盾叶薯蓣胚乳的组织培养

分别以盾叶薯蓣成熟种子和未成熟种子的胚乳为材料进行组织培养.结果表明:愈伤组织诱导培养中,无论是成熟胚乳还是未成熟培乳,采用MS 6-BA 1.0 mg·L-1 NAA 0.1mg·L-1培养基诱导效果最佳,诱导率分别达到83.3%和90.0%;以1.0 mg·L-1 6-BA 0.2 mg·L-1NAA MS培养基进行继代培养可达到比较理想效果;0.1 mg·L-1 6-BA 0.05 mg·L-1 NAA 蔗糖3% 500 mg·L-1 CH MS培养基诱导芽的分化,效果最好,成熟胚乳和未成熟胚乳芽诱导率分别为80.0%和90.0%.用1/2MS培养基进行生根培养时,ABT生根粉溶液处理的生根效果,在浓度200～300 mg/L范围内没有显著差异,成熟胚乳再生植株生根率为76.6%,未成熟胚乳再生植株为83.3%.     

平邑甜茶叶片不定芽再生及NO的效应

以平邑甜茶继代组培苗叶片为材料,研究了一氧化氮(NO)供体--硝普钠(SNP)、6-BA、NAA、2,4-D、ZT和光暗条件对平邑甜茶叶片不定芽再生的影响.结果表明,6-BA、ZT、NAA和暗培养均有利于叶片不定芽的分化;在含有生长素和细胞分裂素的MS培养基中,加入6.0和12.0 mg·L-1的SNP可极显著诱导叶片不定芽的分化;以MS 6.0 mg·L-1 BA 0.5 mg·L-1 NAA 0.2 mg·L-1 ZT 6.0 mg·L-1 SNP为培养基,暗培养15 d,叶片不定芽分化效果最好,再生率达67.8%.     

薄皮甜瓜离体再生体系的优化

通过器官发生途径诱导形成不定芽,建立薄皮甜瓜‘IVF05’植株再生体系,探讨不同外植体及不同的激素组合对不定芽再生的影响。结果表明,子叶近胚轴端外植体的不定芽再生率为90.00%,子叶节的再生率为85.00%,子叶远胚轴端外植体的再生率为31.43%,下胚轴的再生率为0,子叶近胚轴端是‘IVF05’不定芽分化的理想的外植体。不定芽诱导中最适宜的培养基为MS+ABA 0.5 mg·L-1+6-BA 1.0 mg·L-1,在此培养基上产生的愈伤较少,能正常分化的不定芽较多,不定芽的生长较快。在MS+6-BA 0.05 mg·L-1的不定芽伸长培养基上,分化的不定芽能够伸长长大。在MS+IAA 0.2 mg·L-1的生根培养基上无根苗容易生根。从外植体培养到获得完整再生植株需50⁶0 d。     

翠菊‘花束绯红’叶片的植株再生体系建立

以翠菊‘花束绯红’无菌苗为材料,研究了植物生长调节剂浓度及组合、光照条件、不同附加物对叶片及其愈伤组织再生植株的影响。结果表明:(1)在光照培养条件下,诱导翠菊叶片不定芽形成的最适培养基为MS+6-BA3.0mg·L-1+IBA1.0mg·L-1,诱导率为56.7%,平均不定芽数为3.3;(2)黑暗培养不利于叶片不定芽的分化,但促进叶片愈伤组织的形成;(3)培养基中分别添加脯氨酸、水解酪蛋白和NH4NO3等均能明显促进愈伤组织不定芽的诱导,最适培养基为MS+6-BA1.0mg·L-1+IBA0.1mg·L-1+脯氨酸300mg·L-1,诱导率为82.8%,平均不定芽数为4.5;(4)不定芽移到幼苗生根培养基(1/2MS+IBA0.1mg·L-1)上,生根率为89.1%,移栽后成活率达89.3%。     

