无核葡萄胚败育生理生化因子灰色关联分析

以无核葡萄‘无核翠宝’、‘丽红宝’和有核葡萄‘赤霞珠’(对照)为试材,观测其发育过程中果实和胚珠的形态学、生理学变化,利用主成分分析法对6个生理生化指标进行分析,结合灰色关联度分析,筛选出与无核葡萄胚败育相关的主要生理生化因子。结果表明,‘无核翠宝’和‘丽红宝’分别于花后36 d和32 d胚珠畸形率达最高,开始败育。随着果实发育,3个葡萄品种胚珠中丙二醛(MDA)含量呈上升趋势;果肉中可溶性糖和可溶性蛋白含量均呈上升趋势,但在无核葡萄胚珠中先增后降,在败育时期达到最大;POD和CAT活性在两个无核品种中先升后降,在败育时期的胚珠中显著高于有核葡萄,而在果肉中显著低于有核葡萄;胚珠的SOD活性在无核葡萄败育前显著增加,在有核葡萄中则呈上升趋势。综合分析,无核葡萄果肉中可溶性糖、可溶性蛋白含量和胚珠中MDA、可溶性蛋白含量,SOD活性等生理指标为无核葡萄胚败育的主要影响因子,其中胚珠SOD活性与无核葡萄胚败育关联度最高,其次是果肉可溶性蛋白含量和胚珠数。本研究为今后无核葡萄胚挽救育种采样时期的确定提供了理论指导。     

6-BA对抗寒无核葡萄胚挽救的影响

【目的】探讨提高抗寒无核葡萄胚挽救育种效率的方法。【方法】以4个种子败育型无核葡萄品种‘火焰无核’‘海王星’‘木星’和‘红宝石无核’为母本,欧山杂种(品种)‘北醇’为父本进行杂交,将杂交胚珠接种于添加不同质量浓度6-BA的MM3+500 mg·L-1水解酪蛋白(CH)+1 mmol·L-1丝氨酸(Ser)培养基上进行培养。【结果】除‘海王星’ב北醇’外,供试的其他杂交组合均在添加6-BA质量浓度为0.5 mg·L-1时,胚珠发育率、萌发率和成苗率最高,差异达到显著水平;当6-BA的质量浓度为1.0 mg·L-1时,对胚挽救效率具一定程度的促进作用或作用不显著;当6-BA的质量浓度为1.5 mg·L-1时,对‘火焰无核’ב北醇’‘木星’ב北醇’‘海王星’ב北醇’杂交后代胚的成苗起到一定程度的抑制作用。【结论】不同的杂交组合对不同质量浓度6-BA的敏感程度不同,0.5 mg·L-16-BA能够提高无核葡萄胚挽救效率;首次选用的抗寒无核品种‘木星’和‘海王星’均可作为无核葡萄胚挽救育种的母本。     

金星无核葡萄种胚培养最佳接种期的选择

金星无核葡萄的胚珠可正常受精，绝大多数受精胚在花后21d开始败育。当胚发育最为充分而又尚未败育时取胚珠进行培养，存活胚的比例较高。金星无核葡萄最适宜的接种时期为花后36～39d，此时正是浆果开始软化和着色前期。     

'森田尼无核'葡萄胚发育及败育的细胞学特征

以种子败育型葡萄‘森田尼无核’为试材,系统研究其胚发育及败育的细胞学进程,分析胚乳败育与胚败育的关系。结果表明:种子败育型葡萄‘森田尼无核’与有核葡萄‘谢花红’的胚均能发育到球形胚阶段,随后‘森田尼无核’的胚逐渐败育,而‘谢花红’的胚珠继续发育为成熟种子。‘森田尼无核’的胚乳败育早于胚败育,其胚挽救适宜取材时期是花后28 d。     

