桦褐孔菌纤维素酶基因的克隆与原核表达

成功获得了桦褐孔菌(Inonotus obliquus)JL 01菌株的内切葡聚糖酶(IO-EG)和β-葡萄糖苷酶(IO-BGL)的cDNA全长序列.eg2基因cDNA序列全长(ORF)为1149 bp,编码382个氨基酸,bgl2基因cDNA序列全长(ORF)为2583 bp,编码860个氨基酸;成功构建了30a-eg2和30a-bgl2大肠杆菌表达菌株,诱导培养后,SDS-PAGE电泳分析表明两个菌株均表达蛋白,且蛋白以包涵体形式存在,为桦褐孔菌高效外源基因表达系统的建立提供了基础.     

中国芦荟AlDREB2基因的克隆及其胁迫表达

 为了研究中国芦荟的抗逆机理, 以cDNA为模板, 利用3′RACE和PCR扩增方法, 克隆得到了一个编码DREB蛋白的基因, 命名为AlDREB2, GenBank登录号为FJ560460。其cDNA序列全长为886bp, 包含一个636 bp的开放阅读框, 推导编码的氨基酸序列(212个氨基酸) 与库拉索芦荟AlDREB1的序列相似性很高。进化树分析结果将AlDREB2 归入DREB 亚家族中A26亚组。利用RT-PCR 技术分析了AlDREB2 基因的表达与胁迫的关系, 表明AlDREB2 基因在非生物胁迫与生物胁迫中能够被不同程度诱导表达。     

中国芦荟AIDREB2基因的克隆及其胁迫表达

为了研究中国芦荟的抗逆机理,以cDNA为模板,利用3'RACE和PCR扩增方法,克隆得到了一个编码DREB蛋白的基因,命名为AlDREB2,GenBank登录号为FJ560460.其cDNA序列全长为886bp,包含一个636 bp的开放阅读框,推导编码的氨基酸序列(212个氨基酸)与库拉索芦荟AlDREBI的序列相似性很高.进化树分析结果将AlDREB2归入DREB亚家族中A-6亚组.利用RT-PCR技术分析了AlDREB2基因的表达与胁迫的关系,表明AlDREB2基因在非生物胁迫与生物胁迫中能够被不同程度诱导表达.     

光皮桦BBX类基因BlCOL13的克隆与表达分析

利用RACE、RT-PCR以及基因组步移技术克隆得到光皮桦BlCOL13全长cDNA（GenBank登录号：KP663425）、全长DNA及其启动子序列。该基因DNA全长2 808 bp,具有4个外显子,3个内含子;cDNA全长1 370 bp,包含1 140 bp的开放阅读框,编码含379个氨基酸的蛋白。BlCOL13蛋白N、C端分别有两个B-box和一个CCT结构域,属于典型的BBX蛋白。以拟南芥中BBX蛋白的分类为参照,通过聚类分析表明BlCOL13属于Ⅱ型BBX蛋白;克隆得到的BlCOL13启动子序列长685 bp,含有多个与成花、光响应、激素信号转导以及逆境胁迫相关的顺式作用元件。亚细胞定位试验结果表明该基因主要在细胞核中表达。不同组织中该基因都有一定程度的表达,但在雄花中表达量最高。低温、干旱、ABA和盐胁迫等非生物逆境都在一定程度上诱导BlCOL13的表达,盐胁迫的影响最为明显,表明该基因在光皮桦逆境响应中可能发挥比较重要的作用。     

蝴蝶兰抗坏血酸过氧化物酶基因克隆及其表达研究

从蝴蝶兰（Phalaenopsis）中克隆获得了抗坏血酸过氧化物酶基因（APX）同源序列,命名为PhAPX（GenBank登录号为：FJ161977）。PhAPX cDNA全长为1 320 bp,完整的编码框为747 bp,编码249个氨基酸。生物信息学分析结果表明,PhAPX属于过氧化物酶家族ClassⅠ的成员,PhAPX蛋白可能是胞质型APX,与其他植物的APX相似性较高。real-time PCR分析表明PhAPX是一个广谱表达的基因,在蝴蝶兰根、茎、叶、花等各个部位都有表达。机械伤害和盐处理都可以诱导PhAPX表达上调,表明PhAPX在胁迫防御中起作用。     

