桃果实ACC合酶cDNA的克隆

根据其它植物ＡＣＣ合酶氨基酸保守区设计两组简并引物,用套式ＰＣＲ技术从桃成熟果实ｃＤＮＡ中扩增出１．１ｋｂ大小特异性片段,将其克隆至ｐＧＥＭ－Ｔ载体上,对重组克隆ｐＰＡＣＳＩ进行全序列测定表明,插入片段全长１１００个碱基,编码３６６个氨基酸,该基因与番茄、笋瓜、小西葫芦、康乃馨、苹果ＡＣＣ合酶ｃＤＮＡ氨基酸序列同源性分别为７２．７％,７１．３％,７１．１％,６９．１％,６５．４％。ＲＮＡ点杂交表明ｐＰＡＣＳＩ基因随着桃果实成熟表达活性增强,乙烯处理能诱导桃果实该基因的表达。     

猕猴桃的组织培养和快速繁殖

１ 植物名称 金魁猕猴桃（Ａｃｔｉｎｉｄｉａ ｄｅｌｉｃｉｏｓａｖａｒ．Ｊｉｎ Ｋｕｉ）２ 材料类别 嫩茎３ 培养条件 培养基：①ＭＳ＋ＺＴＷ．０ｍｓ／Ｌ；②ＭＳ＋ＺＴ１．０ｍｐ／Ｌ；＠ ＭＳ＋６ＢＡ２．０ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ ０．１ｍｇ／Ｌ；④１／２ＭＳ＋ＩＢＡ０．５～０．７ｍｇ／Ｌ。 蔗糖（市售白砂糖）浓度①～③培养基为３．０％，④培养基为 ２．０％；琼脂浓度为 ０．６５％～０．７０％，ｐＨ５．８～６．０，培养温度 ２５～２８℃，每天光照 １３ｈ，光照强度 １５００～２０００ １Ｘ。４ 生长与分化情况４．１ 愈伤…     

无土基质与营养液EC值对切花菊生长发育的影响

探讨了营养液不同水平ＥＣ值与３ 种栽培基质对切花菊生长发育的影响。结果表明， 在‘日本黄菊’现蕾期前， 锯末混合河沙基质， 营养液ＥＣ 值为３ ．６ ～４ ．０ ｍＳ·ｃｍ － １ 对菊花生长发育较好； ＫＤ１ 型高吸水性树脂混河沙基质， 营养液ＥＣ值为２．６～３ ．０ ｍＳ·ｃｍ － １ 为宜。锯末混炉渣的ＥＣ值以２．０～２ ．５ ｍＳ·ｃｍ － １ 适宜。在上述ＥＣ 值下， 菊花生长发育良好， 切花外观达标率高。在生长发育良好状态下（ＥＣ３ ．１ ～３ ．５） 菊花组织矿质元素含量为： Ｎ （３６ ．７８ ±１２．０９） 、Ｐ （６．７０ ±２．６３） 、Ｋ （５７ ．４３ ±２２ ．１０） 、Ｃａ （５ ．４９±２ ．０３） 、Ｍｇ （１．８０ ±０．４９） ｍｇ·ｇ－ １ 。     

KT─30S和GA_4＋7对‘大紫’樱桃果实的影响

低浓度（５ｍｇ．Ｌ－１）ＫＴ─３０Ｓ盛花期喷花序、３０００μｇ．ｇ－１ＧＡ４＋７果梗涂布及两者混用，可显著增大果个和提高单果重，单果重分别比对照提高１３％、１７％和３２％；而高浓度（１０ｍｇ．Ｌ－１）ＫＴ一３０Ｓ可显著减少果个和降低单果重。ＫＴ─３０Ｓ和ＧＡ４＋７对果实的总酸含量、可溶性固形物含量及着色也有一定影响。     

KT—30S和GA4＋7对‘大紫’樱桃果实的影响

低浓度（５ｍｇ．Ｌ＾－１）ＫＴ－３０Ｓ盛花期喷花序、３０００μｇ．ｇ＾－１ＧＡ４＋７果梗涂布及两者混用，可显著增大果个和提高单果重，单果重分别比对照提高１３％，１７％和３２％，而高浓度（１０ｍｇ．Ｌ＾－１）ＫＴ－３０Ｓ可显著减少果个和降低单果重，ＫＴ－３０Ｓ和ＧＡ４＋７对果实的总酸含量，可溶性固形物含量及着色也有一定影响。     