“新葡7号”葡萄胚挽救最佳接种时期研究

正近年来,随着生物技术的发展,胚挽救技术在葡萄育种上的研究应用,为培育优质无核葡萄品种提供了新思路和崭新的途径,丰富了无核葡萄有性杂交的组合方式,提高了无核葡萄品种的选育效果。无核葡萄胚的发育受基因型的严格控制。胚龄越小越难培养,而胚龄越大则存在胚萎缩退化的可能,所以掌握无核葡萄胚珠败育时期,确定胚珠接种的适宜时间,是胚珠培养能否成功的前提。郭修武等人研究了胚珠接种时间和培养基种类对无核葡萄胚挽救的影     

无核葡萄杨格尔的胚发育及胚珠培养

早熟无核葡萄杨格尔的胚珠可正常受精。绝大多数受精旺在花后27～33天开始败育,仅个别胚可继续发育至大球形胚甚至心形胚。当胚发育最为充分而又尚未败育时取胚珠进行培养,存活胚的比例较高。胚珠培养的培养基内附加低浓度秋水仙碱对无核葡萄胚珠内胚的离体发育有良好的促进作用。胚珠培养萌发成苗的技术尚需要进一步系统的研究。     

无核葡萄与中国野生葡萄杂种胚败育的某些生理生化变化

 通过对无核葡萄、有核葡萄以及无核葡萄与中国野生葡萄杂种的胚珠进行离体培养, 并结合生理生化指标测定发现: 不同的无核葡萄及其杂种胚败育的时间不同, 胚败育时, 保护酶活性下降, 反应膜脂过氧化水平的MDA 含量上升, 可溶性糖与可溶性蛋白质含量降低, 可溶性淀粉含量变化不大。进行胚挽救时, 应根据不同的杂交组合, 在最佳时间, 即胚发育程度最高、MDA 含量较低时取胚进行培养。     

‘杨格尔’与‘京秀’葡萄胚珠发育过程中活性氧代谢的比较研究

以盛花后不同时期的无核葡萄品种杨格尔和有核葡萄品种京秀的胚珠为材料,测定胚珠中超氧阴离子和过氧化氢（H₂O₂）含量及活性氧清除酶活性的变化。结果表明：在两品种胚珠发育过程中均呈一直上升的趋势,在胚珠发育的中后期无核品种扬格尔产生速率明显大于有核品种京秀;胚珠中H2O2含量表现先升后降再升的趋势,但再升时无核品种扬格尔显著大于有核品种京秀;胚珠内活性氧清除酶超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、 抗坏血酸过氧化物酶（ASA-POD） 及无核品种扬格尔的过氧化物酶（POD）表现先升后降的趋势,无核品种扬格尔的酶活性在胚珠败育后明显下降,有核品种京秀仍在较高的水平,且有核品种的POD活性先快速上升后一直保持缓慢上升的趋势。胚珠内活性氧类物质及活性氧清除酶类的变化趋势与无核葡萄杨格尔幼胚败育有一定相关。     

假单性结实型无核葡萄胚挽救影响因子研究

【目的】探究无核葡萄胚发育和胚萌发的影响因子,有利于优化无核葡萄胚挽救技术体系及提高其育种效率。【方法】以早黑宝盛花后100 d种胚为试材,采用剥种取胚进行胚离体培养,研究外源激素和营养添加物质对胚萌发成苗的影响,基于熵权TOPSIS(优劣解距离法)分析法筛选出最佳胚萌发培养基;以无核翠宝(盛花后28～38 d)、丽红宝(盛花后28～32 d)和晶红宝(盛花后28～32 d)未成熟幼果为试材,研究不同取样时间和不同培养时间对胚珠发育率的影响,基于熵权TOPSIS分析法综合评价不同形态胚的萌发成苗效果。【结果】在胚萌发培养基中添加0.1 mg·L-1IAA+0.2 mg·L-16-BA+0.5 g·L-1葡萄汁时,胚的萌发率和成苗率显著高于其他。取样时间接近(或达到)胚败育始期时,胚发育率最高。无核翠宝和丽红宝胚珠离体培养10周后的胚萌发率最高(≥50.00%)。不同形态胚的萌发成苗效果不同,子叶形胚的萌发成苗效果最好,其他排序为:鱼雷形胚﹥球形胚﹥心形胚﹥畸形胚。【结论】胚萌发培养基中添加外源物质有利于胚萌发成苗;离体培养败育时期的胚珠能获得更高的胚发育率和多胚率;子叶形胚和鱼雷形胚更易萌发成苗。     