红穗和白穗醋栗F3H的克隆及其在果实成熟过程中的表达分析

以红穗醋栗（Ribes rubrum L.）和白穗醋栗（R. albrum L.）果实为试材,采用RACE方法克隆黄烷酮3–羟化酶（F3H）基因cDNA全长序列,分别命名为RrF3H和RaF3H（KU984435和KU984436）。RrF3H全长1 351 bp,开放阅读框长1 098 bp,编码365个氨基酸;RaF3H全长1 291 bp,开放阅读框长1 098 bp,编码365个氨基酸。氨基酸多序列比对表明该基因编码的蛋白具有非血红素双加氧酶结构域（DIOX-N superfamily）和典型的F3H蛋白功能结构域（2OG-FeⅡ_Oxy加氧酶结构域）,属于双加氧酶超家族。系统发育分析表明,RrF3H和RaF3H在进化上具有明显种属特性,属于相对独立的进化分支。定量PCR分析表明,F3H在红穗醋栗中表达量远远高于白穗醋栗,在红穗醋栗中随着果实着色加深表达量逐渐上升,果实着色约75%时表达量最高,之后下降;白穗醋栗中随着果实生长,该基因的表达下降,花色苷含量也呈下降趋势,说明F3H基因在醋栗果实着色过程中发挥作用。     

芋淀粉分支酶SBE基因的克隆与表达分析

以多子芋品种‘香堂芋’幼嫩叶片为试材,利用RACE结合RT-PCR技术克隆得到全长为3 051 bp的淀粉分支酶SBE基因cDNA序列（登录号：KX013544）,其中开放阅读框长2 538 bp,编码845个氨基酸;该序列与玉米SBEII、马铃薯SBEIIa同源性均达85%以上;芋SBE编码蛋白具有N–末端、C–末端和α–淀粉酶催化域。利用RT-PCR技术克隆得到芋SBE的基因组DNA序列,全长为12 362 bp,包括20个外显子和19个内含子。芋球茎形成过程中,子芋植株叶片中SBE表达量显著高于母芋植株叶片、叶柄和根系及母芋等组织,子芋膨大过程中SBE表达量逐渐升高,而孙芋膨大过程中SBE表达量逐渐下降。子芋、孙芋SBE表达对支链淀粉合成积累可能起重要作用。     

蜡梅胚胎晚期丰富蛋白基因CpLEA的克隆及表达分析

从蜡梅 （Chimonanthus praecox）花cDNA文库中获得了1个胚胎晚期丰富蛋白（LEA）基因的cDNA全长序列,命名为CpLEA（GenBank登录号：JF412788）,该基因cDNA含有一个273 bp编码91个氨基酸的开放阅读框,从蜡梅基因组DNA中扩增该基因发现,该基因含有两个大小分别为35 bp和707 bp的内含子。生物信息学分析显示,CpLEA的编码蛋白含有4个胚胎晚期丰富蛋白第3族LEA蛋白特有的11个氨基酸的基元重复序列,进化树分析表明该编码蛋白与榛子的LEA蛋白亲缘关系最近。通过原核表达获得了与预期大小一致的融合蛋白。实时荧光定量PCR分析表明,该基因在蜡梅成熟种子中表达量最高,在根中几乎不表达;在盛开期花的各个部位中又以雌蕊中的表达量最高;在花发育早期表达量较高,随后下降并保持相对稳定,在衰败期突增并达到最高;检测该基因在脱落酸（ABA 50 μmol · L^-1）、低温（4 ℃）、高温（42 ℃）、干旱（30% PEG6000）和高盐（NaCl 1 mol · L^-1）5种外源非生物胁迫因子作用下的表达特性。结果表明,该基因能够被ABA、低温、高温、PEG 和NaCl诱导表达,并在随后的时间内呈现出不同的表达模式。表明CpLEA可能在蜡梅花发育和多种非生物胁迫响应中发挥作用。     

切花月季ACC合成酶基因的克隆和原核表达

克隆了与伤害诱导相关的Rh-ACS1和与花朵开放进程及乙烯诱导相关的Rh-ACS3基因全长。结果表明,Rh-ACS1基因全长为2 132 bp,开放阅读框（ORF）长度为1 476 bp,推定编码491个氨基酸。Rh-ACS3基因的全长1 734 bp,ORF长度为1 545 bp,推定编码514个氨基酸。对这两个基因编码的蛋白进行原核表达分析,结果显示,在37 ℃条件下,0.6 mmol · L-1 IPTG诱导3 h后,携带Rh-ACS1 ORF和Rh-ACS3 ORF的原核表达载体分别在大肠杆菌中诱导生成了大量分子量约为70和60 kD的蛋白质,其大小与根据基因序列预测的理论值相一致。     

