宁夏银川地区番茄斑萎病毒和南方番茄病毒复合侵染分子鉴定

2021年在宁夏银川地区病害调查时发现番茄植株茎秆和未成熟果实上出现了褐色、不规则形病斑等疑似病毒病的症状。采用Trizol法提取番茄病株样品的总RNA,使用常见侵染番茄的病毒特异性引物进行RT-PCR检测。结果显示:番茄斑萎病毒(tomato spotted wilt virus,TSWV)和南方番茄病毒(southern tomato virus,STV)的特异性引物分别从样品cDNA中扩增出777 bp和681 bp的目的产物,通过对产物测序并进行BLAST比对和系统发育分析,发现宁夏银川地区番茄上的TSWV与西班牙辣椒上的TSWV分离物聚在同一分支上,进化关系最近;STV分离物与法国、巴基斯坦、哥伦比亚番茄上的STV分离物的进化关系最近,与其他地区的STV分离物关系较远,表明宁夏银川地区的番茄被TSWV和STV复合侵染。     

侵染鸢尾的番茄斑萎病毒鉴定

2020年,在云南中医药大学校园发现叶片表现褪绿斑点、坏死环斑症状的鸢尾植株。用电子显微镜在病叶汁液中观察到典型的正番茄斑萎病毒属(Orthotospovirus)病毒粒子。在用感病叶片汁液摩擦接种的普通烟、本生烟上观察到系统坏死斑症状,中国辣椒(PI152225)的接种叶片出现局部坏死斑,但无系统侵染。为进一步明确病原,用RT-PCR扩增番茄斑萎病毒(tomato spotted wilt orthotospovirus,TSWV)的NSs和N基因,序列测定发现,分别与分离自云南番茄和旱金莲的TSWV分离物具有最高的氨基酸序列相似性(99.79%和100%)。结果表明引起鸢尾褪绿斑点病的病原是番茄斑萎病毒。     

内蒙古赤峰地区番茄斑萎病毒的鉴定

利用番茄斑萎病毒(tomato spotted wilt orthotospovirus,TSWV)通用引物及自行设计合成引物对采集自内蒙古自治区赤峰市部分地区的番茄病毒病样品进行了RT-PCR检测及序列测定;进一步利用特异性引物对包含N基因在内核苷酸序列进行扩增、克隆和测序,并对包含N基因的914 nt序列进行系统进化分析。结果表明,在采集的16个表现TSWV症状和2个未表现典型症状的果实样品中均检测到TSWV;TSWV内蒙古番茄分离物与中国云南、江苏等地的分离物亲缘关系最近。用表现TSWV症状的番茄果实汁液摩擦接种辣椒叶片,出现叶片褪绿、植株矮小等症状,并经RT-PCR分析检测到TSWV。本研究证实在内蒙古地区有TSWV在番茄上发生危害。     

李宝聚博士诊病手记(九十三) 番茄斑萎病毒病在宁夏的发现与防治

正番茄斑萎病最早于1915年在澳大利亚被发现,1930年确定由病毒引起,并将引发该病的病原命名为番茄斑萎病毒(Tomato spotted wilt virus,TSWV)(Samueletal.,1930)。随后欧美许多国家也报道了番茄斑萎病毒的发生和危害,其中在19世纪八九十年代该病曾暴发流行,给美国夏威夷、意大利等地的番茄、莴苣等作物生产造成毁灭性危害(Soleretal.,2003)。番茄斑萎病毒属于布尼亚     

