梨轮纹病菌弱毒株携带产黄青霉病毒水平传染力测定

梨轮纹病是由葡萄座腔菌（Botryosphaeria dothidea）引起。前期获得了感染葡萄座腔菌产黄青霉病毒（Botryosphaeria dothidea chrysovirus 1,BdCV1）引起弱毒的梨轮纹病菌菌株LW-C和LW-1，为进一步明确BdCV1介导弱毒菌株是否具有作为候选田间生防资源的潜力，将LW-C和LW-1分别与地理来源不同的梨轮纹病菌（B. dothidea）分离株和危害梨树严重的梨腐烂病菌（Valsa pyri）分离株XJ-28进行对峙培养试验，测定获得携带病毒的衍生菌株生长速率及致病力。研究结果显示轮纹病菌菌株弱毒因子BdCV1均能以一定频率水平传染至不同种类致病菌株中，可引起部分受体菌株生长速率下降，不同程度地抑制其生长。接种梨枝条和果实，原始受体菌株所形成病斑扩展长度约为带毒衍生菌株的2倍至4倍，表明病毒可抑制其受体菌株致病力。以上研究结果揭示了BdCV1可水平传染至不同种类受体菌株中，寄主范围广，具有作为生防因子应用于梨真菌病害中的可行性。     

不同培养条件对苹果轮纹烂果病病菌的影响

近年来 ,苹果轮纹烂果病发生严重 ,给苹果生产造成了很大的损失 ,严重影响了苹果的质量和产量。造成苹果轮纹烂果病的病原菌有2种类型 ,一类是贝伦格葡萄座腔菌(Botryosphaeria berengerianade Not.) ,即苹果干腐病菌 ,另一类是贝伦格葡萄座腔菌梨生专化型 (Botryosphaeria berengeriana deNof.f.sp piricola) ,即苹果轮纹病菌。在生物学特性方面 ,对这 2种病原菌已有过较多报道。作者于 1 998～ 1 999年做了不同培养条件对苹果轮纹病病原菌菌丝生长影响的试验 ,现将试验方法和结果报道如下。1　材料和方法　　供试菌种为苹果轮纹病菌和苹…     

梨轮纹病拮抗细菌的筛选与评价

采集南京、连云港、高邮3地梨园病叶、病果、健叶、健果、病枝、健枝和土壤样本90份,分离纯化后得到871个细菌分离物,对其进行梨轮纹病菌菌丝生长的皿内抑制试验,共获得21株拮抗能力较强的细菌,其中拮抗性能最好的细菌sf 628抑菌圈直径达45 mm,抑制率达59.21%。梨果接种试验结果表明,21株拮抗能力较强的细菌中有5株拮抗细菌对梨轮纹病菌引起的病斑扩展抑制率大于50%,其中菌株sf 628抑制率达60.61%。进一步的理化特性和分子鉴定结果表明,菌株sf 628为枯草芽孢杆菌枯草亚种。     

拮抗细菌BMY-1菌株对几种水果储藏病原真菌的抑制作用

采用平板对峙培养法测定从土壤中分离获得的拮抗细菌BMY-1菌株对柑桔绿霉病菌（Penicillium digatatum）、柑桔青霉病菌（Penicillium italicum）、苹果炭疽病菌（Glomerella cingulata）、苹果轮纹病菌（Physalospora piricola）、梨扩展青霉病菌（Penicillium expansum）、葡萄白腐病菌（Coniothyrium dlodiella）等6种水果产后病原真菌的抑制作用。结果表明，BMY-1菌株对苹果炭疽病菌（G.cingulata）和梨扩展青霉菌（P．expansum）的生长有较好的作用，抑菌率分别达48．43％和50．37％。采用液体共培养法观察到BMY-1菌株对病原真菌的菌丝有破坏作用，使苹果炭疽病菌菌丝扭曲和断裂，葡萄白腐病菌菌丝膨大畸形。对几种水果同时接种拮抗细菌BMY-1和病原真菌，BMY-1菌株对苹果炭疽病病斑和梨扩青病病斑扩展有较强的抑制作用，并能有效延迟葡萄白腐病发病时间。     

