不同GO基因植物表达载体对番茄遗传转化效率的研究

通过PPT质量浓度的梯度试验,筛选出番茄子叶出愈、芽分化和再生植株生根的最适宜PPT浓度均为1.0 mg/L.pCPGO和pCBGO两个植物表达载体转化8个番茄自交系材料的试验结果表明,不同番茄自交系对这两种表达栽体的遗传转化效率存在较大的差异;相同的载体转化不同的番茄自交系,其遗传转化率也存在较大的差异;同一番茄品系,由于转化载体不同,遗传转化率也不同.pCPGO和pCBGO转化率最高的分别为Pr5 76.47%和Pr1 72.4%;而低的分别仅为Pr3 13.89%和Pr4 2.7%.     

降低茄子茎段组培染菌率的初步研究

茄子茎段组培容易染菌,为了测试15种灭菌方法的灭菌效果,选取紫圆茄、紫长茄、绿茄3种类型茄子品种,根据染菌率和植株再生成活率判断最佳灭菌方法。结果表明,不同类型茄子适用的灭菌方法不同。紫圆茄茎段适宜的灭菌方法为:2%Na Cl O浸泡10min,再用0.1%Hg Cl2浸泡10min;紫长茄茎段适宜的灭菌方法为:4%Na Cl O浸泡10min,再用0.3%Hg Cl2浸泡10min;绿茄茎段适宜的灭菌方法为:6%Na Cl O浸泡10min,再用0.1%Hg Cl2浸泡10min。绿茄茎段保存试验结果表明,低温保存有利于降低茄子茎段组培染菌率,其中最适保存条件为5℃下保存3d以内,染菌率在20%以下,再生成活率保持在60%左右,可以满足植株再生要求。     

匍匐小菊遗传转化过程中选择压力的确定

该试验以北京农科院生物中心新近培育的匍匐小菊品种"粉地毯"为材料,以叶片为外植体,建立"粉匍"的高效再生体系.试验共进行了6种不同培养基的筛选,研究了6-BA对于再生频率的影响,最终确立了6-BA的最佳浓度.在MS 6-BA(0.5 mg/L) NAA(0.1 mg/L)培养基上获得91%的再生率,在1/2 MS NAA(0.1 mg/L)培养基上诱导生根.在获得高效叶盘再生体系的基础上,又研究了植物遗传转化过程中常用的2种选择标记卡那霉素(Km)和除草剂(PPT)对菊花不定芽分化的影响.结果表明:大于8 mg/L的Km和大于0.4 mg/L 的PPT能够完全抑制试验材料的不定芽分化.试验最终确定了匍匐小菊对卡那霉素、草丁膦的适宜筛选浓度,分别为5 mg/L 和 0.2 mg/L,为以后进行匍匐小菊的基因工程工作奠定了基础.     

双T-DNA共转化获得转基因番木瓜

番木瓜采后期间的迅速软化现象,导致果实的货架期十分短暂。利用RNAi-β-Gal双T-DNA植物表达载体p2301/TTRG,通过农杆菌介导,探索了液体振荡转化法和浸泡转化法对番木瓜胚性愈伤组织共转化效率的影响。经抗生素敏感性测定,将卡那霉素筛选质量浓度确定为150mg·L-1。在该质量浓度下,2种方法均获得了转基因再生植株,但转化效率仍较低。正交试验结果表明,浸泡转化法中各处理因素的作用大小为:AS质量浓度共培养时间=菌液光密度值=侵染时间,最佳共转化组合为:100μmol·L-1AS+菌液光密度值0.2+侵染20min+共培养3d。经PCR和Southern杂交检测,所获得的5株再生植株中有2株为共转化的结果,诱导了其中1株生根并移栽。为进一步选育无选择标记基因的抗软化转基因番木瓜奠定了基础。     