大田栽植中番茄斑萎病的综合管理

番茄斑萎病(TSW)起源于澳洲，由番茄斑萎病毒(TSWV)引起的，TSWV到目前为止已经侵染了超过1000种的植物种类。     

广东辣椒上首次检测到西瓜银斑驳病毒

2014 年在广东辣椒产区发现疑似番茄斑萎病毒属（Tospovirus）病毒侵染引起的辣椒褪绿坏死环斑症状。Dot-ELISA 检测显示,该病毒分离物与番茄斑萎病毒（Tomato spotted wilt virus,TSWV）单克隆抗体不产生血清学反应,表明该病毒不属于TSWV。利用Tospovirus 属病毒通用引物gL3637/gL4435C进行RT-PCR 检测,可以从所有辣椒病样总RNA 中扩增出预期大小约800 bp 的目的片段。基因克隆与序列分析表明,该片段序列与西瓜银斑驳病毒（Watermelon silver mottle virus,WSMoV）中国广州分离物的同源性最高,为97.5%。系统进化分析也显示,该病毒分离物与WSMoV 各分离物亲缘关系最近,并聚类在一个分支。因此,侵染广东辣椒的病毒分离物为WSMoV。     

陕西杨凌地区番茄斑萎病毒外壳蛋白基因的克隆与分析

番茄斑萎病毒（Tomato spotted wilt virus，TSWV）是世界上危害最大的十大病毒之一，为了确定陕西杨凌地区的番茄感染TSWV 情况，采集该地区4 份疑似感染TSWV 的番茄样品，通过表型观察以及PCR 分子鉴定进行分析。结果显示，2 份材料扩增出234 bp 的特异性条带，表明样品感染了TSWV。采用同源克隆方法获得了杨凌地区757 bp TSWV 的外壳蛋白基因（CP），其与西班牙TSWV 分离物同源性最高，为99%，而与昆明的TSWV 分离物亲缘关系较远。     

甘肃省辣椒斑萎病毒的检测

在甘肃省兰州、白银、庆阳采集发病症状表现为植株矮化、叶片黄化、生长点坏死的辣椒病样，采用RT-PCR法和简易试纸条进行病毒检测。结果表明：通过RT-PCR法共检测出了6种病毒：辣椒环斑病毒（ChiRSV）、辣椒轻斑驳病毒（PMMoV）、辣椒斑驳病毒（PepMoV）、辣椒叶脉黄化病毒（PeVYV）、烟草轻绿花叶病毒（TMGMV）、番茄斑萎病毒（TSWV）；且在同一个病样上，存在多种病毒复合侵染的状况。利用简易试纸条进行检测，只检测出了TSWV，但检出率较高。表明，甘肃地区辣椒生产上侵染的病毒种类多，TSWV的发生越来越普遍和严重。     

辣椒抗番茄斑萎病毒病研究进展及展望

番茄斑萎病毒（Tomato spotted wilt virus，TSWV）自19 世纪发现以来，在全世界各地蔓延，对多种作物造成重大经济损失。本文以辣椒为例，从TSWV 的发生与分布、病害症状检测、传播方式、防治方法、抗TSWV 育种及展望等6 个方面对国内外辣椒TSWV 的研究现状进行综述。     

番茄自交系YNAU335对番茄斑萎病毒抗性的鉴定

番茄斑萎病毒(Tomato spotted wilt virus,TSWV)已成为近年来危害番茄生产的重要病害,鉴定和选育抗病品种是防治TSWV的有效途径。选取自主培育和引进的番茄品种(系),经过连续3a的大棚蓟马传毒和光照培养箱人工接种试验,鉴定番茄品种(系)对TSWV的抗性。结果表明,番茄自交系YNAU335对TSWV表现为免疫,其他品种全部表现为感病,而且在YNAU335人工接种和大田蓟马传毒叶片中并未克隆出TSWV核衣壳蛋白基因和小片段RNA3′端序列,而在其他感病品种(系)中均克隆出这2段序列。研究结果初步确定番茄自交系YNAU335为TSWV抗病品系,可作为TSWV抗病育种的番茄资源。     