西瓜高效再生体系的建立

以优质小果型西瓜品种西173和小麒麟为材料,系统研究了以子叶为外植体的西瓜组培高效再生体系。结果表明:2个西瓜品种在不定芽和愈伤组织诱导上存在着较大差异,在MS+6-BA1.0mg·L-1+IBA0.5mg·L-1的分化培养基上,西173不定芽诱导率最高达到92.6%,在MS+6-BA2.0mg·L-1+IAA0.2mg·L-1培养基上小麒麟不定芽诱导率最高达到89.7%;诱导出的不定芽丛伸长以MS+KT0.2mg·L-1培养基最佳;2个西瓜品种不定芽在MS+IBA0.2mg·L-1培养基上均获得了较好的生根效果。组培苗移栽后保持高温、高湿是移栽成活的重要条件。西瓜高效再生体系的建立为应用基因工程技术改良西瓜品质和提高其抗逆、抗病性奠定了基础。     

西瓜未受精胚珠的离体培养

以‘西农9号’和‘蜜桂’为供试材料进行了西瓜未受精胚珠的离体培养,研究了供体植株的黑暗热激处理、基因型、不同取样时间、2,4-D浓度和不同激素浓度组合等因素对其芽点诱导率的影响。结果表明:西瓜未受精离体培养以33℃的条件下黑暗热激4 d时效果最佳;CPPU处理3 d的胚珠诱导率最高;‘西农9号’在2.0 mg·L-12,4-D+1.0 mg·L-16-BA+0.5 mg·L-1NAA的条件下芽点率最高为13.3%,‘蜜桂’在3.5 mg·L-12,4-D+1.0 mg·L-16-BA+0.2/0.5 mg·L-1NAA,3.0 mg·L-12,4-D+1.0 mg·L-16-BA+0.5 mg·L-1NAA的条件下芽点诱导率最高均为6.7%。     

‘黄水蜜’桃实生苗茎段再生体系的建立

【目的】建立‘黄水蜜’桃实生苗茎段高效稳定的再生体系。【方法】以‘黄水蜜’桃实生苗茎段为外植体,探讨了不同植物生长调节剂质量浓度组合对不定芽诱导过程中愈伤组织形成率和不定芽形成率的影响,并采用两步生根法研究不同植物生长调节剂种类对不定根诱导的影响。【结果】适合‘黄水蜜’桃实生苗茎段切口处愈伤组织再生的最佳培养基为MS+6-BA 2.0 mg·L-1+NAA 0.5 mg·L-1+Ag NO30.5 mg·L-1,不定芽再生的最佳培养基为MS+6-BA 3.0mg·L-1+NAA 0.1 mg·L-1+Ag NO30.5 mg·L-1,其愈伤组织形成率和不定芽再生率分别为85%和47%;获得的不定芽先后经WPM+ZT 2.0 mg·L-1+NAA 0.1 mg·L-1+Ag NO30.5 mg·L-1和MS+NAA 0.5 mg·L-1+GA30.5 mg·L-1+Ag NO30.5mg·L-1两步生根法培养后,不定根再生率为50%,平均根数量为5.00。【结论】初步建立了‘黄水蜜’桃实生苗茎段再生体系,为桃遗传转化研究奠定基础。     

甜瓜再生体系的建立

以葫芦科的甜瓜为试验对象,探讨不同基因型、不同激素浓度配比及抗生素胁迫对其不定芽萌发的影响,以期建立甜瓜再生培养体系,为甜瓜遗传转化奠定基础。结果表明,甜瓜在初代培养时,不定芽发生的培养基为MS+1.0 mg·L-16-BA,甜瓜再生率最高,达到92.5%;甜瓜在继代培养中,0.3 mg·L-16-BA的处理最适宜不定芽的伸长生长,0.7 mg·L-16-BA的处理甜瓜不定芽增殖系数最高达到2.33;当Kan(卡那霉素)质量浓度大于20 mg·L-1时,外植体基本全部褐化,无法分化出绿芽。Amp(氨苄青霉素)在一定质量浓度下对不定芽发生的影响差异性不显著。     