根癌农杆菌介导寒富苹果转化体系的建立

以寒富苹果组培苗叶片为外植体,利用植物表达载体上含潮霉素抗性基因的根癌农杆菌EHA105(pCAMBI-A1301)和含卡那霉素抗性基因的根癌农杆菌EHA105(pCAMBIA2301)对影响寒富遗传转化效率的因素进行系统研究。结果表明,寒富叶片对潮霉素反应敏感,在附加潮霉素的培养基上寒富叶片褐化较为严重。潮霉素和卡那霉素适宜的筛选质量浓度分别为4 mg.L-1和25 mg.L-1。农杆菌介导寒富苹果转化体系的建立以MS+TDZ 2.0 mg.L-1+NAA 0.5 mg.L-1培养基为叶片离体再生芽培养基。适宜的转化条件为:菌液浓度D 600nm=0.5、叶片外植体在菌液浸泡8 min、共培养时间为3～4 d、推迟4 d进行筛选培养。抗性基因对转化效率具有明显的影响,EHA105(pCAMBIA2301)的平均抗性芽再生率(0.96%)比EHA105(pCAMBIA1301)的平均抗性芽再生率(0.58%)高出几乎50%,EHA105(pCAMBIA2301)的抗性芽再生率最高达1.87%。GUS组织化学染色和PCR鉴定结果表明本研究获得了寒富苹果转基因植株。     

香菇高粱菌种制作工艺的优化

为了筛选出适宜的香菇高粱菌种制作工艺,提高香菇菌种质量,缩短菌种制作时间,提高菌种生产效率。试验采用正交试验对高粱菌种进行优化,设置高粱浸泡时间、浸泡温度和生石灰浓度三个因素。结果得出:香菇高粱菌种生产过程中高粱最适宜浸泡时间为36h,浸泡温度25℃,浸泡液生石灰浓度1%。     

农杆菌介导的人白细胞介素-4基因转化甘蓝的研究

以结球甘蓝‘92-1012-3-11’自交系种子转白细胞介素-4(IL-4)基因T0代材料为试材,研究了通过农杆菌介导法将人IL-4基因导入甘蓝后代的遗传转化情况.结果表明:共得到抗草铵磷(PPT)抗性再生植株396株,聚合酶链式反应(PCR)阳性植株137株,其中带柄子叶转化率为8.1％,下胚轴分化率为5.8％.通过对转基因阳性株T0代的PPT抗性筛选、PCR、PCRSouthern杂交检测获得IL-4阳性甘蓝植株,表明IL-4基因已转入甘蓝受体中.经ELISA和Western检测,说明IL-4基因已整合到甘蓝基因组,但表达量很低(0.23～2.81 ng/mL),且各植株间的表达量差异极大.     

利用PPT或Kan叶面喷施法建立番茄转基因阳性苗筛选技术研究

以三叶一心期Micro-Tom幼苗为试材，叶面喷施不同浓度PPT或Kan后采用RLA法评估叶片受伤害程度，划分分级标准，确定PPT或Kan筛选的适宜浓度，建立转基因抗性苗筛选体系，并用带有bar或nptⅡ的转基因T1番茄幼苗进行抗性筛选验证。结果表明，PPT和Kan对Micro-Tom番茄幼苗的伤害均可分为7级；PPT浓度为1.50～1.75 mg·L-1、Kan浓度为120～150 mg·L-1时，番茄植株反应明显，且不会产生不可逆伤害，可作为转基因植株抗性苗筛选的适宜浓度；T1转基因番茄幼苗的叶面喷施PPT或Kan抗性筛选结果与利用标记基因bar或nptⅡ的PCR克隆验证结果高度一致。     

“新郁”葡萄离体再生体系的建立

以"新郁"葡萄组培苗为试材,采用离体再生方法,探究了IBA+6-BA及IBA+TDZ2种激素组合的8个浓度配比对"新郁"葡萄离体叶片、叶柄和茎段的愈伤组织诱导及再生的影响。此外,通过比较红光、白光、蓝光、暗培养转红光、暗培养转白光、暗培养转蓝光6种光照条件下愈伤组织的诱导效率及分化潜力,确定了最适宜"新郁"葡萄离体组织培养的光照条件。结果表明:"新郁"葡萄离体再生体系在以叶片为外植体时不定芽再生效率最高;在最适宜的外源激素组合IBA 0.2mg/mL+6-BA 2.0mg/mL诱导下,不定芽再生率可达34.9%。6种光照条件中,以暗培养3周后转红光培养不定芽再生效果最佳,再生率、平均再生芽数、愈伤组织超氧化物歧化酶(SOD)活性和干物质含量均高于其它光质。     

