3种生长素对蛹虫草液体发酵的影响

研究了3种生长素,吲哚丁酸(IBA)、α-萘乙酸(NAA)、2,4-D在不同浓度下对蛹虫草液体培养的影响。通过测定不同浓度下蛹虫草生物量以及胞内、胞外多糖的含量,确定了3种生长素使用的最佳质量浓度,并对各浓度下蛹虫草的生长情况进行了分析与讨论。结果表明,在生物量方面,IBA的质量浓度为3 mg·L~(-1)时达到最大为21.50 g,比对照组提高了11.30%。NAA的质量浓度为1 mg·L~(-1)时达到最大为16.20 g,比对照组提高了32.80%。2,4-D对蛹虫草生物量的累积起抑制作用。在胞外多糖方面,IBA和2,4-D均起抑制作用,NAA在1 mg·L~(-1)时起抑制作用,但其质量浓度为5 mg·L~(-1)时,胞外多糖累积量达到最大为85.60 mg,比对照组提高了80.30%。在胞内多糖方面,3种生长素均起促进作用。当加入质量浓度为1 mg·L~(-1)的NAA时,胞内多糖累积量达到最大为117.93 mg,比对照组提高了275.36%。     

蛹虫草菌丝体多糖体外抗氧化活性研究

通过摇瓶液体发酵获得蛹虫草菌丝体,采用脱脂、水提醇沉、去蛋白、脱色素、透析和冷冻干燥等一系列手段提取蛹虫草菌丝体多糖。利用羟基自由基(·OH)、超氧阴离子自由基(O2-·)和1,1—二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)清除实验,评价蛹虫草菌丝体多糖体外抗氧化活性。结果显示,蛹虫草菌丝体多糖对3种自由基均表现出较强的清除效果,其中对DPPH的清除力相对最强。随着浓度上升,其抑制自由基的效果均增强,呈现剂量正相关。该多糖对3种不同自由基抑制作用的IC50值分别为7.01 mg·m L-1、19.90 mg·m L-1和3.51 mg·m L-1。蛹虫草菌丝体多糖表现出良好的体外抗氧化活性。     

蛹虫草对金属锌的耐受性与富集特征

以蛹虫草为试材,通过在培养基中添加不同浓度的锌,利用罗丹明B分光光度法测定菌丝体和子实体锌含量,蒽酮-硫酸法和DNS法测定子实体多糖和还原糖含量,探究了锌对蛹虫草菌丝体、子实体生长和生理活性的影响,以期为富锌蛹虫草培育提供参考依据。结果表明:锌对蛹虫草菌丝体、子实体均有一定的影响,适量浓度促进生长,过高则抑制生长,最适合蛹虫草生长的培养基锌浓度为678 mg·kg^-1,该浓度下蛹虫草子实体生长良好无退化现象,干质量出现最大值为3.56 g,多糖含量为7.32%,锌富集率达6.45%。     

蛹虫草深层发酵产虫草素培养基的优化

以蛹虫草(Cordyceps militaris(L.)Link)NS-810为菌种,通过对接种量的考察,探索不同孢子浓度对蛹虫草液体一级种制作效果的影响;通过单次单因子试验和正交实验,优化深层发酵产虫草素的最佳培养基,筛选制备蛹虫草液体一级种和液体发酵生产虫草素的最佳工艺。结果表明:孢子浓度3.0×10~8 cfu·mL~(-1)时制作的母种最适合作为蛹虫草菌种扩大培养中的一级种子液;深层发酵的最佳培养基配方为葡萄糖25g·L~(-1)、土豆100g·L~(-1)、鱼蛋白胨18g·L~(-1)、(NH_4)_2SO_40.8g·L~(-1)、KH_2PO_41.0g·L~(-1)、MgSO_4·7H_2O 0.5g·L~(-1)、蚕蛹粉5.0g·L~(-1)、维生素B118mg·L~(-1)、水1L。优化后虫草素的总产量为1 144.31mg·L~(-1),较基础培养基提高了1.46倍。分别以价格低廉葡萄糖和鱼蛋白胨作为发酵培养基的碳源和有机氮源,利于蛹虫草产业化发酵生产虫草素。     