贵州山茶属五种野生植物的光合特性研究

研究了小黄花茶（ＣａｍｅｌｌｉａｌｕｔｅｏｆｌｏｒａＹ．Ｋ．Ｌｉ）、美丽红山茶（Ｃ．ｄｅｌｉｃａｔａＹ．Ｋ．Ｌｉ），威宁短柱油茶（Ｃ．ｓａｌｅｎｅｎｓｉｓＳｔａｐｆｅｘＢｅａｕ．）、狭叶瘤果茶（Ｃ．ｎｅｒｉｉｆｏｌｉａＣｈａｎｇ）和四球茶（Ｃ．ｔａｃｈａｎｇｅｎｓｉｓＦ．Ｓ．Ｚｈａｎｌｇ）贵州山茶属五种野生植物的光合生理，均为Ｃ３植物，其ＣＯ２补偿点在６０μＬ／Ｌ左右，光呼吸速率与总光合的比值为２５％左右，光补偿点８００～２５００ｌｘ，光饱和点１６００～４１０００ｌｘ。其中小黄花茶的光补偿点及光饱和点最低，威宁短柱油茶的光补偿点及光饱和点最高；净光合速率（Ｐｎ）６．００～１５．００ＣＯ２ｍｇ／（ｄｍ２·ｈ），光呼吸速率（Ｐｒ）２．００～５．００ＣＯ２ｍｇ／（ｄｍ２·ｈ），其中威宁短柱油茶的Ｐｎ及Ｐｒ均较高，四球茶的Ｐｎ及Ｐｒ均较低；Ｄｒ（暗呼吸速率）０．７０～２．６０ＣＯ２ｍｇ／（ｄｍ２·ｈ），其中威宁短柱油茶的Ｄｒ较高，小黄花茶的Ｄｒ较低。Ｐｎ、Ｐｒ及Ｄｒ相互间呈正相关；Ｃｈｌ．（ａ＋ｂ）（叶绿素）含量７．６０～１２．５０ｍｇ／ｄｍ２，其中小黄花茶的含量较高，威宁短柱油茶的含量较低。     

营养物质对早熟桃幼胚离体培养成苗的影响

本文研究了培养基中干营养物质对早熟桃幼胚成苗的影响。结果发现：桃胚发育 指数ＰＦＬ值（胚长／种子长）愈小，对所需培养基中铵态氮浓度愈高，蔗糖浓度愈大。　　但培养基加氨基酸化合物后，对幼胚成苗有抑制作用，仅仅可以提高ＰＦＬ值０．２幼胚的　　成苗率。结果表明：ＫＮＯ３１９００毫克／升（以下单位同）、ＮＨ４ＮＯ３８５０、ＭｇＳＯ４．７Ｈ２Ｏ　　１８５、ＫＨ２ＰＯ４８５、　ＣａＣｌ２·２Ｈ２Ｏ２２０、　ＭＳ培养基的微量元素和有机化合物、蔗　糖　　６％，Ｇｌｎ６８０、ＬＨ５００、Ａｄ４０、ＢＡ２．０、１ＡＡ０．２５，ＮＡＡ０．２５、Ａ．Ｃ．０．０２％、琼　　脂０．６％组合的培养基适合于ＰＦＬ值０．２幼胚成苗，成苗率达９３．８％。要使ＰＦＬ值０．３　　～０．４幼胚成苗达９０％以上，尚要对培养基中大量元素做进一步调整。     