果树芽再生研究进展

芽再生在植物组培快繁、遗传转化及诱变育种等研究中应用广泛。笔者在本课题组20多年从事枣组培和芽再生研究的基础上,综述了影响果树芽再生的主要因素,包括基因型、外植体类型、生长调节剂种类及配比、光照条件、基本培养基类型、氮源、碳源、AgNO_3和干化处理等,提出了果树芽再生存在的主要问题和对策措施、前景展望,以期为提高果树芽再生效率提供参考。     

苦瓜下胚轴的离体再生体系

为了建立高频的苦瓜离体再生体系,为苦瓜遗传转化提供技术基础,筛选了最适消毒方法和外植体类型。以MS培养基为基础培养基,添加不同浓度激素组合,筛选最适于苦瓜不定芽诱导、伸长和生根的培养基。最佳的消毒方法为:用水浸泡去壳的种子15 min,在超净工作台中用75%酒精浸泡30 s后再用4%NaClO浸泡6 min,用无菌水冲洗4～5遍,污染率为0,发芽率为98%;最佳的愈伤组织诱导培养基为MS+2.5 mg·L~(-1)6-BA+0.01 mg·L~(-1)IBA,愈伤组织密度为0.79 g·cm~(-3),不定芽的分化率为39%,最佳外植体为下胚轴(12 d),诱导率为41%;最佳的增殖培养基为MS+1.0 mg·L~(-1)6-BA+0.005 mg·L~(-1)IBA;最佳的生根培养基为MS+0.1 mg·L~(-1)IBA,移栽存活率为74%。初步建立了苦瓜离体再生体系。     

''''宫藤''''富士苹果叶片离体再生体系的建立

以'宫藤'富士苹果组培苗为试材,对叶片离体再生体系进行了研究.不同激素种类、浓度配比及叶片放置方式的试验结果表明:以MS为基本培养基添加5.0 mg/L 6-BA、1.0mg/LNAA叶片远轴面接触培养基(叶片反放)可得到最高的再生效率,为73.3%,6-BA对叶片再生效果要好于TD2,且提高NAA浓度并不能提高TDZ对再生频率和再生叶片平均再生芽数的影响.再生植株在生根诱导培养基(1/2 MS 1.0 mg/L IBA)、生根培养基(1/2 MS)上进行培养后移入营养土成活率可达100%.     

梨叶片离体培养和植株再生

 用梨(Pyrus) 4 个栽培品种的叶片诱导不定芽。暗培养20 d , 取试管苗顶部幼嫩叶片, 远轴面向下接触培养基, 叶片再生效率高。八月红品种的叶片再生效率高于其它3 个品种。在NN69 + TDZ 1. 0 mg/L + IBA 0. 5 mg/L 培养基上, 八月红梨叶片再生频率为100 % , 平均再生芽数为5. 78 。八月红梨和水晶梨叶片再生苗在附加IBA 的1/ 2MS 培养基上生根。     

板栗苞生物发酵栽培茶薪菇研究

利用板栗苞为培养料栽培茶薪菇,采取生物发酵、石灰水浸泡、直接拌料装袋3种原料处理方式,经熟料栽培管理,测定各培养料菌袋菌丝生长速度和子实体产量及生物学效率。结果表明:生物发酵与石灰水浸泡、直接拌料装袋的培养料相比较,差异均达到显著水平,板粟苞生物发酵栽培的茶薪菇菌丝生长旺盛、生物转化率较高。     

苦瓜离体再生体系建立的研究

以MS为基本培养基,附加不同浓度的激素组合进行苦瓜离体再生体系的研究。结果表明:种子去壳洗净浸泡5min,用70%酒精浸泡1min,洗净后0.1%HgCl2消毒10min的灭菌效果最好;通过愈伤组织诱导不定芽没有取得成功;利用无菌苗不同部位直接诱导不定芽,子叶节效果最好,最高诱导率达到100%,最适宜诱导培养基是MS+6-BA 2mg/L+IBA 0.02mg/L和MS+6-BA 4mg/L+IBA 0.01mg/L;最适生根培养基为1/2MS+IBA 0.2mg/L。     

