食用菌遗传转化研究进展

食用菌遗传转化的方法主要有PEG法、电激法、基因枪法、限制酶介导法，农杆菌介导法；采用的启动子有ras启动子和gpd启动子，采用的筛选标记有营养缺陷型标记，抗生素抗性筛选标记，除草剂和杀菌剂抗性筛选标记，代谢产物抗性筛选标记，本文综述了这些遗传转化方法以及启动子，筛选标记的最新研究进展。     

西瓜遗传转化的研究进展

综述了目前西瓜农杆菌介导法转化受体的培养和西瓜遗传转化方法的研究进展，展望了西瓜遗传转化的前景。     

西瓜遗传转化的研究进展

综述了目前西瓜农杆菌介导法转化受体的培养和西瓜遗传转化方法的研究进展，展望了西瓜遗传转化的前景。     

基因枪法和农杆菌介导的Bt抗虫基因转化芥蓝

以芥蓝品种小香菇为试材,分别采用基因枪法和农杆菌介导转化法将Bt抗虫基因Cry2Aa2转化到芥蓝中,并对两种转化方法进行了优化和比较。结果表明:基因枪法在轰击距离为6cm、轰击次数为1次时转化效率最高,为0.43%;农杆菌介导转化法以带子叶下胚轴为外植体、预培养2d、侵染10min、共培养2d、抑菌培养5d后转入筛选培养基为最佳参数,转化效率为0.37%。经PCR和PCR-Southern鉴定,基因枪法和农杆菌介导转化法均成功将目的基因导入芥蓝基因组中。经抗虫性表型鉴定,T_0代转基因芥蓝植株对甘蓝夜蛾幼虫的抗性高于非转基因植株。     

长白山北虫草鉴定及灵芝真菌免疫调节蛋白基因的转化

选用采自长白山的野生虫草为材料，分离虫草真菌并进行分子生物学鉴定，通过ITS引物扩增和基因序列比对鉴定出4个新的北虫草真菌。用农杆菌介导法将灵芝真菌免疫调节蛋白基因（Fip）转化北虫草，经PCR、Southern等分子生物学检测，灵芝Fip基因已转入北虫草基因组中。     

柑桔黄龙病LAMP快速检测方法的建立

根据GenBank中柑桔黄龙病菌的外膜蛋白(OMP)基因序列,设计了一套环介导等温扩增引物,建立了柑桔黄龙病的环介导等温扩增检测方法.该方法灵敏度可达25 pg/μL,与实时荧光PCR方法灵敏度相同.全部反应只需一个可控温的水浴锅在60分钟内即可完成,通过肉眼观察浊度状况即可判定结果.该方法具有简便、快速、灵敏、特异等特点,适用于基层工作站的柑桔黄龙病鉴定工作.     

农杆菌介导的Cas9基因转化金针菇的研究

将酿脓链球菌(Streptococcus pyogenes)Cas9序列(SpCas9序列,Addgene#43802)根据金针菇(Flammulina velutipes)的密码子偏好性进行优化,并构建FvCas9双元表达载体,利用农杆菌介导法转化金针菇单核体Dan3,经抗性培养基筛选以及潮霉素和Cas9基因PCR扩增验证,结果显示Cas9基因已经成功转入金针菇菌丝体中,转化率为6.84%。     

农杆菌介导的苜蓿子叶节转化体系的优化

以苜蓿品种“金皇后”为试材、以苜蓿子叶节为受体,通过农杆菌介导的转化方法,研究了抑菌浓度、子叶节生理期、侵染时间、共培养时间等因素对苜蓿子叶节遗传转化的影响,进而探索最佳转化条件,为建立高效的苜蓿子叶节遗传转化体系奠定基础.结果表明:用活化的OD600为0.6左右的农杆菌菌液进行浸染时,最佳受体材料为生长9日龄的子叶节,最佳浸染时间为20 min,共培养时间为3d,头孢霉素的抑菌浓度为500 mg/L.     

果树转基因研究进展

综述了10多年来国内外果树转基因研究的主要进展。应用于果树的目的基因包括10余种抗病基因以及若干抗虫、抗除草剂、抗逆境和控制生长发育的基因;受体系统包括叶片(含叶盘)、叶柄、茎段、节间、胚轴、子叶、胚、悬浮细胞和原生质体等;转化方法以农杆菌介导占主流。已获得近20种常见果树的转基因植株;苹果、番木瓜等的转基因植株已进入大田试验。就目的基因的来源、不同受体系统特点和与转化方法有关的问题等作了讨论。     

农杆菌介导的BnCS基因对黄瓜遗传转化研究

以黄瓜为受体,用农杆菌介导的方法,将同源克隆的抗冷基因BnCS转入黄瓜,建立农杆菌介导的遗传转化体系,获得转化的抗性植株;对抗性植株和后代进行PCR鉴定,证明BnCS基因已经转入黄瓜.对T0种子和T1植株进行耐冷性鉴定.结果表明:后代耐冷性有所增强;试验获得的耐冷材料已应用于育种中.     