番茄斑萎病毒TSWV 的鉴定及抗病种质的筛选

 在北京顺义地区番茄栽培温室中随机抽取了15份疑似感染番茄斑萎病毒（TSWV）的植株叶片和果实,利用TSWV试剂盒进行DAS-ELISA检测,结果均为阳性,表明其感染了TSWV。利用来自秘鲁番茄的抗TSWV基因Sw-5的共显性SCAR标记,对442份番茄材料进行分析,筛选出24份含有Sw-5的材料,其中4份为野生番茄,1份为杂交种,16份为高代育种自交系,3份为野生潘那利番茄渐渗系。4份野生番茄综合农艺性状较差,如果实小、产量低、品质和风味差等,不能直接应用于育种;其余20份含Sw-5的材料综合农艺性状较好,可作为番茄抗TSWV的育种材料。     

警惕番茄斑萎病毒病在陕西流行

正番茄斑萎病毒(Tomato spotted wilt virus,TSWV)最早于1915年在澳大利亚被发现,目前已成为全世界10种危害性最大的植物病毒之一。其寄主范围非常广泛,能够侵染84个科1090种植物,烟草、花生、辣椒、莴苣、茄子等经济作物均可被感染。番茄斑萎病毒广泛分布于欧洲、北美、南美、亚洲和大洋洲等多个国家和地区,热带、亚热带、温带地区均有发生。自1989年在广州出现以来,已在云南、贵州、四川、广东、广西、山东、河南、河北、北京、天津、宁夏等番茄主产区大面积发生,成为继番茄黄     

青海辣椒上番茄斑萎病毒检测及鉴定

在对青海辣椒上的病毒病进行调查时发现疑似番茄斑萎病毒（Tomato spotted wilt tospovirus，TSWV）病样，表现为环斑、坏死等症状。为明确其感染的病毒种类，对其进行了检测和鉴定。对Tospovirus的通用引物进行检测时发现采集的49份样品中有14份样品扩增到了目的条带，序列测定结果显示其与TSWV的同源性最高；同时利用TSWV特异性引物对阳性样品进行检测，结果全部为阳性；基于克隆的NSs基因序列聚类分析结果显示其属于TSWV的1个分离物，与中国云南、黑龙江等地分离物相对近缘，而与国外其他分离物相对远缘。在分子鉴定的基础上，利用TSWV的抗体通过Western blot进一步对样品进行了检测，结果也证明采集样品中存在TSWV的感染。这些结果表明青海辣椒上存在TSWV的感染。     

番茄斑萎病毒病研究进展

番茄斑萎病毒（Tomato spotted wilt virus,TSWV）于1915年在澳大利亚被首次报道,现已蔓延至世界各地,自1989年在广州出现以来,已在云南、贵州、四川、广东、广西、山东、河南、河北、北京、天津、陕西、宁夏等番茄主产区大面积发生,成为继番茄黄化曲叶病毒病之后的又一种重要病害。对番茄斑萎病毒的基因组结构特征特性、危害情况以及番茄抗性资源的鉴定等研究进行综述,以期为抗病育种、抗病基因的分子标记开发、基因定位以及克隆等技术提供参考。     

番茄斑萎病毒病

由蓟马媒介引起的番茄斑萎病毒──Tomato spotted wilt virus(TSWV),1919年首次在澳洲番茄上发生以来,世界各地相继发生,在各种栽培植物上产生严重坏死斑而成为重要的病毒病害。在日本,1970年冈山县大丽花上发生此病为栽培植物的首次记录,现在各地都有发生。番茄最初发现于1972年奈良县的露地栽培上,此后有些地区每年发生,成为重要病害。此外,本病在神奈川县的番茄大棚,大阪府的番茄露地栽培亦有发生。甜椒,1975年兵库县在露地栽培上发生,此后,茨城县大棚里严重发生。在其他作物上,德岛县的射干,冲绳县的烟草上亦有发生。本病在日本各地…     

