云芝漆酶的分离纯化和理化性质及抗增殖活性

采用DEAE-cellulose, CM-cellulose和 Q-Sepharose离子交换层析和Superdex 75 凝胶过滤层析,从云芝(Coriolus versicolor)发酵液中纯化得到了一种漆酶, SDS-PAGE 电泳检测其为单一蛋白,分子量为67 kDa,N-端部分氨基酸序列为GIGPVADLTITNAAV.该酶可以催化氧化多种底物,其中对ABTS[ 2,2,-azinobis-(3-ethylbenzothiazoline-6-sulphonate)]的催化作用最强.最适反应条件为40 ℃, pH 5.0,其活性可以被Cu2+ 激活,被Fe3+、Hg2+、Fe2+抑制.该酶对HIV-1逆转录酶、乳腺癌MCF7细胞和肝癌HepG2细胞均具有抑制作用,其IC50 分别为 1.5 μmol/L、 2.3 μmol/L 和 4.4 μmol/L.     

番茄EST-SSR标记PCR反应体系的优化

应用L16 (44)正交实验优化番茄EST-SSR标记PCR反应体系.结果表明:20 μL体系中各反应物最适浓度为:DNA模板45 ng/20μL,引物0.75 μmol/L,Mg2+ 2.0 mmol/L,dNTPs0.4 mmol/L,Taq DNA酶0.5 U/20μL,且Mg2+对该标记反应体系影响最大.利用5对EST-SSR引物及P1、P2基因组DNA验证优化体系的可靠性,为该标记在番茄基因组分子标记辅助育种提供了试验依据.     

红芝组成型漆酶酶学性质的研究

研究了温度、pH值、金属离子和抑制剂对红芝漆酶活性和稳定性的影响,测定该漆酶的Km值和Vmax。结果表明:红芝漆酶最适反应温度为60℃,低于50℃时较稳定;最适pH值为3.0,在pH 2.5~4.0的范围表现出较强的稳定性;Cu2+、Mn2+、Mg2+对酶活有促进作用,而Cr3+、Hg2+、Fe2+和抑制剂EDTA、DMSO、SDS对酶活有抑制作用;以愈创木酚为底物时Km值为0.13 mmol/L,最大反应速率Vmax为234 nmol.mL-1.min-1。     

锦橙叶片POD动力学研究

以锦橙成熟春梢叶片提取过氧化物酶 (POD) ,分别测定了该酶的最适pH、最适温度及酶促动力学参数Km值和Vmax值 ,比较分析了常见几种POD抑制剂的作用程度。结果表明 :以邻甲氧基酚为底物 ,叶片POD的最适pH为 5 .0 ,最适温度为 32℃ ,Km值为 2 8.0 4mmol/L ,Vmax值为 147.83unit/s·gFW。在所测的 6种抑制剂 (K+、Pb2 +、CN-、Vc、硫脲及L 半胱氨酸 )中 ,CN-,Pb2 +,硫脲和L 半胱氨酸对POD表现出较强的抑制作用 ,K+对POD活性起促进作用。在一定浓度范围内 ,各种抑制剂的作用程度与其浓度具有极显著的相关性     

丝瓜过氧化氢酶(Catalase,CAT)酶学特性的研究

为研究丝瓜过氧化氢酶(Catalase,CAT)酶学特性,本研究应用分光光度计开展温度、pH、酶体积、反应底物浓度等对酶反应的影响,为丝瓜酶促褐变的研究提供基础。结果表明,CAT最适反应体系:以H_2O_2为底物,最适底物浓度为0.33 mol/L H_2O_2,Km值为0.1818 mol/L,最适温度为40℃,最适pH值为7.8,最适酶液体积为0.1 ml。     

橙色大白菜原生质体的游离和纯化

以橙色大白菜金冠2号为试材,就其子叶及下胚轴原生质体游离、纯化方法及影响因素等进行了研究.结果表明:适宜金冠2号子叶原生质体游离的条件为CPW+DPD培养基+0.8%纤维素酶R-10+0.1%离析酶R-10+0.5 mol/L甘露醇+10 mM CaCl2·2H2O+0.7 mMKH2PO4+0.1% MES,酶解温度27℃,酶解时间2 h,产量达3.52×106个/g·FW,活力60.3%;适宜金冠2号下胚轴原生质体游离的条件为CPW+DPD培养基+1.5%纤雏素酶R-10+0.3%离析酶R.10+0.5 mol/L甘露醇+10 mM CaCl2·2 H2O+0.7 mM KH2PO4+0.1% MES,酶解时间18 h,产量达2.20×106个/(g·FW),活力63.7%.而且以21%蔗糖,800 rpm等密度梯度法离心5min纯化原生质体效果最佳.     