来源于产黄青霉病毒科成员的分离物对梨轮纹病菌生长及其致病力的影响

【目的】明确产黄青霉病毒科成员(Botryosphaeria dothidea Chrysovirus 1,BdCV1)对寄主梨轮纹病菌(Botryosphaeria dothidea)菌株生物学性状的影响,证实单独感染BdCV1梨轮纹病菌分离株是弱毒菌株;以期确定BdCV1是否为引起梨轮纹病菌弱致病力的单一因子。【方法】从前期弱致病力复合感染双分体病毒科成员Bd PV1和BdCV1的梨轮纹病菌LW-1中经多代菌丝分离获得的疑似仅单独感染BdCV1分离株(命名为LW-C)为材料;采用dsRNA检测、RTPCR,鉴定LW-C菌株中仅携带BdCV1。采用菌丝块接种于PDA培养基以及3针针刺法接种梨果实,观察其菌落形态以及发病情况,测定菌落生长速度和致病性,明确LW-C生物学特性。将LW-C对无毒菌株Mock进行水平转染,检测其传染后衍生菌株的dsRNA并测定其生物学特性。【结果】证实了LW-C仅感染BdCV1,具有弱毒特性;水平转染结果明确了BdCV1因子对梨轮纹病菌的菌落形态、生长速度有抑制作用,对寄主有弱致病力。【结论】确认了BdCV1是引起梨轮纹病菌致病力衰退的主要因子,为真菌病毒防治果树轮纹病害提供了新颖的生防材料。     

苹果轮纹烂果病的研究Ⅰ症状与病原菌

苹果轮纹烂果病在辽宁为害十分严重。该病的果实症状，初以皮孔为中心产生褐色圆形小斑点，扩大后形成深浅相间的轮纹大斑，上生黑色小点，不凹陷，迅速烂至全果。从不同树种和苹果烂果上分离到Ｍａｃｒｏｐｈｏｍａ属的６种菌株，即苹果轮纹病菌、干腐病菌、梨轮纹病菌、杨树水泡溃疡病菌、苹果轮纹烂果病菌Ａ和Ｂ．这些菌株的无性世代在形态上无明显差别。用ＰＤＡ平板培养，在黑暗条件下，菌丝体先为白色，后转灰，最后变黑色；不产生分生孢子器；在散射光下，苹果和梨轮纹病菌的菌丝体为青灰色，苹果干腐病菌和杨树水泡溃疡病菌则为黄褐色；苹果轮纹烂果病菌Ａ类似前者，Ｂ类似后者。用各菌株接种苹果果实和枝干，均表现较强的致病力，其果实症状均相同，但在枝干上的症状却有明显区别。     

我国梨腐烂病病原菌的初步鉴定及序列分析

【目的】为了对我国梨腐烂病病原菌进行初步鉴定和序列分析,【方法】从我国15个省(市)梨产区采集腐烂病样品并观察其田间危害症状,通过组织分离法分离获得168份梨腐烂病菌分离株,从中选取72份进行单孢纯化,共获得79份梨腐烂病菌纯化分离株;观察在PDA、25℃黑暗条件下病原菌菌落形态以及产孢体形态,并对其在梨枝条上产生的分生孢子器徒手切片置显微镜下观察其结构特征和分生孢子形态;采用菌丝块接种法测定梨腐烂病菌在‘翠冠’梨离体枝条上的致病力。对部分菌株rDNA-ITS进行PCR扩增、测序,利用BLAST软件与GenBank数据库进行序列相似性分析,并用MEGA 4.1和邻接法构建系统发育树。【结果】根据梨腐烂病菌各分离株在PDA上的菌落形态特征可分为Ⅰ型和Ⅱ型两种菌落类型,不同梨腐烂病菌分离株在PDA上产生多种类型的产孢体,不同梨腐烂病菌菌株在离体梨树枝条上的致病力存在差异,我国梨腐烂病菌的rDNA-ITS核苷酸序列一致率为99.98%~100%,与苹果腐烂病菌分别聚在同一亚组的两个分支。【结论】我国梨腐烂病病原菌存在不同的菌落类型,其rDNA-ITS核苷酸序列分析显示均为V.mali var.pyri。     