''''杨格尔''''与''''京秀''''葡萄胚珠发育过程中的活性氧代谢比较

以盛花后不同时期的无核葡萄品种杨格尔和有核葡萄品种京秀的胚珠为材料,测定胚珠中超氧阴离子(O2.-)生成速率和过氧化氢(H2O2)含量及活性氧清除酶活性的变化。结果表明:O2.-在两品种胚珠发育过程中均呈一直上升的趋势,在胚珠发育的中后期无核品种杨格尔产生速率明显大于有核品种京秀;胚珠中H2O2含量表现先升后降再升的趋势,但再升时无核品种杨格尔显著大于有核品种京秀;胚珠内活性氧清除酶超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、抗坏血酸过氧化物酶(AsA-POD)及无核品种杨格尔的过氧化物酶(POD)活性表现先升后降的趋势,无核品种杨格尔的酶活性在胚珠败育后明显下降,有核品种京秀仍在较高的水平,且有核品种的POD活性先快速上升后一直保持缓慢上升的趋势。胚珠内活性氧类物质及活性氧清除酶类的变化趋势与无核葡萄杨格尔幼胚败育有一定相关。     

极早熟油桃幼胚离体培养成苗相关因素探讨

以极早熟油桃‘超红短枝’的幼胚为试材, 在离体培养条件下, 研究了不同胚龄、低温处理时间、蔗糖浓度、6-BA、GA₃浓度配比及种皮等因素对幼胚发育和成苗的影响。结果表明: 果实发育56 d时, 平均PF值仅为0.086。在各处理中, 以低温处理80 d、糖浓度6%对幼胚的发育和成苗效果最佳。6-BA、GA₃配比对经80 d低温处理的幼胚影响较小, 9 mg/L的6-BA对30 d低温处理的幼胚发育有一定的促进作用。在低温条件下, 带种皮培养对幼胚PF值增大和提高成苗率的效果明显好于不带种皮培养的。     

阿月浑子与黄连木的杂种果实发育及幼胚培养研究

 以阿月浑子与黄连木的杂种果实和杂种幼胚为试材,对果实生长发育规律及幼胚培养进行了研究,探讨了胚龄、培养基类型和6-BA浓度等对杂种胚培苗再生的影响。结果表明：（1）杂种果实的纵、横径生长呈“S”型曲线变化,果实鲜质量生长呈双“S”型曲线变化。（2）杂种胚的发育始于授粉后80 d,80 ~ 100 d是杂种胚败育的关键时期。（3）授粉后80 d的杂种幼胚难以成苗,授粉后100和120 d的杂种幼胚成苗率分别为37.04%和83.33%。（4）适宜杂种胚培苗增殖的培养基为：DKW + 2.0 mg · L^-1 6-BA + 0.05 g · L^-1 IBA + 0.3 g · L^-1 LH + 1.5 g · L^-1 PVP,增殖系数为3.47,苗高为3.32 cm。（5）适宜杂种胚培苗生根的培养基为：1/2WPM + 2.0 mg · L^-1 IBA + 0.05 mg · L^-1 NAA,生根率为80%。     