果用香蕉薄片外植体植株再生的研究

 利用薄片培养方法, 通过直接和间接器官发生途径分别获得了‘广东631’香蕉的再生植株。该途径受多种因素影响。通过正交试验和单因子试验确定了最佳培养条件: (1)直接器官发生培养基为Ma (MS modified) + BAP 10μmol/L + KT 50μmol/L + IAA 1μmol/L ; (2)愈伤组织诱导培养基为Mb (B₅ modified) + Dicamba 10μmol/L + IAA 1μmol/L + 2 ,4-D 0. 7μmol/L + NAA 0. 5μmol/L + BAP 4. 4μmol/L + 活性炭1 g/L ; (3) 愈伤组织继代培养基为Mb + Dicam-ba 5μmol/L + IAA 1μmol/L + 2 ,4-D 0. 4μmol/L + BAP 22μmol/L + KNO₃ 500 mg/L + 维生素B₁ 40 mg/L + 活性炭0. 5 g/L ; (4) 分化培养基为1/ 2 Ma + BAP 1μmol/L + IAA 0. 5μmol/L + 活性炭1 g/L ; (5) 成苗培养基为Ma + BAP 1μmol/L + KT 4. 6μmol/L + NAA 1μmol/L。愈伤组织诱导和继代培养需在黑暗中进行。     

糙皮侧耳以果皮为基质固态发酵产漆酶及其酶学性质的研究

以漆酶活性为指标,利用不同果皮为基质对糙皮侧耳(Pleurotus ostreatus)固态发酵产漆酶的条件进行优化并对所产漆酶进行纯化,研究纯化后漆酶的酶学性质。结果表明:以柚皮为培养基质(5g柚皮、25mL水、20μL吐温-80),30℃固态发酵10d,糙皮侧耳产漆酶的活性最高,比活力为21800U/g;在该条件下将糙皮侧耳所产漆酶的粗酶液用硫酸铵沉淀、透析、浓缩、DEAE-纤维离子交换柱层析得到漆酶蛋白单一条带,SDS-PAGE检测蛋白相对分子质量约66000;该漆酶命名为Lac h2,其最适反应温度为60℃,最适反应pH值为4.5;在30～50℃,pH 4.5～6.0范围内稳定;金属离子Zn~(2+)、Mn~(2+)、Cu~(2+)和Mg~(2+)对纯化的漆酶Lac h2的酶活力有促进作用而Ca~(2+)、Ag~+和Fe~(2+)对Lac h2的酶活力有抑制作用。     

不同浓度NaCl胁迫下γ-氨基丁酸对黄瓜幼苗生长及矿质元素吸收的影响

以黄瓜品种"津春4号"幼苗为试材,采用营养液栽培法,研究了不同浓度盐(NaCl)胁迫下添加γ-氨基丁酸(GABA)对黄瓜幼苗生长和矿质元素吸收、利用的影响。结果表明:与对照相比,NaCl胁迫处理显著抑制了黄瓜幼苗的生长和K+、Ca2+、Mg2+的含量,而Cl-、Fe2+、Na2+的含量显著提高,其中150mmol/L NaCl处理比80mmol/L NaCl处理对黄瓜幼苗的伤害更严重;在2种不同浓度NaCl胁迫下,外源添加γ-氨基丁酸(GABA)均有效缓解了NaCl胁迫对黄瓜幼苗的抑制作用,其中植株地上部鲜重分别比150mmol/L NaCl和80mmol/L NaCl处理提高了63.58%和117.21%;试验证明,NaCl浓度越高对幼苗的伤害越重,外源γ-氨基丁酸通过影响植株对矿质营养的吸收可缓解NaCl胁迫对黄瓜幼苗的伤害。     

番杏光合特性的研究

以番杏为试验材料,对其功能叶片的光合特性进行了研究.通过控光、控温、控二氧化碳进行光响应曲线、温度响应曲线和二氧化碳响应曲线的测定.结果表明:番杏的光饱和点在1800 μmol·m-2左右,光补偿点为67 μmol·m-2·s-1;光合作用的适宜温度范围为30～35℃,最适温度为35℃;二氧化碳的饱和点范围为1800～2000μmol/mol,二氧化碳的补偿点为61μmol/mol.     