平菇原生质体再生子实体性状研究

本文报道使用溶壁酶,两次成功地分离出高产的原生质体。从原生质体再生菌落中,随机选择若干再生菌落与亲本对比作出菇实验,同时也进行性状观察。原生质体再生菌丝比亲本的菌丝生长速度快,粗壮而洁白,抗杂菌,生理转化出显原基快,采菇早而集中。再生菌落产菇的生物效率比对照平均高14.2—18.8％,其中最高产量的生物效率高达157.1％。观察发现再生的子实体在形态上发生变异,再生菌落与亲本之间有些产生明显的拮抗线。     

樱桃砧木CAB-6p离体叶片再生体系的优化

以欧洲甜樱桃优良矮化砧木CAB-6p试管苗幼嫩叶片为试材,从基本培养基、激素配比、叶片生理状态和培养基中琼脂用量等方面对影响离体叶片再生的关键因素进行了研究。结果表明,CAB-6p试管苗幼嫩叶片以WPM为基本培养基再生效果最好,明显优于QL和DKW培养基,1/2MS培养基再生效果最差;最佳激素配比是BA2mg/L+IAA2mg/L,用IBA或NAA替代IAA出现愈伤组织生长量大但再生率低;CAB-6p试管苗顶部新发出合拢的幼嫩叶片再生能力最高,半展开的幼嫩叶片和完全展开的幼嫩叶片未能再生植株;用4.5g/L琼脂配制偏软的再生培养基明显有利于提高离体叶片的再生效率。通过以上几个方面的优化,建立CAB-6p试管苗幼嫩叶片高效离体再生技术体系,再生率可稳定地保持在90%左右,平均每叶再生4～5芽。     

秋子梨茎段薄层细胞培养再生初探

以秋子梨试管苗为试材,进行了其茎段薄层细胞组织培养再生体系的构建,以期为秋子梨无性繁殖和工厂化育苗奠定基础,同时为薄层细胞培养在梨属植物当中的应用提供参考。结果表明:秋子梨茎段薄层细胞的再生受到激素浓度和配比的影响,其中不定芽再生最佳培养基为MS+BA 1.5mg/L+NAA 0.25mg/L+蔗糖30g/L+琼脂糖7g/L,再生效率达100%;不定根再生最佳培养基为1/2MS+IBA 0.5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂糖7g/L,根再率达66.7%;同时研究还发现适宜的暗培养有助于愈伤组织的诱导和不定芽的再生。     

不同细胞分裂素对2001富士苹果离体叶片再生的影响

以综合经济性状优良的2001富士苹果为试材,研究了不同浓度的细胞分裂素对其离体叶片再生效率的影响。结果表明:2001富士离体叶片分化不定芽适宜的BA、CPPU和TDZ的最佳再生浓度范围分别为8.0mg/L、6.0~8.0mg/L和1.0~2.0mg/L,再生频率分别达到67.9%、78.6%~89.3%和100.0%,ZT和KT不适宜诱导2001富士叶片分化不定芽。     

基于体细胞胚发生的细叶百合和兰州百合多倍体诱导及鉴定

以细叶百合（Lilium pumilum DC. Fisch.）和兰州百合（Lilium davidii var. unicolor）的鳞片和胚性愈伤组织作为诱导材料,用不同浓度秋水仙素以浸泡和混培两种处理方式进行多倍体诱导。以形态学观测、根尖染色体计数、气孔观测对多倍体植株进行倍性鉴定,分别获得了19株细叶百合四倍体植株和6株兰州百合四倍体植株,最佳处理方式为0.1%秋水仙素浸泡胚性愈伤组织24 h。使用ISSR对经体细胞胚发生的二倍体和多倍体再生植株进行遗传分析,发现两种百合二倍体植株遗传较稳定,而多倍体植株均发生遗传变异,其中细叶百合和兰州百合遗传变异率分别为15.48%和9.75%。