不同甜瓜品种再生体系的比较研究

以不同基因型的甜瓜品种为材料,研究了不同激素组合,Ag NO3质量浓度以及基因型对甜瓜再生的影响。结果表明,不定芽诱导中最适宜的激素组合为MS+1.0 mg·L-16-BA+0.5 mg·L-1ABA(脱落酸),在此培养基上薄皮甜瓜‘IVF501’和‘IVF509’的不定芽诱导率分别为88.00%、79.60%,厚皮甜瓜‘IVF525’和‘IVF604’的不定芽诱导率分别为76.50%、74.75%。不同质量浓度的Ag NO3对甜瓜不定芽分化的影响有差异,1.0 mg·L-1Ag NO3有抑制愈伤组织分化的作用,能有效减少玻璃化的发生,当质量浓度为2.0 mg·L-1时,虽然明显地抑制了愈伤组织分化,但同时降低了不定芽分化率。薄皮甜瓜‘IVF501’与厚皮甜瓜‘IVF525’具有较高的不定芽诱导率,将诱导的不定芽转入伸长培养基中(MS+6-BA 0.05 mg·L-1),分化的不定芽能够伸长长大,在生根培养基中(MS+IAA 0.4 mg·L-1)容易生根。薄皮甜瓜获得完整再生植株需50~60 d,厚皮甜瓜获得完整再生植株需60~75 d。     

西瓜未成熟胚高效再生体系的建立

为了建立西瓜高效遗传转化的再生体系,以西瓜杂交品种‘秀玲’、自交系‘97103’和野生种质‘PI296341’的未成熟胚为外植体,分析了基因型、未成熟胚发育时间和植物生长调节剂等因素对体外再生率的影响,获得了西瓜离体培养再生植株。结果表明,以授粉后24 d的西瓜未成熟胚为外植体,在MS+SH维生素+6-BA2.2 mg·L-1培养基上,‘秀玲’、‘97103’和‘PI296341’的未成熟胚外植体能够诱导出不定芽,不定芽诱导率为87.78%、82.78%和86.11%,不定芽在MS+SH维生素+6-BA 0.2 mg·L-1+IAA 0.02 mg·L-1培养基上伸长、展叶,在MS+IBA 1.0mg·L-1的培养基上诱导生根得到完整的再生植株。以未成熟胚为外植体获得再生植株的途径,可为西瓜遗传转化提供有效的受体系统。     

樱桃不同基因型再生植株的比较

对甜樱桃(PrunusaviumL.)、杂种优系F系(P.avium L.×P.pseudocerasusL.)和H系(P.cerasus L× P.pseu-docerasusL.)等不同基因型的离体再生植株方式进行了比较研究。结果表明,不同遗传背景的樱桃试材,其再生方式和途径存在差异。其中甜樱桃品种美早的离体叶片在WPM+6-BA2.0mg·L-1+IAA2.0mg·L-1+GA30.1mg·L-1培养基上,不定芽再生率可达到90%,H10、萨米脱、F10、F8在6-BA(2～2.5mg·L-1)、IAA(1.0～2.0mg·L-1)的激素配比,也获得了76%、86%、80%、64%的再生率;杂种H10叶柄接种于改良MS+6-BA2.0mg·L-1+IBA0.1mg·L-1+2,4-D0.5mg·L-1的培养基,可以得到40%的再生率,其他品种仅有H8的叶柄获得了少量的再生植株;杂种F10的幼嫩节间接种于LS+6-BA1.0mg·L-1+NAA2.0mg·L-1+CH100mg·L-1培养基,最高再生率为40%,6-BA(1～2mg·L-1)和NAA(1～2mg·L-1)配比,H8、H10的离体节间再生率最高分别为25%和30%;杂种H8整体根在MS+6-BA1.0mg·L-1+2,4-D2.0mg·L-1+IBA0.05mg·L-1+NAA0.05mg·L-1的培养基上,再生率为96.7%,6-BA(0.5～2mg·L-1)和2,4-D(0.5～2.0mg·L-1)配比,H10、F8、F10离体根再生率分别为93.3%、96.7%和93.3%。     