岷江百合蛋白激酶基因lilyABC1的克隆及在非生物胁迫下的表达特性分析

以野生型岷江百合（Lilium regale Wilson）为材料,克隆岷江百合蛋白激酶基因lilyABC1,分析其在非生物胁迫下的表达特性,为百合抗逆育种提供候选基因。结果表明：lilyABC1基因全长cDNA序列为2 333 bp,其开放阅读框（ORF）为2 007 bp。该基因编码668个氨基酸,预测lilyABC1蛋白分子量为74.84 kD,等电点为5.46,含有一个高度保守的结构域--STYKc。lilyABC1基因在岷江百合的叶片、鳞片、花蕾组织中均有表达,表达量依次为叶 > 花蕾 > 鳞片,其中不同时期的花蕾中的表达量基本一致。lilyABC1的表达受到NaCl、低温、高温以及黑暗胁迫的诱导,对PEG-6000的模拟干旱处理不敏感,表明lilyABC1基因可能对岷江百合适应高盐、低温和黑暗等非生物胁迫具有一定作用。     

蘑菇分离菌株(S1、S2)的ISSR分析

利用简单重复序列间扩增多态性（ISSR）对12株蘑菇属菌株（其中菌株S1、S2为河北康保分离的菌株，具自主知识产权）和3株属外参照菌株进行了遗传多样性分析，构建了遗传相关聚类图。本研究结果表明，河北康保分离的两株菌株S1和S2与现存生产上应用的同类菌种存在明显差异，同时也表明ISSR分子标记在蘑菇品种的鉴别和菌株亲缘关系分析上具有较好的适用性。     

香菇菌丝体中两种新多糖（Le—2—1,Le—2—2）的分离,纯化和鉴定

用发酵培养72h的香菇菌丝体,经热水提取,乙醇沉淀,再经二次DEAE-纤维素柱分离(Cl-型和B_4O_7)和Sephadex G-100纯化,得到两个香菇多糖——Le-2-1,Le-2-2。经HPLC(μ-Bondgel Linear柱)和醋酸纤维薄膜电泳鉴定,两者都为均一组分,HPLC测得Le-2-1的纯度为99.99%,Le-2-2为100%。气相色谱测单糖组成、摩尔比,HPLC测分子量得Le-2-1为:Gle:Ga1:Man:Xy1:Ara:Rha=86.05:2.48:2.06:21.96:1.98:1.58,分子量:5.7×10~3:Le-2.2为:GlC:Gal:Man:Xyl:Ara:Rha=70.60:10.25:8.51:1.80:2.35:3.16,分子量;5.8×10~4。     

Metabolism and translocation of 1, 2-14C(2-chloroethyl) phosphonic acid in Prunus persica (L.) Batsch

1,2-¹⁴C (2-chloroethyl)phosphonic acid (¹⁴C-CEPA) translocation and metabolism was studied in short-term experiments on ‘Andross’ peach trees at the end of Stage I of fruit development. The chemical was applied to the fruit surface or to the abaxial surface of the basal leaf of a developing shoot. When the tracer was applied to the fruit, no translocation of the chemical occurred. When the ¹⁴C-CEPA was applied to the leaf, translocation was observed. Thin-layer chromatography (TLC) of the radioactivity recovered in acidic methanol extracts of both fruits and one-year shoots, collected 24, 48 and 96 h after ¹⁴C-CEPA application to the leaf, indicated that the translocation occurred in forms different from the original chemical. Treatment of chromatograms with AgNO₃ and FeCl₃ at 100°C showed that the colour reaction of sugars was associated with the radioactive areas. Therefore it seems likely that the translocation of ¹⁴C-CEPA occurred in sugar-conjugated form. Results of the TLC of ¹⁴C-CEPA before spotting or overspotted with sugars or fruit and leaf extracts, showed that the binding of ¹⁴C-CEPA to sugars is not a metabolic reaction, although the complex, being more stable than the original chemical and biologically active, could have physiological significance in determining long-term responses of tissues to treatments with CEPA.     

油梨PaWRI1和PaWRI2基因的克隆、序列分析及表达研究

以‘哈斯’油梨(PerseaamericanaMill.)为试材,通过RACE及RT-PCR技术分别克隆得到2个AP2/EREBP类转录因子WRI1和WRI2基因的c DNA全长,分别命名为PaWRI1(GenBank登录号:MH367865)和PaWRI2(GenBank登录号:MH367866)。其中,PaWRI1基因全长为1 396 bp,含1 155 bp开放阅读框,编码384个氨基酸;PaWRI2基因全长为1 782 bp,含1 287 bp开放阅读框,编码428个氨基酸。PaWRI1和PaWRI2基因属于AP2/EREBP类转录因子家族,其编码氨基酸序列中分别均存在2个和1个典型的AP2/ERF DNA结合位点。实时荧光定量PCR检测结果表明:在油梨果实发育过程中,果肉中PaWRI1基因的相对表达量始终快速上升,PaWRI2基因的相对表达量先少量下降,而后缓慢上升;PaWRI1基因相对表达量变化与油脂积累的变化较一致,PaWRI2基因相对表达量变化与油脂积累的变化不一致。因此,推测在油梨果实发育过程中,果肉中PaWRI1基因可能参与调控油脂积累过程。     