香菇漆酶的纯化及部分性质研究

对香菇漆酶进行了丙酮分级沉降、半透膜透析、DEAE一纤维素及Sephadex G100柱层析纯化,并研究了漆酶的产酶曲线及酶作用最适条件.,结果表明:在该培养条件下,香菇第10天达产酶高峰,峰值酶活为216 U/mL,酶作用的最适pH值为3.6,在pH值3.6～4.6有较强的稳定性.最适酶解温度为30℃,Ba2 、Cu2 对香菇漆酶有激活作用,而Ag 、Fe3 则能明显抑制漆酶活性,其它离子影响相对较小.以邻联甲苯胺为底物的表观Km值为1.68 mmol/L.     

百合鳞茎苯丙氨酸解氨酶的分离纯化及酶学性质研究

经40 %～75 %硫酸铵分级沉淀和DEAE-Sepharose离子交换层析,从兰州百合（Lilium davidii var. unicolor）鳞茎中分离纯化苯丙氨酸解氨酶（PAL）,纯化倍数为13.19,酶回收率4.68%。纯化的PAL经 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）检测为单一蛋白带,其亚基分子量约58.7 kD。酶学性质研究表明：百合鳞茎的PAL不耐碱,更不耐酸;随着水浴时间延长和水浴温度提高,PAL活性逐渐降低,但40 ℃水浴30 min后酶活性仍保留47%;以L-苯丙氨酸为底物,40 ℃下的Km值为4.1×10^-3 mol·L^-1;金属离子Mn²⁺、Fe²⁺、Cu²⁺、Fe³⁺促进PAL活性,1.0、1.0、2.0和1.0 mmol·L^-1分别为在供试范围内的最佳处理浓度,Ag⁺、Co²⁺、Ca²⁺抑制其活性,其中Ag+的抑制作用最强。     

花椰菜最适ISSR反应体系的建立及优化

以花椰菜9901A×9908杂交种为材料,用高盐低pH值法提取的基因组DNA为模板,对ISSR-PCR反应体系中的镁离子浓度、dNTP浓度、Taq DNA聚合酶量、引物用量以及最适退火温度等影响因子进行了优化和筛选,建立了适合花椰菜的ISSR反应体系:20 μL PCR反应体系,含10×PCR反应缓冲液2 μL,2.0 mmol/L MgCl2,4×dNTP混合物0.2 mmol/L,引物0.5 μmol/L,Taq酶1.5 U,基因组DNA约30 ng,最适退火温度为52.8℃.     

小干松SRAP-PCR反应体系的建立

以小干松针叶基因组DNA为模板,采用L16(45)正交实验设计,对SRAP-PCR反应体系中的Taq酶、Mg2+、dNTPs、模板DNA和引物5个因素在4个水平上进行优化.结果表明:小干松SRAP-PCR 20 μL反应体系最佳组合为:Taq酶0.5U,Mg2+浓度2.5mmol/L,dNTPs浓度0.15 mmol/L,模板DNA含量60 ng,引物0.2μmol/L.使用12对SRAP引物,采用优化后的体系进行SRAP-PCR反应,表明优化的体系很好地满足了小干松基因组DNA进行SRAP的扩增要求.     

白灵侧耳菌渣中漆酶的分离纯化与酶学性质

依次采用离子交换层析(DEAE-Sepharose、CM-Sepharose和SP-Sepharose)和凝胶过滤层析(Superdex 75 HR10/300)从白灵侧耳(Pleurotus tuoliensis)菌渣中分离纯化得到一种漆酶,该酶比活力为176.1 U/mg,纯化倍数为90.7;采用EDMAN降解法和HPLC-LTQ-Orbitrap测序得到该漆酶的N端和3条肽段序列分别为LHGTHAAIGP和PGVLVQGNKGDN、ISMSCDPNFTFS、DSIQIFAGQRYSFVLNAN;对该漆酶的理化性质进行研究,结果表明:该酶相对分子质量为7.0×10~4,最适反应温度为50℃,最适反应pH为4.0,具有较好的酸耐受性,在pH 2～4孵育1 h后能保持90%以上的活性。Cd~(2+)、Pb~(2+)、Hg~(2+)、Zn~(2+)、Fe~(3+)、Cu~(2+)和Fe~(2+)在1.25～10 mmol/L浓度下对该酶活性具有抑制作用。     