猕猴桃ACC氧化酶cDNA克隆及全序列测定

从‘秦美’猕猴桃（ＡｃｔｉｎｉｄｉａｄｅｌｉｃｉｏｓａＣ．Ｆ．ＬｉａｎｇｅｔＡ．Ｒ．Ｆｅｒｇｕｓｏｎ．ｃｖ．Ｑｉｎｍｅｉ）呼吸高峰跃变初期的果实中提取总ＲＮＡ，然后纯化得ｍＲＮＡ，用Ｏｌｉｇｏ（ｄＴ）作为引物反转录合成ｃＤＮＡ第一链，以此为模板，用人工合成的寡聚核苷酸作为引物进行扩增，得到大小约０．９５Ｋｂ基因片段，并将其克隆到ｐＧＥＭ－５ｚｆ（＋）载体上。经限制性内切酶图谱分析，组建亚克隆并进行了全序列测定，在其开放读码框架内，由９５７个ｂｐ编码３１９个氨基酸组成，该ｃＤＮＡ与海沃德ＡＣＣ氧化酶ｃＤＮＡ的核苷酸和氨基酸残基同源率分别达９５．０１％和９５．６１％，证明己克隆到完整的秦美猕猴桃ＡＣＣ氧化酶基因编码区。     

吡虫啉对温室白粉虱的毒力及其田间药效研究

２０％吡虫啉（康福多）浓可溶剂对温室白粉虱的毒力及其田间药效试验结果表明,２５００～５０００倍稀释液,药后１、３、７、１５天的校正防效为７５．６％～９６．５％,明显优于２０％灭扫利乳油２０００倍稀释液。康福多对温室白粉虱的室内毒力也显著高于灭扫利,其ＬＣ５０值仅为后者的０．０１倍     

南瓜植物的遗传基因及种间杂交

１南瓜植物的遗传基因 １９９６年美国的哈顿（Ｈｕｔｔｏｎ Ｍ Ｇ）和罗宾逊（Ｒｏｂｉｎｓｏｎ Ｒ Ｗ）在国际葫芦科遗传协会（ＣＧＣ）年报上发表了修订的南瓜基因目录,使已知南瓜遗传基因达到９２个。其中,控制遗传性状的基因６０个,其余３２个是酶控基因。 以下是南瓜６０个性状基因的名称：１．１美洲南瓜（Ｃ．ｐｅｐｏ）已知基因１．１．１显性 Ｂ１双色－１（果实早黄） Ｂｉ苦味果（高葫芦素含量） Ｂｕ矮生（短节间） Ｄ深绿色茎 Ｄ°深色茎 Ｄｉ碟形果 Ｅｐ－１色素强化（修饰Ｂ１） Ｅｐ－２色素强化（修饰Ｂ１） Ｇｂ花瓣…     

萝卜RsCYP86MF 基因cDNA全序列克隆及结构特征分析

 本研究通过设计保守的基因特异引物, 运用SMART RACE RT - PCR技术从‘圆白’萝卜中获得一个细胞色素P450基因, 命名为RsCYP86M F, 其cDNA全长1818 bp, 含有1581 bp的完整开放阅读框, 编码526个氨基酸, 该基因编码的蛋白序列与白菜的细胞色素P450基因编码的氨基酸序列同源性高达90% , 且有很高的功能区段保守性; 对其可能编码的蛋白质二级结构进行预测发现, 该蛋白质具有细胞色素P450典型的保守结构域FNAGPRLCIG, 及N - 糖基化位点等结构域。     

白菜翻译起始因子eIF(iso)4E.a/c与芜菁花叶病毒TuMV-C4/UK1蛋白互作分析

为阐明白菜翻译起始因子异构体eIF(iso)4E的表达特性,以及该异构体与芜菁花叶病毒(TuMV)的互作关系,在白菜‘极早春’中克隆了eIF(iso)4E.a基因,在‘BP8407’中克隆了eIF(iso)4E.c基因。这两个基因长度一致,均编码200个氨基酸。酵母双杂交和双分子荧光互补试验表明:eIF(iso)4E.a仅与TuMV-C4株系互作,而不与TuMV-UK1株系互作;eIF(iso)4E.c仅与TuMV-UK1株系互作,而不与TuMV-C4株系互作。对白菜eIF(iso)4E蛋白氨基酸序列及空间结构分析发现:eIF(iso)4E蛋白包含帽结合蛋白结构,eIF(iso)4E.a和eIF(iso)4E.c蛋白间存在20个差异氨基酸,其中17个差异氨基酸位于帽结合蛋白结构上;TuMV-C4 VPg与TuMV-UK1 VPg蛋白有4个氨基酸差异位点。通过对TuMV不同株系的VPg蛋白(病毒基因组连接蛋白)氨基酸序列频率分析发现,在4个氨基酸差异位点处,氨基酸的使用频率具有选择性。     