氮源和无机盐对蛹虫草子座产量及虫草素和腺苷的影响

以小麦为主要栽培基质,通过添加不同的氮源和无机盐,选用优质蛹虫草菌株CM-16进行人工培养,探索这2个因素对蛹虫草子座产量及虫草素和腺苷的影响。结果表明:栽培过程中选用6g·L~(-1)的蛋白胨作为最佳氮源,子座干样质量、虫草素和腺苷的生成量均较高,分别为43.1g·盒~(-1)、3.95mg·g-1和2.35mg·g~(-1)。无机盐则选择1.0mg·L~(-1)的硫酸亚铁最为合适,此时子座干样质量、虫草素和腺苷的生成量分别为48.8g·盒~(-1)、4.98mg·g~(-1)和2.10mg·g~(-1)。     

蛹虫草产量及主要活性物质的影响因素研究

以提高蛹虫草子实体产量、活性物质含量为研究目的。以小麦为基本培养基固体培养蛹虫草子实体,采用单因素、二因素试验研究碳源、氮源和菌种对蛹虫草实体产量、活性物质含量的影响。产量单因素实验结果表明,每瓶添加1 g蚕蛹粉、营养液中白砂糖浓度为20 g·L~(-1)的培养基培养子实体产量最高;但不同水平的蚕蛹粉、黄豆粉对子实体产量影响差异不显著。二因素实验结果表明,当培养基营养液中白砂糖浓度为20 g·L~(-1),蚕蛹粉添加量为2 g·瓶~(-1)时,子实体产量最高;碳源、氮源及碳源和氮源的互作对蛹虫草的产量有极显著的影响。活性物质单因素实验结果表明,培养基营养液中蔗糖浓度为10 g·L~(-1)时腺苷和虫草素含量最高;每瓶培养基中添加1 g土豆粉时,子实体多糖含量最高,与其他营养添加物质有显著差异;不同菌种对产量和主要活性物质含量的影响差异显著。     

利用阶段pH控制提高灵芝深层发酵合成三萜能力的研究

采用3 L发酵罐考察不同pH发酵条件对灵芝(Ganoderma lucidum)菌丝体生长和灵芝胞内三萜合成的影响。结果表明,在pH4.5条件下,菌丝体干重和胞内三萜含量均最高,分别为12.31 g·L~(-1)和237.91 mg·L~(-1)。根据不同pH条件下,灵芝发酵过程中菌丝体的比生长速率、三萜比合成速率的变化,提出四阶段pH控制策略:0～26 h pH自然,26～36 h pH4.0,36～81 h pH4.5,81～168 h pH5.0,在此条件下,在3 L发酵罐中发酵,灵芝的菌丝体干重为14.18 g·L~(-1),比对照(pH自然)和pH4.5时分别提高59.15%和15.19%,灵芝胞内三萜含量279.59 mg·L~(-1),比对照和pH4.5时分别提高47.72%和17.52%;在50 L发酵罐中进行发酵验证,菌丝体干重和灵芝胞内三萜含量分别为13.54 g·L~(-1)和256.97 mg·L~(-1)。本研究的四阶段pH控制策略可较大幅度提高灵芝胞内三萜产量,且该发酵工艺操作简单易行,可为利用规模化深层发酵技术生产灵芝胞内三萜提供有益的参考。     

蛹虫草、白化蛹虫草菌丝硒耐受性比较研究

目的:研究亚硒酸钠对蛹虫草及白化蛹虫草菌丝生长影响。方法:CM-1518、白化蛹虫草CM-Y1518为试验蛹虫草菌株,研究亚硒酸钠(0～700 mg/L)对蛹虫草及白化蛹虫草菌丝长势、菌丝平均长速及菌落形态影响。结果:蛹虫草菌丝硒耐受性高于白化蛹虫草,当培养基中亚硒酸钠质量浓度不超过650 mg/L时,蛹虫草均可生长,硒耐受极值为700 mg/L;当亚硒酸钠质量浓度不超过200 mg/L时,白化蛹虫草均可生长,硒耐受极值为250 mg/L。     

光照对灵芝液体发酵胞外多糖合成的影响

以灵芝为试验材料,采用干质量法测定生物量,苯酚-硫酸法测定胞外多糖产量,研究了单色LED光照处理对灵芝菌丝体液体发酵合成胞外多糖的影响。结果表明:在80μmol·m~(-2)·s~(-1) LED光照12h条件下,不同LED光照处理均能促进细胞生长和胞外多糖合成,其中白光LED最有利于细胞生长,蓝光LED最有利于胞外多糖合成。综合考虑生物量和胞外多糖产量,以100μmol·m~(-2)·s~(-1)蓝光LED光照10h效果最佳,生物量和胞外多糖产量分别为15.16g·L~(-1)和3.102g·L~(-1),比黑暗处理提高了45.91%和109.74%。光照对灵芝细胞生长和胞外多糖合成具有调控作用,为灵芝液体发酵合成胞外多糖的高效定向生产提供指导。     