果树遗传转化方法概述

综述了果树遗传转化的方法,载体转化系统包括农杆菌质粒载体法和植物病毒载体法;直接转化系统包括化学诱导脱氧核糖核酸直接转化法和物理诱导直接转化法;种质系统介导基因转化系统包括花粉管通道法介导基因转化和生殖细胞浸泡介导遗传转化法。     

植物转基因技术及其应用

本文综述了五种重要的植物遗传转化方法(农杆菌介导法,聚乙二醇法,基因枪法,花粉通道法和电激穿孔法)及其应用,并阐述了植物转基因技术在抗除草剂,抗逆性和品质改良等方面的研究进展。     

绿色荧光蛋白基因转化柑橘胚性愈伤组织与高效再生

采用根癌农杆菌介导法对13份柑橘胚性愈伤组织进行绿色荧光蛋白基因(gfp)的转化,短时间内获得了温州蜜柑、橘橙杂种GWZ等11份柑橘材料的82个转化细胞系,其中佛罗斯特脐橙和日辉橘最易转化,分别获得28个和25个转化细胞系。选取3份材料的不同转化细胞系进行gfp的PCR分析,均获得了预期的gfp片段。研究表明,GFP标记可以在转化早期快速检测并分离转化子,及时剔除逃逸体,获得纯合的转化系;高水平的gfp表达不影响转化细胞增殖、生长和分化。这些带有GFP标记的转化细胞系为柑橘的有关基础研究提供了良好的试材,目前正用于柑橘体细胞杂交和不同倍性愈伤组织的社会化控制现象与机理等研究。     

胡萝卜遗传转化研究进展

综述了胡萝卜遗传转化的研究进展,主要介绍了农杆菌介导法和DNA直接转化方法(包括基因枪法、电击法和PEG介导法)的分子机制和进展,并对遗传转化中受体基因型、外植体类型和菌株类型等影响因素进行阐述,以期为建立一个高效胡萝卜遗传转化体系提供理论依据。     

发根农杆菌介导番茄遗传转化研究

本实验设置基因型、菌液浓度、外植体部位和感染方法四个因素，利用发根农杆菌的Ri质粒介导的TMV外壳蛋白和CMV外壳蛋白基因按L16（4^4*2^3）正交表转化番茄。用共培养的方法，诱导愈伤组织，经卡那霉素的抗性筛选，进一步培养得到转化再生的植株。经PCR检测证明目的已被导入。卡那霉素抗性愈伤组织频率的结果表明：不同品种不同菌液浓度的转化频率存在着显性差异，而外植体部位感染方法之间差异不显。     

农杆菌介导南瓜遗传转化体系的建立

以南瓜金辉一号（Cucurbita moschata‘Jinhui1’）为实验材料,利用根癌农杆菌（Agrobacterium tumefaciens）介导转化南瓜子叶节,研究了预培养时间、侵染时间、乙酰丁香酮（AS）浓度和共培养时间,     

黄瓜遗传转化研究进展

黄瓜是人们喜食的蔬菜作物之一,在我国蔬菜周年供应中占有重要地位,但易受多种真菌病害的危害而使产量降低,品质下降,传统的育种方法周期长、耗资大、效率低、受抗性基因资源匮乏的限制,还易出现抗性退化的现象,用现有品种资源进行有性杂交育种很难尽快得到具有抗性的优良品种.近年来,由于分子生物学和植物基因工程技术的迅速发展,利用DNA重组技术可使性状在种间转移,且受体本身主要性状不被改变,突破了远缘杂交不亲和障碍,开辟了植物育种的新途径.     

黄瓜棒孢叶斑病病原菌RFP标记转化株的构建

由多主棒孢(Corynespora cassiicola)侵染引起的黄瓜棒孢叶斑病已成为我国黄瓜生产上的重要新流行病害,目前尚缺乏抗性品种,病原菌侵染机制及与寄主的互作关系尚不清楚。为了开展多主棒孢的病原学研究,本试验采用农杆菌基因介导技术(ATMT),获得了红色荧光蛋白(RFP)标记的多主棒孢转化株,转化株在PDA培养基转接6次后仍能在菌丝和分生孢子上发出强烈的红色荧光,生物学测定和致病性测定结果表明该转化株与野生型菌株无显著差异。     

瓜类蔬菜组织培养与遗传转化研究进展

概述了瓜类蔬菜组织培养过程中的主要影响因素—基因型、外植体类型,部位与生理状态、培养基、生长调节物质、碳源及其他添加物质对植株再生的影响,以及根癌农杆菌介导的瓜类蔬菜遗传转化的影响因素与研究进展。     

花粉管通道导入外源DNA方法的研究

在总结前人研究的基础上,认为花粉管通道法导入外源DNA的方法可分为花粉粒携带法、子房注射法和柱头切除法。3种导入外源基因的方法已在植物转基因育种研究中被广泛运用。在实际运用中应针对某一特定的受体植物,根据受体植物的雌蕊结构特点选择合适的导入外源基因的方法,可提高花粉管通道法的转化效果和转化率。