白菜病程相关蛋白1基因cDNA全长的克隆与分析

 以水杨酸处理后的‘苏州青’白菜为材料, 通过RT2PCR和RACE技术, 获得了白菜病程相关蛋白PR-1基因的cDNA全长序列。该基因与甘蓝型油菜PR-1基因氨基酸序列的同源性为91% , 与拟南芥的同源性为78% , 与其它植物的同源性为57%～60%。Southern杂交表明该基因在白菜基因组中的拷贝数至少为2个。半定量RT2PCR分析表明, 2 mmol/L的水杨酸处理后12 h, 该基因的表达量达到高峰。     

水仙温度诱导脂质运载蛋白基因NtTIL的克隆与表达分析

采用PCR法,从水仙（Narcissus tazetta var. chinensis）鳞茎主芽中分离克隆到1个温度诱导脂质运载蛋白基因NtTIL。该基因含有567 bp开放阅读框,编码188个氨基酸。该基因属于lipocalin-2 superfamily基因家族;推导的氨基酸序列含有SCR1、SCR2和SCR3 3个植物lipocalin的典型结构域,与小麦、拟南芥等植物的同源性大于75%;编码的蛋白为稳定酸性亲水蛋白,不含有信号肽,进行N末端朝外由外到内的跨膜运动。qRT-PCR结果分析表明,水仙生长发育过程中鳞茎膨大期NtTIL表达量较低;休眠期表达量先升高后降低。推测NtTIL对水仙鳞茎主芽休眠具有一定调控作用。     

猕猴桃新品种‘金霞’

 ‘金霞’是从野生中华猕猴桃群体中选出的四倍体新品种, 果实近圆柱形, 果实质量最大134 g。结果能力强, 平均产量45 t/ hm² 。果肉淡黄色, 质地细腻多汁, 味香甜, 风味佳, 品质上等, 可溶性固形物15 % , 维生素C 1100 mg/ kg。果实常温下可贮藏30 d 左右。适应性强     

茶树细胞周期蛋白依赖激酶（CsCDK）基因cDNA全长克隆与分析

 采用SMART-RACE-PCR技术获得了茶树细胞周期蛋白依赖激酶基因（CsCDK1）的全长cDNA序列,并进行了相关的生物信息学分析。采用实时定量PCR研究了该基因在茶树越冬芽休眠到萌发后不同阶段的表达模式。克隆到茶树CsCDK1 cDNA序列1 245 bp（GenBank登录号JF449383）,其开放阅读框长924 bp,编码307个氨基酸,预测分子量为34.52 kD,具有CDKs家族典型的保守结构域和空间结构,属于B型CDK家族。系统进化分析表明,CsCDK1氨基酸序列与猕猴桃的CDK亲缘关系最近,达到96%,与其它植物的CDK序列相似性亦在80%以上。该基因在茶树越冬芽休眠期的表达量低于恢复生长期,在萌发期表达量最高。说明该基因与茶树越冬芽休眠的解除关系密切。     

根际低氧对不同抗性猕猴桃幼苗生长和内源激素的影响

 采用水培通氮低氧胁迫法，研究猕猴桃幼苗生长量及叶、根内源激素脱落酸（ABA）、赤霉素（GA₃）、吲哚乙酸（IAA）和玉米素核苷（ZR）对低氧胁迫的响应。结果表明：低氧胁迫下猕猴桃幼苗生长受到抑制，植株鲜、干样质量均低于对照，美味猕猴桃生长受影响相对较小；低氧胁迫下，美味猕猴桃和中华猕猴桃叶内ABA分别较对照增加289.2%和412.9%，根内ABA含量分别增加188.5%和177.4%；叶内IAA含量先升高后下降，第6 d 达峰值时美味猕猴桃和中华猕猴桃分别比对照增加87.3%和61.4%，根内IAA含量变化与叶类似，第4 d 达峰值时分别比对照增加90.4%和59.6%；叶和根GA3和ZR含量随胁迫时间延长而降低，低氧胁迫8 d 时，美味猕猴桃、中华猕猴桃幼苗叶内GA3和ZR分别比对照降低56.5%和79.0%；70.5%和86.1%；根内降低33.1%和55.1%，46.9%、71.3%；低氧胁迫下，猕猴桃幼苗根和叶内IAA/ABA、ZR/ ABA、GA3/ABA比值均呈现下降趋势。     

