苹果RAPD分析体系的建立

对富士苹果（Ｍａｌｕｓ Ｐｕｍｉｌａ Ｍｉｌｌ．ｃｖ．Ｆｕｊｉ）ＲＡＰＤ（Ｒａｎｄｏｍ Ａｍｐｌｉｆｉｅｄ Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ ＤＮＡ）分析体系的优化研究表明,ＲＡＰＤ反应体系中,ＤＮＡ、Ｔａｑ酶、引物和Ｍｇ＾２＋４种主要成分的最适用量分别为：２０ｎｇ、１．０Ｕ、０．２μｍｏｌ．Ｌ＾－１和３．０μｍｏｌ．Ｌ＾－１。采用该优化体系,以ＯＰＪ０３为引物,构建了我国及世界范围内苹果生产中重要的２８个     

埃斯(Ace)苹果的离体培养及繁殖

埃斯（Ａｃｅ）苹果的离体培养及繁殖１植物名称苹果品种埃斯。２材料类别多年生树茎尖生长点。３培养条件（１）起始培养基：ＭＳ＋６－ＢＡ３．０ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．０５ｍｇ／Ｌ＋ＣＨ３００ｍｇ／Ｌ＋３％食用绵白糖；（２）增殖培养基：ＭＳ＋６－ＢＡ１．５ｍｇ／...     

苹果砧木的微型繁殖

苹果砧木的微型繁殖初春，取三种苹果砧木（Ｍ２６、Ｍ２７和ＭＭ１０６）带有２个叶原基的分生组织，接种在附加ＢＡＰ（０．９—１．５ｍｇ／Ｌ）的ＭＳ和ＱＬ培养基上，六周后可形成芽丛，在附加ＢＡＰ０．９ｍｇ／Ｌ、ＩＢＡ０．１ｍｇ／Ｌ和Ｇ－Ａ３０．１ｍｇ／Ｌ的...     

苹果离体叶片高效再生不定芽技术研究

苹果不同品种叶片再生不定芽能力不同,嘎拉再生能力最强,其次是乔纳金,富士最难再生。用继代培养３ 年以上、当代培养３０ ～５０ ｄ 的试管苗,取顶部第２ ～４ 叶位幼嫩叶片,远轴面向下接触培养基,再生效率高。诱导叶片再生不定芽适宜培养基为ＭＳ＋ ＴＤＺ１．０ ｍｇ·ｌ－ １（ 富士、乔纳金）或ＢＡ５ ．０ ｍｇ·ｌ－ １ ＋ ＮＡＡ０ ．１ ～０．２ ｍｇ·ｌ－ １ ＋ 蔗糖３５ ．０ ｇ·ｌ－ １ ＋ 琼脂６ ．２ ｇ·ｌ－ １（ 嘎拉） 。     

蟆叶秋海棠的叶柄培养和植株再生

以叶柄为外植体,研究了蟆叶秋海棠的离体快繁技术。结果表明：附加ＢＡ０．５～２．５ｍｇ·Ｌ－１和ＩＡＡ０．１ｍｇ·Ｌ－１的ＭＳ培养基可诱导叶柄外植体产生大量不定芽。采用ＭＳ＋ＢＡ０．５ｍｇ·Ｌ－１＋ＩＡＡ０．１ｍｇ·Ｌ－１的培养基进行继代培养,每４～６周可扩大增殖１０倍左右。在无激素的ＭＳ培养基中,试管苗６天即可生根,并且根系粗壮。幼苗移栽成活率约９０％。     