褪黑素对‘无核白’葡萄体细胞胚的诱导作用

以欧洲葡萄‘无核白’（Vitis vinifera‘Thompson Seedless’）未开放的小花蕾为外植体，研究0、1.0、2.0、3.0 mg ? L-1褪黑素（Melatonin）对其体细胞胚的诱导效果。结果表明：‘无核白’小花蕾在 MS + 1.0 ~ 3.0 mg ? L-1 褪黑素 + 2.0 mg ? L-1 6-BA + 30 g ? L-1蔗糖 + 3 g ? L-1植物凝胶的培养基上继代培养30 d时愈伤组织诱导率较好，为73.67% ~ 89.10%，显著高于2,4-D处理，愈伤组织形成所用时间较2,4-D处理缩短了14 d。愈伤组织诱导120 d时，不同浓度褪黑素均出现体细胞胚，其中，以MS + 1.0 mg ? L-1褪黑素 + 2.0 mg ? L-1 6-BA + 30 g ? L-1蔗糖的培养基体细胞胚的发生率最高，180 d时达12.05%。体胚在 MS + 60 g ? L-1 蔗糖 + 0.5 g ? L-1活性炭的X6培养基中萌发30 d后，将萌发的子叶胚转移至MS + 0.2 mg ? L-1 6-BA + 0.1 mg ? L-1 NOA + 30 g ? L-1 蔗糖 + 0.5 g ? L-1活性炭的成苗培养基上，其中，1.0 mg ? L-1褪黑素诱导产生的体胚发育正常的数量较多，为14.84%。不同浓度褪黑素处理的体胚诱导率均于180 d后增长较快，且低浓度的褪黑素有利于体胚萌发与正常发育，2,4-D诱导的愈伤组织无体胚形成。     

甜瓜花药愈伤组织分化与激素处理间的关系

将甜瓜花药接种在MS+NAA0.5mg/L+6-BA0.5mg/L+KT1.5mg/L的脱分化培养基上,15d左右生成结构紧凑的淡绿色愈伤组织,然后再分别转接在不同激素组合的分化培养基上。结果表明,接种在2,4-D0.4mg/L+KT1.0mg/L培养基上的愈伤组织可以诱导出胚性细胞团;若将这种愈伤组织及时转到无激素培养基上则可使细胞团继续分化直至形成心形胚和子叶形胚;另外,接种在NAA0.5mg/L+IAA0.1mg/L+6-BA0.5mg/L+KT1.0mg/L培养基上的愈伤组织可以诱导出完整植株。     

朱顶红体细胞胚胎发生及植株再生研究

 通过诱导朱顶红（Hippeastrum hybridum）小鳞茎形成胚性愈伤组织,建立间接的体细胞胚胎发生途径和植株再生的无性繁殖体系。试验结果表明,0.5  mg · L^-1的2,4-D附加0.5 mg ·  L^-1 6-BA对试管小鳞茎外植体初代胚性愈伤组织的诱导和继代增殖有明显的促进作用,初培养松脆愈伤组织诱导率可达83.3%。2.5 ~ 5.0 mg · L^-1 的6-BA对体细胞胚胎的发育有显著的促进作用,培养50 d大于20个体细胞胚发生的愈伤组织约为50%;相同浓度6-BA附加不同浓度NAA的试验组间体细胞胚发育无明显差异。     