添加氧化铝对灰树花菌丝体生长及多糖产量的影响

考察添加不同浓度的氧化铝(粒径为200~300目)对灰树花(Grifola frondosa)发酵菌丝体生长及多糖(胞内和胞外粗多糖)产量的影响。结果表明,在试验添加范围内,灰树花菌球直径随氧化铝添加浓度的增加而显著变小,当添加氧化铝浓度为20 g/L时,游离菌丝体明显增多,且菌球主要表现为S型(D<0.5 cm,D：菌体当量直径,与对象具有相等面积的圆形的直径),其中L(D≥1.5 cm)、M(0.5 cm≤ D<1.5 cm)和 S 型菌丝体的比例分别为4.9%、24.3%和70.8%;添加3 g/L氧化铝时灰树花菌丝体生物量最高,达到5.81 g/L,比空白组提高了2.7倍;添加20 g/L氧化铝时灰树花胞外多糖产量达到最大,为8.46 g/L,为空白组的1.7倍左右,而菌丝体多糖产量以添加0.1 g/L氧化铝时最高,为65.6 mg/g。     

促进铁皮石斛原球茎中多糖和生物碱积累研究

以铁皮石斛原球茎为试材,为优化原球茎培养和提高有效物质的积累,研究了培养液中不同pH对原球茎生物量及有效物质含量的影响。同时,在培养初期向培养液中分别添加不同浓度的诱导子(壳聚糖、普鲁兰多糖)以及2种诱导子的混合液,以未加入诱导子的培养基作为对照,对原球茎生物量及有效物质含量进行了测定。结果表明:当培养液pH为5.8时,原球茎生长最好,且多糖(4.93g·L~(-1))和生物碱(3.15mg·L~(-1))生产量达到最高。30mg·L~(-1)壳聚糖和200mg·L~(-1)普鲁兰多糖单独处理,有利于原球茎中多糖和生物碱的积累。但当壳聚糖浓度为15mg·L~(-1),普鲁兰多糖浓度为100mg·L~(-1)混合处理后,发现原球茎中多糖和生物碱的积累量明显提高,多糖含量达到322.8mg·g-1 DW,生产量达到6.75g·L~(-1),而生物碱含量达到242.7μg·g-1 DW,生产量达到5.07mg·L~(-1)。因此,通过调节培养条件可有效地促进铁皮石斛原球茎中多糖和生物碱积累,为铁皮石斛产品生产提供了一种新的材料。     

硒和钙对蛹虫草活性物质含量的影响

向培养液中分别添加不同浓度的亚硒酸钠、氯化钙,用液体振荡培养法培养蛹虫草菌丝体,用HPLC法测定虫草素与腺苷含量,用苯酚-硫酸法测定多糖含量,用高碘酸钠比色法测定虫草酸含量.以研究2种微量元素对蛹虫草菌丝体中虫草素、腺苷、多糖和虫草酸含量的影响.结果表明:向培养液中添加适量的硒或钙,可显著提高蛹虫活性物质含量.添加15 mg/L亚硒酸钠,虫草素和虫草酸含量比对照组分别提高了29.0％和34.9％;添加16 mg/L氯化钙,虫草素含量比对照提高24.05％.     

八棱海棠高效再生体系的建立及潮霉素的抗性试验

以八棱海棠子叶为外植体,比较了不同浓度植物激素、不同激素组合、不同暗培养时间及不同浓度潮霉素对八棱海棠再生体系的影响,建立了八棱海棠高效再生体系,筛选并分析了潮霉素在八棱海棠遗传转化中的适宜浓度。结果表明:诱导子叶愈伤的最佳培养基为Sc+2.0 mg·L~(-1) TDZ+0.2 mg·L~(-1) NAA+0.5 mg·L~(-1) GA_3,芽再生的最佳培养基为Sc+2.0 mg·L~(-1) TDZ+0.2 mg·L~(-1) NAA,暗培养最佳时间为10 d,生根最佳培养基为1/2MS+0.25 mg·L~(-1) IBA。八棱海棠在整个再生过程中均对潮霉素敏感,在潮霉素浓度为2.0 mg·L~(-1)的愈伤诱导培养基上,外植体的愈伤诱导率仅为23.33%,分化率仅为9.88%;当潮霉素浓度为4.0 mg·L~(-1)时,愈伤诱导率下降为13.00%,而且愈伤不分化,随着培养时间延长,愈伤组织变得更加致密,之后变褐死亡。在诱导生根培养基上添加3.0 mg·L~(-1)潮霉素,生根率仅为3.52%,大部分外植体再生芽底部只会诱导出愈伤组织,没有根原基形成。八棱海棠子叶愈伤诱导及分化的潮霉素筛选临界浓度为2.0～4.0 mg·L~(-1),生根时潮霉素筛选浓度为2.0～3.0 mg·L~(-1)。     