重庆辣椒上番茄斑萎病毒的血清学检测及分子鉴定

为明确重庆地区辣椒上番茄斑萎病毒(Tomato spotted wilt virus,TSWV)的发生情况及其外壳蛋白基因(cp)序列变异特征,采用斑点免疫杂交法(Dot-ELISA)和反转录PCR(RT-PCR)技术对采自重庆的298份辣椒病毒病样品进行了检测和分子鉴定。Dot-ELISA检测结果表明,有40份辣椒样品检测到TSWV,检出率为13.42%。通过电子显微镜在TSWV检测呈阳性的样品中观察到具包膜的球状病毒粒体。设计扩增TSWV cp的引物,选取6个TSWV阳性样品进行RT-PCR扩增,均扩增到大小约750 bp的目的片段。序列分析表明,重庆辣椒分离物TSWV-CQ(KX611497)与已报道的22个TSWV分离物cp基因的核苷酸相似性为96.1%~99.4%,与已报道的TSWV中国分离物亲缘关系较近,表现出明显的地理相关性。     

云南澳洲坚果苗木感染番茄斑萎病毒属病毒初报

 在云南省临沧市永德县海拔约800 m 的澳洲坚果（Macadamia sp.）种苗繁育基地发现叶片 褪绿、黄化、叶脉间呈现近似圆形或不规则褐色枯斑的植株。为了确认植株病因,采集典型病株,应用 电子显微镜负染色法、超薄切片和DAS-ELISA 进行检测,在澳洲坚果苗木病叶分离物Maca-LC 的粗汁 液和病叶超薄切片中均观察到有类似番茄斑萎病毒属（Tospovirus）病毒粒体。该病毒粒子为球形,直径 80 ~ 85 nm。进一步应用DAS-ELISA 方法鉴定,病叶与Tospovirus 的西瓜银色斑驳病毒（Watermelon silver mottle virus,WSMoV）/花生芽坏死病毒（Groundnut bud necrosis virus,GBNV）复合抗血清呈阳性反应。 通过病症典型症状、病毒形态学观察及血清学方法检测表明,侵染云南澳洲坚果种苗的病毒分离物 Maca-LC 为番茄斑萎病毒属Tospovirus 病毒。     

番茄黑环病毒液相芯片快速检测方法的建立

为建立番茄黑环病毒(Tomato black ring virus,TBRV)的液相芯片检测技术,对GenBank中的TBRV核苷酸序列进行分析,设计其特异性探针并用生物素标记。探针偶联荧光编码微球后与TBRV的RT-PCR产物进行杂交,用液相芯片检测仪检测荧光信号。结果表明:建立的方法具有良好的特异性,能够有效区分侵染马铃薯的TBRV、马铃薯纺锤块茎类病毒(PSTVd)、马铃薯A病毒(PVA)及番茄斑萎病毒(TSWV);检测灵敏度约为1pg/μL总RNA,与常规RT-PCR灵敏度相当。实际样品检测结果表明该方法可用于TBRV的日常检测。     

云南省蝴蝶兰上凤仙花坏死斑病毒的鉴定

2008 年对云南省主要花卉基地进行调查,获得症状表现为环斑、坏死,疑似番茄斑萎病毒属（Tospovirus）病毒的蝴蝶兰样品。应用生物测定,结合现代电镜技术、免疫试纸条检测技术初步确定为番茄斑萎病毒属的凤仙花坏死斑病毒（Impaliens necrotic spot virus,INSV）,通过设计的4 对引物进行RT-PCR扩增和测序,获得核壳体蛋白（Nucleocapsid protein）基因核酸长度为886 nts,RNA M 编码的非结构蛋白（Nonstructure protein,NSm）基因核酸长度为681 nts,依赖于RNA 的RNA 聚合酶（RdRp）基因核酸长度为1 048 nts,测序结果在NCBI BLAST 网络数据库中比对,同时应用生物信息软件DNAman 比对,其与INSV的同源性都达90%以上,都证明分离到的病原物为凤仙花坏死斑病毒（INSV）。