外源γ-氨基丁酸对盐胁迫下菘蓝幼苗活性氧和抗氧化系统的影响

以菘蓝为试材,对100 mmol·L-1 NaCl溶液胁迫后的幼苗,叶面喷施浓度为0、3、6、9、12 mmol·L-1的外源γ-氨基丁酸,测定幼苗中活性氧(ROS)含量和抗氧化酶活性,以期为增强菘蓝幼苗的耐盐性提供参考依据.结果 表明:NaCl胁迫下幼苗中超氧阴离子(O2·-)产生速率、过氧化氢(H2O2)含量均大幅升高,较对照增加120.73％、113.09％;叶面喷施9 mmol·L-1的外源γ-氨基丁酸后,超氧阴离子(O2·-)产生速率、过氧化氢(H2O2)含量较NaCl胁迫降低30.69％、41.10％,超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)、抗坏血酸过氧化物酶(APX)活性升高83.47％、42.38％、34.80％和76.91％;NaCl胁迫下,外源γ-氨基丁酸浓度与超氧阴离子(O2·-)产生速率、过氧化氢(H2O2)含量呈负相关,与超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)、抗坏血酸过氧化物酶(APX)活性呈正相关.综合分析,外源γ-氨基丁酸缓解NaCl胁迫效果为9mmol·L-1＞6 mmol· L-1＞12 mmol· L-1＞3 mmol· L-1.     

香蕉皮多酚氧化酶特性研究

研究了香蕉皮中多酚氧化酶(PPO)的特性。结果表明,香蕉皮PPO的最适温度为35℃,最适p H值为6.5,75℃以上水浴5min、100℃水浴20s可以完全钝化香蕉皮PPO的活性,香蕉皮PPO存在同工酶。香蕉皮PPO的最适反应底物浓度为0.125mol/L。动力学研究结果表明,香蕉皮PPO的Km=0.087922mol/L,Vmax=0.00924OD404/min。考查了柠檬酸、亚硫酸氢钠、抗坏血酸、EDTA-2Na对PPO的褐变抑制效果和PPO酶液4℃保存时间与其活性的关系。     

铜胁迫对费菜生理特性的影响

采用水培的方法,研究不同浓度的Cu2+(801、602、403、204、00μmol/L)在不同时期对费菜生理生化特性的影响。结果表明:SOD的活性随胁迫时间的延长虽有一定程度的波折,但整体呈下降趋势;低浓度Cu2+(Cu2+240μmol/L)处理下,CAT的活性随处理时间延长呈升高趋势,高浓度Cu2+(Cu2+≥240μmol/L)处理下,CAT酶的活性持续下降;Cu2+浓度为160μmol/L时,SOD和CAT的活性最低,3个时期SOD、CAT酶的活性之间均达到极显著差异;电导率大小随Cu2+浓度的增加而大体升高;随Cu2+浓度增加MDA含量有一定程度的波折,但MDA含量均高于对照;可溶性糖和脯氨酸的含量随Cu2+浓度增加总体呈增加趋势。     

国兰ISSR-PCR反应体系的建立与优化

采用正交设计与单因素结合法,对国兰ISSR-PCR反应体系中的4个因素(dNTPs、引物浓度、Mg2+、Taq DNA聚合酶)进行优化试验,结果用DPS软件进行分析.结果表明:各因素对PCR结果均有显著影响,其中Taq DNA聚合酶对反应的影响最大;筛选出了各反应因素的最佳水平,建立国兰ISSR-PCR的最佳反应体系(25μL)为:dNTPs 0.2mmol/L、引物1.0 μmol/L、Mg2+2.5 mmol/L、Taq DNA聚合酶1U.     

微型薯多酚氧化酶的特性研究

对分离纯化后的微型薯的多酚氧化酶性质进行研究,以邻苯二酚为作用底物,用分光光度计在波长420 nm处测定不同pH值、反应温度、底物条件下微型薯的多酚氧化酶(PP0)活性,以讨论微型薯的褐变机理.结果表明,微型薯的PPO最适pH值约为5.5,最适反应温度为35℃左右.该酶热稳定性差;最适作用底物为绿原酸、原儿茶酸和咖啡酸;FeSO4和抗坏血酸等化合物可以抑制PPO活性,CaCl2和CuS04等则起促进作用.适度高温、强酸性或碱性条件、FeSO4或抗坏血酸等处理都可以抑制该酶活性.