荔枝FLOWERING LOCUST(FT)同源基因cDNA全长克隆及其表达

应用RT-PCR方法在首次克隆获得荔枝AP1同源基因cDNA全长基础上,又得到2个荔枝FT同源基因cDNA全长,分别命名为LcFT1和LcFT2(基因登录号分别为:JN214350、JN214351)。LcFT1基因开放阅读框522 bp,编码174个氨基酸,推测蛋白质分子质量为19.65 ku,等电点为8.68。LcFT2基因开放阅读框522 bp,编码174个氨基酸,推测蛋白质分子质量为19.56 ku,等电点为7.34。蛋白质二级结构预测表明,LcFT1和LcFT2蛋白都具有4个α螺旋,10个β折叠区。同源分析表明,LcFT1和LcFT2基因在不同植物中的一致性为72%～82%。半定量RT-PCR分析表明,三月红荔枝花芽分化期LcFT1和LcFT2基因只在叶中表达,并且在成熟叶中表达量最多。研究将有助于进一步了解荔枝开花的分子机理及其成花的生物学发育过程。     

侵染白菜的黄瓜花叶病毒分离物基因组的全序列分析

对浙江省杭州地区白菜（Brassica campestris L. ssp. chinensis var. commuis Tsen et Lee.）上获得的CMV分离物（CMV-CTL）进行了全长克隆和基因组序列分析。结果显示：CMV-CTL的RNA1（GenBank序列号：EF213023）全长为3357个核苷酸（nt）,编码993个氨基酸（aa）的1a蛋白;RNA2 （GenBank序列号：EF213024）全长为3047 nt ,编码858 aa的2a蛋白和111 aa的2b蛋白;RNA3 （GenBank序列号：EF213025）全长为2217 nt,编码278 aa的MP蛋白和218 aa的CP蛋白。序列相似性分析表明,CMV-CTL与CMV亚组IB中株系IA相似性最高,RNA 1、RNA 2和RNA3与该株系的相似性分别为91.3%、91.3%和93.6%。CP基因和RNA 3 的5' NTR核酸序列系统发生树分析表明,CMV-CTL与中国大多数CMV分离物一样,属于CMV亚组IB。     

潍坊萝卜中芜菁花叶病毒分离物的分子特性及CP基因的表达

 从表现红心病的潍坊萝卜块根上得到一芜菁花叶病毒( Turnip m osaic virus, TuMV) 分离物(TuMV-Ra) , 通过RT-PCR获得了该分离物的外壳蛋白(CP) 基因, 对其进行了序列测定, 并将其核苷酸序列及推导出的氨基酸序列与GenBank中登录的其它20个TuMV萝卜分离物的相应序列进行比较和分析。结果表明, TuMV-Ra与这20个分离物CP基因核苷酸序列的同源性为89.9% ～99.0% , CP氨基酸序列同源性为94.8%～99.7%; 其中与中国浙江杭州萝卜的两个分离物HZLB1、HZLB2同源性最高, 核苷酸序列的同源性为98.7%和99.0% , 氨基酸序列同源性为99.0%和99.7%。TuMV-Ra与1999年从表现相同症状的潍坊萝卜得到的分离物CHINA-WF CP基因核苷酸同源性为93.66% , 氨基酸同源性为96.53% , 说明病毒发生了比较大的变异, 而且变异的位点主要在CP的N末端。将TuMV-Ra CP基因克隆到原核表达载体pET-22b ( + ) , 在大肠杆菌BL21 (DE3) 中表达出分子量为38 kD的融合蛋白。Western blotting分析证明TuMV-Ra CP在大肠杆菌中得到了正确表达。