2株枯草芽孢杆菌对梨轮纹病菌的室内抑制作用研究

研究了2株枯草芽孢杆菌Sf-19和Sf-28对梨轮纹病菌的室内抑制作用,结果表明,枯草芽孢杆菌的不同浓度处理对梨轮纹病菌菌丝生长、孢子萌发及果实上梨轮纹病菌均有一定的抑制作用。枯草芽孢杆菌Sf-19培养原液对梨轮纹病菌的综合抑制效果最佳,对梨轮纹病菌菌丝生长的平板抑制率为87.33%,孢子萌发的抑制率为97%,果实上梨轮纹病菌的抑制效果研究分为保护(Ⅰ)和治疗(Ⅱ)两部分试验进行,Sf-19培养原液保护试验(Ⅰ)中对梨轮纹病菌的抑制率为71.97%,治疗试验(Ⅱ)为64.92%;生防菌Sf-28培养原液对梨轮纹病菌的综合抑制效果次之,对梨轮纹病菌菌丝生长的平板抑制率为87%,孢子萌发的抑制率为80%,Sf-28培养原液对果实上梨轮纹病菌的抑制率保护试验(Ⅰ)为64.54%,治疗试验(Ⅱ)为59.21%。2株枯草芽孢杆菌均随着稀释倍数的增大防治效果降低,综合比较枯草芽孢杆菌Sf-19、Sf-28不同浓度处理的效果好于对照生防菌株Bs-916。     

碳酸氢钠(NaHCO_3)对生防菌防治采后梨轮纹病的影响

由贝伦格葡萄座腔菌梨生专化型Botryosphaeria berengeriana de.Not.f.sp.piricola(Nose)引起的梨轮纹病在世界产梨区普遍发生,生物防治采后梨轮纹病能降低梨果表面化学杀菌剂的残留量,保护生态环境和人类健康。通过平板抑菌试验和梨果活体接种试验,研究NaHCO3对几株生防菌防治梨轮纹病的影响。室内试验结果表明,生防菌单剂对梨轮纹病菌的防效为75.77%～85.41%;与NaHCO3协同作用后防效提高,为83.00%～90.23%。梨果试验结果表明,先接种病菌再喷施药剂时,生防菌11对梨轮纹病的防效为23.83%;与NaHCO3协同作用后防效提高,为48.16%～74.57%。先喷施药剂再接种病菌时,生防菌11对梨轮纹病的防效为28.72%;与NaHCO3协同作用后防效明显提高,为51.06%～80.91%。先喷施生防菌液再喷施NaHCO3溶液的处理防效最好。因此可以采用生防菌和NaHCO3协同防治采后梨轮纹病。     

苹果轮纹烂果病的研究：I症状与病原菌

苹果轮纹烂果病在辽宁为害十分严重。该病的果实症状，初以皮孔为中心产生褐色圆形小斑点，扩大后形成深浅相间的轮纹大斑，上生黑色小点，不凹陷，迅速烂至全果。从不同树种和苹果烂果上分离到Ｍａｃｒｏｐｈｏｍａ属的６种菌株，即苹果轮纹病菌、干腐病菌、梨轮纹病菌、杨树水泡渍疡病菌、苹果轮纹烂果病菌Ａ和Ｂ。这些菌株的无性世代在形态上无明显差别。用ＰＤＡ平板培养，在黑暗条件下，菌丝体先为白色，后转灰，最后变黑色；不     

