评价

为全面了解苹果种质资源对苹果树腐烂病的抗性情况,利用2个不同来源的苹果腐烂病菌株,连续2 a对204份苹果种质资源进行了枝条离体接种鉴定。结果表明,接种后不同的种质资源的发病率和严重度均表现出丰富的多样性。西洋苹果资源（Malus domestica Borkh.）中发病率较低-极低的品种和类型所占的比例较高（16.6...     

枯草芽孢杆菌生防菌剂sf-628专用助剂的研发

【目的】为了获得枯草芽孢杆菌sf-628的专用助剂,【方法】将sf-628与6种不同的表面活性剂组合按重量比95∶5进行混配,并以菌液中的活菌量为依据进行筛选。同时采用国标GB 5549-90的方法测定sf-628与各个表面活性剂组合混配后稀释液的表面张力,并将其与苹果、梨叶片的临界表面张力进行比较分析。【结果】结果表明,苹果叶片正、反面的临界表面张力值分别为31.78 mN.m-1和33.75 mN.m-1;梨叶片的临界表面张力值分别为39.90mN.m-1和38.02 mN.m-1。活菌量的测定结果表明4种表面活性剂组合对sf-628表现为抑制作用,其余2种表面活性剂组合(Ⅲ和IV)则对其安全。将其与sf-628混配后0～1 000倍稀释液中,表面活性剂组合Ⅲ和IV达到临界胶束浓度,表面活性剂组合Ⅲ稀释液的表面张力大于苹果叶片的临界表面张力,故难以很好地在苹果叶片上润湿展布;表面活性剂组合IV稀释液的表面张力小于苹果、梨叶片的临界表面张力,故可以在苹果、梨叶片上黏着并润湿展布。【结论】表面活性剂组合IV可作为枯草芽孢杆菌sf-628的专用助剂在苹果、梨树上使用。