RAPD技术在木耳属杂交种及原生质体融合子鉴定分析中的应用

本研究以ＲＡＰＤ（ＲａｎｄｏｍｌｙＡｍｐｌｉｆｉｅｄＰｏｌｙ－ｍｏｒｐｈｉｃＤＮＡ）技术为主，比较分析食用菌木耳属（Ａｕｒｉｃｕｌａｒｉａ）种内杂交种．种间原生质体融合子与其亲本菌株的ＰＣＲ（ＰｏｌｙｍｅｒｓｅＣｈａｉｈＲｅａｃｔｉｏｎ）扩增的ＤＮＡ片段之间差异，并辅以其它手段，如核相及核数目观察，同功酶鉴别，以期建立完整有效的检测技术系列，确证其杂交种融合子的真实性及可靠性。在ＲＡＰＤ分析中，用于测试的１０种随机引物仅有４种引物与供试菌株的ＤＮＡ模板具有较好的结合能力，其中１种引物可用于检测杂交种及其亲本，另外３种引物可用于检测融合子反亲本。检测结果显示：３个供试杂交种中有２个为真杂合子，１个为假杂合子；２个供试融合子均为非稳定杂合子。与常规方法鉴定结果比较基本相符。因此，ＲＡＰＤ技术提供了一种快速、简便、准确的杂交种及融合子的鉴别方法。     

离体葡萄未成熟胚成苗途径研究

以巨峰葡萄剥离幼胚及红井川品种切喙胚珠为外值体接种至含不同浓度２,４Ｄ、ＮＡＡ与６－ＢＡ配比的ＮＮ－１９６９培养基中,诱导葡萄未成熟胚产生胚状体及实现胚萌发。两品种均是在含２,４－Ｄ０．５ｍｇ·１－１、６－ＢＡ１．０ｍｇ·１－１的培养基中诱导胚进入胚状体发生途径的;而在含ＮＡＡ（１．０、２．０ ｍｇ·１－１）与 ６－ＢＡ（０．２、１．０）或２．０ ｍｇ·１－１ＺＴ 配比的培养基上幼胚进入胚萌发途径成苗。由此讨论了培养基激素、胚发育时期对胚培养两种途径的诱导和控制。     

正交试验法在龙眼和荔枝组织培养中的应用

利用正交设计试验法研究了椰乳（ＣＭ）、２，４－Ｄ、赤霉素（ＧＡ３）和蔗糖等四个因素及其组合对石硖龙眼和桂味荔枝的幼胚愈伤组织产生的影响，并讨论了正交设计试验法应用于龙眼和荔枝组织培养培养基筛选的可能性。结果表明：１）对龙眼，诱导愈伤组织的最优组合是 ＣＭ １０％、２，４－Ｄ１．０ｍｇ·１－１、ＧＡ３０ｍｇ·１－１和蔗糖３％；对荔枝，最优组合是ＣＭ０％，２，４－Ｄ１．０ｍｇ·１－１，ＧＡ３０ｍｇ·１－１和蔗糖 ５％。 ２）适当的 ２，４－Ｄ浓度（１．０ ｍｇ·１－１）可提高愈伤组织的产量；３）ＧＡ３抑制了龙眼和荔枝的愈伤组织的产生；４）不同树种的胚需要不同的糖浓度；５）适当ＣＭ浓度（１０％）可提高龙眼愈伤组织的产量，而荔枝愈伤组织的产生并不需要ＣＭ。     

牡丹离体快繁技术研究

以“洛阳红”和“姚黄”等品种为试材,对牡丹的离体快繁技术进行了研究。结果表明：牡丹芽培养的适宜外植体是２月份取材的休眠芽。附加ＢＡ１ｍｇ·Ｌ－１和ＧＡ０．５ｍｇ·Ｌ－１的改良ＭＳ培养基对牡丹芽的增殖和生长最有效。１／２ＭＳ＋ＩＢＡ１ｍｇ·Ｌ－１培养基有利于牡丹试管苗生根。在较低温度下,以腐殖土作基质,牡丹试管苗的移栽成活率达４８％。     