苹果抗轮纹病机制研究进展

在中国引起苹果轮纹病的病原菌为葡萄座腔菌（Botryosphaeria dothidea），其主要通过自然孔口直接侵染苹果，并分泌细胞降解酶等使苹果组织降解以促进病菌的进一步侵染，而苹果可通过增强细胞壁的木质化、释放抗菌化合物以及产生免疫蛋白等抑制病菌。通过对苹果轮纹病的危害及病原菌种类、病菌侵染机制、苹果的抗性机制等方面的详细综述，为有效防治苹果轮纹病提供理论依据。     

6种杀菌剂对猕猴桃主要腐烂病菌的室内毒力测定

葡萄座腔菌Botryosphaeria dothidea和拟茎点霉菌Phomopsis sp.是引起江西省奉新县猕猴桃果实腐烂的两种主要病原菌。本文采用菌丝生长速率法测定了6种杀菌剂的毒力,结果表明,75%肟菌酯.戊唑醇(拿敌稳)水分散粒剂、50%异菌脲(扑海因)悬浮剂、10%苯醚甲环唑(世高)水分散粒剂、70%甲基硫菌灵(甲基托布津)可湿性粉剂、60%吡唑醚菌酯.代森联(百泰)水分散粒剂等5种杀菌剂对葡萄座腔菌和拟茎点霉菌均有较强的毒力,对葡萄座腔菌的EC50值依次为0.143 9、0.150 2、0.179 5、0.264 0和0.946 6μg/mL;对拟茎点霉菌的EC50值依次为0.089 3、0.222 8、0.132 0、0.403 4和0.792 2μg/mL;50%醚菌酯(翠贝)水分散粒剂则对两种病菌的毒力很弱,对葡萄座腔菌和拟茎点霉菌的EC50值分别高达7 890.7和12 881.0μg/mL。     

化学药剂敌力脱与拮抗细菌协同作用防治梨轮纹病研究

从南京、连云港、高邮三地的梨园采样,分离得到梨轮纹病病原菌25株及871个细菌分离物,25株病原菌致病性分化测定结果表明菌株N-BG-L5的致病力最强;871细菌分离物拮抗能力试验结果表明,拮抗细菌sf628对梨轮纹病菌菌丝生长具有很强的抑制性,抑菌圈直径达45mm。常见26种化学药剂对梨轮纹病菌的室内毒力测定结果表明,25%敌力脱能有效抑制梨轮纹病菌菌丝生长,EC50值为0.1522mg·L-1。将拮抗细菌sf628与25%敌力脱进行复配,结果表明配比为1∶3、1∶2、1∶1、2∶1时增效比均大于1.5,2种单剂复配后有增效作用。其中配比为1∶3时对梨轮纹病菌的毒力最强,增效比为2.942。拮抗细菌sf628与25%敌力脱配比为3∶1时,增效比为1.071,2种单剂复配后有相加作用。     

石榴采后腐烂病病原菌的分子鉴定

按照柯赫氏法则对石榴采后腐烂病病原菌进行了分离, 应用PCR技术对分离菌rDNA的内转录间隔区( ITS区) 基因克隆后测序, 并将所测序列提交到欧洲分子生物学实验室核酸数据库( EuropeanMolecular Biology Laboratory Genbank) , 通过Blast程序将该序列与数据库已有的序列进行分析比较, 发现与葡萄座腔菌(Botryosphaeria dothidea) 的同源性达到了99%以上, 因此认为石榴腐烂的病原菌是葡萄座腔菌。该菌引起的石榴腐烂病害特征与以往报道的石榴干腐病相似。对葡萄座腔菌的部分生物学特性和侵染循环规律进行了描述。     