热激因子结合蛋白(HSBP)研究进展

综述了HSF-结合蛋白(HSBP)的结构特点,在热激反应中的作用,以及HSBP对热激转录反应的负调控.     

龙眼水通道蛋白基因(DLPIP1)的克隆与表达分析

应用蛋白质组学研究低温胁迫下龙眼叶片蛋白质组变化时,发现PIP1蛋白在龙眼低温胁迫中上调表达。应用RACE技术克隆龙眼水通道蛋白基因全长cDNA,命名为DLPIP1,基因登陆号为JN572691,长度为1 132 bp,包括1个900 bp的开放阅读框,编码299个氨基酸序列,同源性分析表明,DLPIP1在21个不同植物中的一致性为90%~93%。应用生物信息学软件对DLPIP1氨基酸序列分析表明,含有7个跨膜区,有2个NPA单元,其氨基酸残基与MIP家族蛋白保守区序列完全一致。氨基酸序列比对发现,该序列与其他物种PIP质膜水通道蛋白氨基酸序列有很高的同源性。利用实时荧光定量技术对DLPIP1在低温胁迫下不同组织表达谱分析表明,DLPIP1在龙眼根、茎、叶中都有表达,在根中的表达量最高,其次是茎和叶。DLPIP1在低温胁迫时,随着低温胁迫时间的延长而发生变化。这说明DLPIP1蛋白在龙眼低温逆境过程中起作用。     

Effects of perindopril at different doses on cardiac function and ACE2/Ang-(1-9)/Ang-(1-7) axis of ischemic cardiac dysfunction rabbits

AIM: To investigate the different dose of perindopril on cardiac function in the rabbits with ischemic cardiac dysfunction. METHODS: Male rabbits weighing 2.5~3.0 kg(n=30) were randomly divided into 3 groups(n=10):high dose perindopril group(HD group), low dose perindopril group(LD group) and cardiac dysfunction group(CD group). The Left anterior descending coronary artery of the rabbits was ligatured for model preparation. In HD group, the rabbits were treated with perindopril split normal saline solution(1 g/L)2 mL·kg^-1·d^-1. In LD group, the rabbits were treated with perindopril split normal saline solution(0.33 g/L)2 mL·kg^-1·d^-1. In CD group, the rabbits were treated with normal saline solution 2 mL·kg^-1·d^-1. Four weeks after treatment, the cardiac function was measured via echocardiography, the mRNA expression of angiotensin-converting enzyme 2(ACE2) and angiotensin type 2 receptor(AT2R) was analyzed by real-time PCR, serum angiotensin(Ang)-(1-9) and Ang-(1-7) levels were detected by ELISA. RESULTS: Compared with CD group, the cardiac function of the 2 groups treated with perindopril was significantly improved(P<0.01), and more improvement in HD group was observed than LD group(P<0.05). The serum angiotensin(Ang)-(1-9) and Ang-(1-7) level and the mRNA expression of ACE2 and AT2R in the 2 groups treated with perindopril were significantly improved(P<0.01). Compared with LD group, the mRNA expression of ACE2 and AT2R and the serum levels of Ang-(1-9) in HD group were significant improved(P<0.05), while no difference of serum Ang-(1-7) level was observed. Correlation analysis revealed that the improvement of the cardiac function was associated with serum Ang-(1-9) level, mRNA expression of ACE2 and AT2R(P<0.01), but has no significant correlation with serum Ang-(1-7) level. CONCLUSION: High dose of perindopril may improve more cardiac function in ischemic cardiac dysfunction model in rabbits. The mechanism may relate to increasing serum Ang-(1-7) level to activate AT2R.     

西瓜交替氧化酶AOX2基因的克隆与分析

为了研究西瓜交替氧化酶基因家族在西瓜植株中可能发挥的功能,以西瓜（Citrullus lanatus）耐冷种质IVSM9为材料,根据植物不同物种交替氧化酶基因核苷酸保守区序列设计兼并引物,得到西瓜交替氧化酶（alterna-tive oxidase）AOX基因的中间片段。在已知序列的基础上,分别设计5’和3’末端扩增的...