桃远缘杂种的获得及杂种胚抢救技术

以桃为母本, 与经过处理的李、杏花粉进行远缘杂交, 成功地对杂种幼胚进行了胚抢救, 并对部分杂种进行了分子鉴定。研究表明, 在以‘雨花露’为母本的杂交组合中, 杂种胚的败育发生于授粉后第7周, 而以‘中华寿桃’为母本的杂交组合中, 杂种胚的败育开始于授粉后第8周; 以早熟桃品种‘雨花露’为母本的杂种胚PF (胚长/种子长) 值为0.5时幼胚萌发率仅为6.7% , 而以晚熟品种‘中华寿桃’为母本的杂种胚PF值为0.5时幼胚萌发率却大于50%; 适宜场强的静电场处理父本花粉后可显著提高杂种胚培苗多丛芽诱导增殖效率, 而父本花粉经过⁶⁰Coγ射线照射后得到的胚培苗, 多丛芽诱导效果较差, 组培苗长势较弱; 在胚抢救技术体系中, 杂种胚最佳萌发及生长培养基为1 /2MS + 6-BA 4 mg·L^-1 +IBA 0.5 mg·L^-1 , 胚萌发及分化率达90%; 最佳多丛芽诱导及增殖培养基为MS + 6-BA 1.0mg·L^-1 + IBA1.0 mg·L^-1 , 最佳生根培养基为MS + IAA 0.5 mg·L^-1 +NAA 0.2 mg·L^-1 ; SSR技术对杂种鉴定结果表明, 所获杂种为真杂种。     

枣的胚败育及幼胚培养研究

 对30 个枣优良品种坐果后30 d 的胚败育情况进行了调查, 结果表明, 败育率高于75 %的高度败育品种占53.4 % , 败育率介于25 %至75 %的中度败育品种占3.3 % , 败育率低于25 %的轻度败育品种占43.3 %。以优良品种‘冬枣’、‘金丝丰’等为试材, 对坐果后10～70 d 幼胚进行培养的结果表明, 枣离体胚接种后主要有3 种生长方式, 即形成愈伤组织、子叶间小叶增生和胚直接萌发成苗。本文还提出了提高枣胚培养及胚培养苗移栽成功的技术要点。     

正交试验优化银杏胚愈伤组织继代培养及黄酮积累

采用正交试验研究了基本培养基、NAA、6-BA、植酸(PA)4因素各3水平对银杏胚愈伤组织继代培养及黄酮积累的影响,并测定了愈伤组织生长曲线.结果表明:银杏胚愈伤组织继代培养的最佳组合是N6+NAA 3.0 mg/L+6-BA 2.0 mg/L+0.1%PA,各因子影响程度为基本培养基＞NAA＞6-BA＞PA;愈伤组织黄酮积累量最佳组合是B5+NAA 0.1 mg/L+6-BA 0.5mg/L+0.05%PA,各因子影响程度为NAA＞PA＞6-BA＞基本培养基.愈伤组织生长曲线基本呈"S"型,黄酮积累的适宜培养周期为40～50 d.     

B9和6-BA对黄姜花切花保鲜效果的研究

以黄姜花切花为试材,研究了不同浓度的B9与6-BA保鲜液对黄姜花切花在瓶插期间的鲜重变化率、瓶插寿命的影响。结果表明:添加B9或6-BA的保鲜液能使花枝的鲜重变化率下降变缓,延长切花的瓶插寿命,提高黄姜花切花瓶插的观赏品质。其中以处理10 mg/L 6-BA的保鲜液的保鲜效果最佳,其次为处理300 mg/L B9的保鲜液,均比对照瓶插寿命延长4 d。     

6-BA在葡萄植株体内的运转和分配

以葡萄为试材,研究了葡萄根、茎、叶、果等器官对6-苄基腺嘌呤(6-BA)的吸收及它在植株内的运转和分配。结果表明,对1年生葡萄幼苗茎部引入或叶片涂抹6-BA,1h后,在植株所有部位都有分布,其中以茎尖和根部浓度较高,表现为快速、非极性的运输特性。茎部引入5d之内,植株根内6-BA呈持续升高趋势,茎尖内6-BA虽然有波动,但是最后仍达到最大;而叶片涂抹则在涂抹后5h时,全株各部位6-BA浓度达到最大,5d后,除引入叶片外,其它部位几乎测不到6-BA。盛花后30d,果穗浸蘸和穗轴引入6-BA,2h后,果皮、果肉、种子中6-BA浓度达到高峰,以后逐渐下降,果穗浸蘸30d后,果实各部位均已测不到6-BA,穗轴引入30d后,果皮和果肉内仍能测到6-BA,但种子内已测不到。