花叶万年青的组织培养

以“夏雪”品种为试材,研究花叶万年青的组培快繁,结果表明,无菌材料的获得以ＭＳ＋ＢＡ５＋ＩＢＡ０．２为最佳。快速繁殖阶段以ＭＳ＋ＢＡ５＋ＡＤ（１－１０）＋ＩＢＡ（０．１－０．２）＋３０（Ｇ／Ｌ）糖为最佳,６－ＢＡ与ＩＢＡ的比值在１０～５０倍为宜。生根前一代用ＭＳ＋ＢＡ（１－５）＋ＩＢＡ（０．１－０．２）＋３０（Ｇ／Ｌ）糖组合有利于芽苗长高,生根培养用１／２ＭＳ＋ＩＢＡ１＋６－ＢＡ０．１,在快繁阶段     

苹果不同继代次数的茎尖组培苗同工酶酶谱及RAPD分析

 分别对不同继代次数(3～90代) ‘富士’、‘金冠’、‘乔纳金’苹果组培苗进行POX、EST、AMY同工酶分析。结果表明, 同一品种不同继代次数处理间均有一致的酶带谱型。利用超薄层等电聚焦电泳根据POX酶蛋白pI的差异可区分金冠和乔纳金两品种, 同一品种不同继代次数的组培苗之间pI相同,组培过程未对POX酶蛋白pI产生影响。利用25个随机引物对不同继代次数的苹果组培继代苗进行了RAPD分析, 其特征带型表现一致, 未发现变异。说明苹果茎尖离体继代培养90次以内具有较高的遗传稳定性。     

应用AFLP分子标记鉴定苹果品种

在建立苹果品种AFLP分析体系的基础上,从68对引物中筛选出了4对多态性高、分辨能力强的引物（即P32M46、P44M53、P59M41和P79M61）。分析了P32M46引物绘制的我国25个苹果重要品种的AFLP指纹图谱的遗传多样性,确定了各供试品种的差异带,区分子供试的25个苹果品种。对AFLP分析的关键步骤进行了讨论,并对生产上应用AFLP技术检测苹果品种真实性和纯度作了展望。     

莲雾ISSR反应体系的优化与应用

以黑珍珠莲雾为试材,对ISSR反应体系中的各个主要影响因子进行了优化筛选,结果表明,25μL ISSR反 应体系各组分的最适浓度分别为:1×Buffer(不含Mg2+)、2.0 mmol/L Mg2+、0.2 mmol/L dNTPs、Taq DNA聚合酶1.5 U、引 物0.2 μmol/L、模板1.0 ng/μL。此外,加入1.6％的甲酰胺有利于减轻背景噪音的干扰。并利用该优化体系对12个连 雾类型和2个近缘种进行了ISSR扩增,证实了该体系稳定可靠。     

适宜加工用苹果品种TP-M13-SSR 指纹图谱构建及遗传关系分析

 采用TP-M13-SSR 荧光标记方法,构建19 个适宜加工脆片和25 个适宜制汁的苹果品种在 11 个SSR 位点的指纹图谱,并通过聚类分析研究其遗传关系。仅利用两对引物CH04h02 和CH05d04 即 可区分44 个供试品种,各品种的TP-M13-SSR 指纹图谱互不相同。构建的适宜加工苹果品种的SSR 指纹 图谱可以作为品种特异指纹图谱为品种鉴别提供重要依据。44 个苹果品种的相似系数在0.7259 ~ 0.9704 之间,在相似系数0.798 处划分供试品种,除瑞光、马空、红月、蜜脆、珍宝、赤阳和短枝金冠,其余适 宜制汁的品种均聚到了一起,而适宜加工脆片的品种聚类比较分散。适宜加工苹果品种遗传基础广泛, 适宜加工特性与亲本相关。在制订和完善制汁用和加工脆片用苹果品质评价体系时,需要兼顾遗传关系 与加工特性的相关性。金冠、红玉、国光、富士和元帅等为较好的加工苹果品种的育种亲本,应加强育 种利用。     