羊肚菌白腐病病原菌的分离与鉴定

以自然发生的羊肚菌白腐病病菇为试材,以病菇分离菌株为研究对象,采用形态学结合ITS序列分析技术,研究了病原菌的分类地位,并按照柯赫法则要求将病原菌进行回接验证,以期确定羊肚菌白腐病的病原菌。结果表明:羊肚菌白腐病的病原菌为曲霉属真菌。     

斑叶露兜树茎腐病病原鉴定及植株体内菌量测定

 从福建建新花卉基地采集表现茎腐症状的斑叶露兜树病株，采用常规方法分离获得10个镰刀菌菌株；经Booth镰刀菌鉴定方法及菌株的rDNA-ITS序列分析，确定为串珠镰刀菌（Fusarium verticillioides）。将所鉴定的菌株回接健康斑叶露兜树，可使植株表现茎腐病症状。将斑叶露兜树无症株（AS）与病株（S）分段取样，研究该菌在斑叶露兜树植株体内的数量分布，结果表明含菌量因植株部位和发病状态不同而有显著的差异。经不同部位取样分析，无症株和病株均表现为茎部含菌量最高，根部次之，叶部最低；在不同发病状态的植株中，病株的含菌量显著高于无症株。     

Botryosphaeria dothidea在苹果果实上的侵染过程(英文)

对Botryosphaeria dothidea通过皮孔侵入果实的过程进行了光学显微镜和扫描电镜观察,发现接种后2d分生孢子完成萌发和附着胞形成过程。接种后10d,菌丝体在皮孔表面缓慢生长。从20￣30d菌丝体加速扩展并形成几个分枝,通常从皮孔外围侵入果实,但仅限于皮孔表面组织。从40～50d,菌丝体扩展更为繁茂,一些菌丝开始突入皮孔的第2层组织。接种皮孔中可检测到多聚半乳糖醛酸酶(PG),但活性比对照高。皮孔有3层,第1层为含果胶的死组织,易被病菌侵染降解,底部的第3层非常坚固,是阻止病菌侵染的有效屏障。随果实发育,皮孔大小、数目和裂口均有规律地增加。我们的研究结果进一步证实了苹果轮纹病的潜伏侵染特性。     

越橘葡萄座腔菌枝枯病的病原菌鉴定

 通过形态学观察、诱导产孢、致病力测定和分子生物学研究,对引起辽宁地区越橘枝枯病 的病原菌进行鉴定,确定其为葡萄座腔菌（Botryosphaeria dothidea）。病原菌在越橘植株上接种后表现枝 条枯萎、木质部变色等症状,与田间自然发病植株一致;在PDA 培养基上菌落初期为白色,后转为灰黑 色,分生孢子纺锤形或梭形,无色,单胞,内含多个油滴;水琼脂 + 麦芽提取物、苹果枝条和苹果幼果 3 种病原菌培养方法均可诱导产孢,苹果幼果是诱导病原菌产孢的最佳基质。供试菌株LB1 的rDNA-ITS 和β-tubulin 基因序列与GenBank 中已有的Botryosphaeria dothidea 序列相似性分别达到99%与100%。     

苹果表面微生物数量及其与两种主要病菌的关系

对新收获及市售的8个品种苹果表皮微生物区系的分析表明,每克苹果表皮上细菌和真菌的含量分别为4.87 × 10~3CFU—7.38X10~5CFU和2.63X10~2CFU—4.75X10~2CFU.经分离纯化后得到细菌菌株273个,真菌菌株75个.以苹果贮存期两种主要病菌炭疽病菌和轮纹病菌为指示菌进行抑菌测定,得到拮抗性细菌菌株77个,真菌菌株20个.对其中拮抗性强的9个菌株在人工接种条件下测定,表明它们对苹果贮藏病害有不同程度防治作用,其中NA—W42和K'B—X71对轮纹病防治效果分别达96.3%和88.9%,PG—Wlla对炭疽病防治效果达55.6%.