灵芝菌丝体速溶粉的体外抗氧化作用

试验研究灵芝菌丝体速溶粉的体外抗氧化作用,为其功能定位提供参考。主要对灵芝菌丝体速溶粉清除DPPH·、·OH、O_2~-·的能力,总还原力以及抑制脂质过氧化的能力进行测定,并检测了灵芝菌丝体中的多糖含量。结果表明,灵芝菌丝体速溶粉中的灵芝多糖含量为4.89%。随着灵芝菌丝体速溶粉浓度的增加,清除各自由基的清除率、总还原力和抑制脂质过氧化的抑制率均逐渐增大;清除DPPH·、·OH、O_2~-·的IC_(50)值分别为0.912 mg·mL~(-1)、3.173 mg·mL~(-1)、0.863 mg·mL~(-1),抑制脂质过氧化作用的IC50值为6.706 mg·mL~(-1)。说明灵芝菌丝体速溶粉有较强的抗氧化活性。     

蛹虫草菌丝体循环富硒法的建立及其硒多糖抑癌作用初探

研究富硒蛹虫草菌丝体循环富硒作用及该法获取的硒多糖对人宫颈癌细胞Hela的抑制作用.采用循环富硒法获得蛹虫草富硒菌丝体并制备硒多糖,经硒定量和多糖含量测定后采用MTT.法检测硒多糖与正常蛹虫草多糖(12.5、25、50、100、200μg/mL)作用Hela细胞72 h后细胞存活率的变化.循环富硒法可有效促进蛹虫草菌丝体对硒的富集,硒含量为680.2μg/g,多糖含量为47.4%;硒多糖与正常蛹虫草多糖(100μg/mL)对Hela细胞的抑制率分别为91.87%和77.98%.其IC50分别为18.5μg/mL和48.5μg/mL.循环富硒法可有效制备富硒蛹虫草菌丝体和硒多糖,循环富硒法获取的硒多糖能有效的抑制Hela细胞的增殖.     

鲜蛹虫草与干蛹虫草抗氧化活性和活性物质差异研究

为阐明鲜蛹虫草和干蛹虫草抗氧化活性差异,分别对鲜蛹虫草和干蛹虫草的DPPH自由基清除能力、铜离子还原能力、羟基自由基清除能力和Trolox等效抗氧化活性进行研究,并对其主要活性物质多糖、腺苷、虫草素、总酚、总黄酮和超氧化物歧化酶进行了分析。结果表明,鲜蛹虫草对DPPH自由基清除能力、铜离子还原能力、羟基自由基清除能力均高于干蛹虫草;鲜蛹虫草中腺苷和虫草素含量分别为1.35 mg·g~(-1)和6.71 mg·g~(-1),与干蛹虫草相比差异不显著。鲜蛹虫草中多糖、总酚和总黄酮含量分别为57.4 mg·g~(-1)、87.56 mg·g~(-1)和182.24mg·g~(-1),超氧化物歧化酶总活力为50 265.5 U,均高于其干品。Trolox等效抗氧化活性分析表明,鲜蛹虫草中多糖、超氧化物歧化酶活性、总酚和总黄酮均高于其干品。因此鲜蛹虫草较干品具有更优的开发价值。     

蛋白桑叶片再生体系的建立及对草丁膦敏感性测定

以蛋白桑的幼嫩叶片为外植体,以MS为基本培养基,采用正交实验设计,研究不同浓度的植物生长调节剂对蛋白桑植株再生的影响。结果表明:叶片诱导愈伤组织的最佳培养基为MS+TDZ 1.0mg·L~(-1)+NAA 0.1mg·L~(-1);最佳分化培养基为MS+TDZ 0.2mg·L~(-1)+NAA 0.09mg·L~(-1),分化率为21.65%;培养基1/2MS+PVP 0.2g·L~(-1)+NAA 0.5mg·L~(-1)生根率最高,达到66.70%;对草丁膦的敏感性试验中,草丁膦浓度0.04mg·L~(-1)为蛋白桑叶片半致死浓度,草丁膦浓度0.05mg·L~(-1)对蛋白桑叶片的致死率为75.00%,草丁膦浓度0.07mg·L~(-1)的致死率为100.00%。     