中国李RAPD的优化反应体系及其在品种鉴定中的应用

以5'-GACCGCTTGT-3'为随机引物,以奉化李(Prunussalicinacv.Fenghuali)为试材,对中国李RAPD反应体系进行了优化研究,结果表明:25μL反应体系中,TaqDNA聚合酶、Mg2+、引物、模板DNA和dNTPs5种主要成分的适宜浓度或用量分别是:1.0U、2.5mmol/L、20ng、40ng和0.2mmol/L。利用该优化反应体系,用10个随机引物,构建了5个中国李品种的RAPD指纹图谱;并以共有谱带率对这些品种遗传关系进行了分析,5个中国李品种的共有谱带率平均为33.2%,变异幅度为20.1%～44.9%。     

PEG渗调引发处理对菜薹老化种子DNA损伤的修复作用

利用ＲＡＰＤ技术对菜薹人工老化种子ＤＮＡ的损伤及ＰＥＧ渗调引发处理的修复作用进行了研究。在６１种引物中，有６种在菜薹人工老化的种子上获得了基因组ＤＮＡ指纹图谱，平均每种引物扩增的总ＤＮＡ带数为２．１６，多态性ＤＮＡ带数为１．１７，有１１种引物在ＰＥＧ渗调引发的菜薹老化种子上获得了基因组ＤＮＡ指纹图谱，平均每种引物扩增的总ＤＮＡ带数为３．９１，多态性ＤＮＡ带数也是３．９１。人工老化对菜薹种子基因组Ｄ     

番茄品种SSR标记鉴定技术研究

以16个番茄品种为材料,从200对番茄SSR引物中筛选出20对适合用于番茄品种鉴定的引物,用该20对引物对66个番茄品种进行分析,共检测出52个等位基因变异,等位基因变异范围为2~5个,平均每个位点产生2.6个等位基因变异。通过遗传聚类方法对引物组合的品种鉴别能力进行分析,结果显示仅用9对引物构成的引物组合就可以对66个番茄品种进行有效鉴别,该9对引物组合构建的SSR-DNA指纹图谱可作为品种的遗传标签用于品种真伪鉴定。     

利用TP-M13-SSR标记构建苹果栽培品种的分子身份证

以国家果树种质兴城梨、苹果圃保存的314份来自19个国家的苹果栽培品种为试材,利用TP-M13-SSR标记,基于TP-M13-SSR指纹图谱构建苹果种质分子身份证。16对SSR引物在供试种质间共检测出等位基因357个,平均每对引物检测到22.3个。根据引物扩增等位基因数和Shannon’s指数,从1对引物开始逐步增加引物数量筛选可将供试材料全部区分的引物组合,最终确定6对核心引物可以区分全部供试苹果种质。基于供试苹果种质在6个SSR位点的指纹图谱,将等位基因编码成字符串获得分子身份证,利用条码技术其进一步转化成可被机器快速扫描的条码分子身份证,使每份种质具有可辨的分子身份证,达到利用最少、最特异引物区分最多苹果种质的目的。     

苹果品种ISSR指纹图谱构建

以富士、长富2、长富6、红星、新世纪、美国8号及凉香等7个品种为试材,进行了ISSR(inter-simplesequencerepeats)分析,构建了这几个苹果品种的ISSR指纹图谱。发现引物IS061可将富士、长富2与长富6三个品种一一区分开;而IS026则能将富士、红星、新世纪及美国8号4个品种相互区别开。初步证明利用ISSR标记技术能很好地将不同苹果品种鉴别出来。     

黄瓜栽培种、近缘野生种、种间杂种及其回交后代的RAPD 分析

 黄瓜栽培种、黄瓜野生变种、近缘野生种、种间杂交种及其与黄瓜回交自交的后代以及甜瓜为试材, 采用RAPD 方法探讨其亲缘关系。对23 份试材进行扩增, 筛选出31 条随机引物的扩增产物进行结果分析, 共产生375 个位点, 具多态性位点占90. 0 % , 平均每条扩增出6. 3 条。通过UPGMA 聚类分析,以遗传距离0. 37 为阀值, 可将23 份试材归为黄瓜、近缘野生种、种间杂交种及甜瓜亚属种4 类。