几种药用真菌粗多糖降血糖作用研究

以四氧嘧啶糖尿病小鼠为动物模型,对虫草属(Cordyceps)、针层孔菌属(Phellinus)和灵芝属(Ganoderma)的几种药用真菌粗多糖降血糖作用进行研究.试验结果表明,戴氏虫草(C.taii)与勿忘虫草(C.memorabilis)菌丝体粗多糖降血糖效果较好,其高低两个剂量组(1 g/kg和0.5 g/kg)的血糖和模型对照组比较都表现极显著差异;赤芝(G.lucidum)和蛹虫草(C.militaris)子实体粗多糖降血糖作用稍差,与模型对照组相比,其高剂量组降血糖作用表现极显著差异,低剂量组的降血糖作用表现显著差异;针层孔菌(P.sp)菌丝体粗多糖的降血糖作用较弱,使用低剂量时血糖和模型对照组比较无差异,高剂量时血糖和模型对照组比较有显著差异.     

采前CPPU处理对采后草莓品质及残留量的影响

以"甜查理"草莓果实为试材,采用盛花后喷施不同浓度(0.0、2.5、5.0、10.0、20.0mg·L~(-1))CPPU溶液,研究了CPPU处理对成熟草莓残留量及草莓单果质量、糖、酸、维生素C、单宁、水解氨基酸等品质的影响。结果表明:施用CPPU后,草莓单果质量和固酸比均高于对照(CK),5.0mg·L~(-1) CPPU溶液处理时达到峰值;草莓可滴定酸含量均低于对照,5.0mg·L~(-1)CPPU溶液处理达到最低值,且与对照差异显著(P0.05);草莓可溶性总糖、果糖、葡萄糖、维生素C含量的变化趋势均为低浓度CPPU处理(5.0mg·L~(-1)和2.5mg·L~(-1))会增加其含量,高浓度会降低其含量;单宁含量于5.0mg·L~(-1)处理达到最低值,其变化趋势与维生素C相反;水解氨基酸总量呈下降趋势,必需氨基酸含量略有升高。说明施用低浓度CPPU(不超过5.0mg·L~(-1))可以提高草莓果实的风味口感和部分营养品质,而高浓度会降低草莓果实的风味和品质;所有处理中仅有20.0mg·L~(-1)的CPPU处理有残留检出,且含量低于最高残留限量0.03mg·kg~(-1)(美国EPA),表明CPPU施用浓度低于20.0mg·L~(-1)处理草莓安全性较高。     

金针菇、杏鲍菇菌丝对四种重金属耐受和富集特性的研究

以金针菇和杏鲍菇菌为试材,在平板培养基和液体发酵培养基中添加不同浓度梯度Pb、Cd、As、Hg重金属,通过测量菌丝日均生长速度、菌丝体干质量、菌丝体及发酵液中重金属含量等指标,进行重金属富集模型建模,研究不同菌类对不同种类重金属耐受及富集特征,以期为菌类富集重金属机理提供参考依据。结果表明:重金属Pb、Cd、As、Hg对菌丝生长及菌丝球量表现为低浓度(低于1mg·L~(-1))促进、高浓度(高于5mg·L~(-1))抑制,适宜浓度(1～5mg·L~(-1)浓度)的重金属Pb、Cd、As对菌丝的生长有一个明显前期抑制后期菌丝恢复正常生长的现象。金针菇和杏鲍菇菌丝体均表现为对重金属Cd和Pb高度富集,最大富集量分别达到Cd 619、424mg·kg~(-1) DW以及Pb 449、844mg·kg~(-1) DW,对重金属As和Hg富集量较小,最大富集量分别为As 49、21 mg·kg~(-1) DW以及Hg 44、40mg·kg~(-1) DW。不同菌类菌丝体对同一种重金属的富集饱和点不同,如金针菇菌丝体对Pb的富集饱和点是452 mg·kg~(-1) DW,杏鲍菇菌丝体对Pb的富集饱和点是902mg·kg~(-1) DW。同一菌类对不同重金属的富集饱和点差异较大,如杏鲍菇对Cd的富集饱和点为429mg·kg~(-1) DW,对As的富集饱和点为22.4mg·kg~(-1) DW。