华东葡萄白河-35-1器官离体再生体系建立的研究

以华东葡萄株系白河-35-1(Vitis pseudoreticulata clone Baihe-35-1)的茎段和叶片为材料,通过器官发生途径研究了不同激素及浓度处理组合对华东葡萄白河-35-1无菌苗茎段和叶片诱导不定芽的影响。结果表明,通过调整不同的激素浓度组合和选择不同的外植体可以成功诱导出不定芽。较低的激素浓度组合有利于外植体不定芽的再生。所选用的外植体中,茎段比叶片更易诱导出不定芽。诱导出不定芽的最适激素组合为TDZ1mg·L-1+NAA0.05mg·L-1,其中茎段不定芽诱导率为12.8%,叶片不定芽的诱导率为3.3%。将不定芽置于MS基本培养基+0.2mg·L-1IBA培养基上培养,获得了完整植株。     

不同激素和黑暗处理对泰山红石榴离体叶片再生的影响

以泰山红石榴为试材,研究了不同激素配比、黑暗处理时间等关键因素对泰山红石榴离体叶片愈伤组织诱导和不定芽再生的影响。结果表明,细胞分裂素是离体叶片再生不定芽所必需的。生长素2,4-D与IBA组合诱导出的愈伤组织生长量大,但不定芽再生率低。黑暗处理时间以2周为宜。适宜的再生培养基为MS+KT1.0mg·L-1+BA2.0mg·L-1+GA30.5mg·L-1,不定芽再生率达57.0%,每片叶再生芽数为3.0个。     

锥栗植株再生体系的建立

【目的】为了建立锥栗再生体系,【方法】以锥栗胚为外植体,分析不同基因型、基本培养基及激素组合对锥栗不定芽的诱导、增殖和生根的影响。【结果】结果表明,油榛是锥栗组织培养最佳的基因型;锥栗不定芽诱导的最适培养基为M(NH4NO3804 mg·L-1+KNO31011 mg·L-1+FeSO4.H2O 27.8 mg·L-1+1/2MS其余无机盐+MS有机)+6-BA 2.0mg·L-1+IBA 0.2 mg·L-1,其出芽率为76%;芽增殖的最佳培养基为M(同上)+6-BA 0.5 mg·L-1+IBA 0.1 mg·L-1,其增殖倍数达18;诱导生根的最佳培养基为M(同上)+IBA 0.5 mg·L-1,其生根率为48%。【结论】运用上述体系可获得完整锥栗再生植株。     

枣离体叶片高效再生植株的研究

 以‘黄骅冬枣’组培苗叶片为试材, 研究了叶片幼嫩程度、叶片来源、组培苗状态以及植物生长调节剂等对离体叶片诱导不定芽再生的影响, 并获得了完整的再生植株。结果表明, 以未生根组培苗中上部叶片再生效果较好; TDZ诱导叶片再生不定芽的效果显著优于BA; 离体叶片在MS + TDZ 1.0 mg·L ^{- 1} + IBA 0.1 mg·L ^{- 1}培养基中诱导培养28 d后, 转入MS + IBA 0.1 mg·L ^{- 1} + GA₃ 0.05 mg·L ^{- 1}培养基中二次培养, 叶片再生效果最好, 再生率可达92.45%。将叶片再生植株转入MS +BA 1.0 mg·L ^{- 1} + KT0.5 mg·L ^{- 1} + IBA 0.1 mg·L ^{- 1}培养基中继代增殖培养, 增殖系数达3.64。以1 /2MS + IAA 1.0 mg·L ^{- 1}培养基诱导生根, 生根率87.1%。生根苗大田移栽成活率达到57%。     

甜樱桃砧木离体叶片愈伤组织诱导及不定芽再生

叶片再生效率的高低直接影响目的基因转化的成功率,为建立稳定、高效的樱桃不定芽离体再生体系,以30～40d苗龄的甜樱桃砧木ZY-1的组培继代苗为试材,取上部幼嫩叶片或不含腋芽的茎段,分别从培养基生长调节剂配比、接种材料类型、叶片接种部位、接种方式以及培养条件等方面进行了不定芽再生技术研究。结果表明,培养基中添加7.0mg/L的6-BA与0.5～1.0mg/L的IBA配比时不定芽再生率和出芽数均较高,TDZ和NAA不适于诱导ZY-1叶片再生不定芽;接种继代苗茎段比叶片再生率高;接种叶片以选择嫩叶横切2刀、远轴面向下接触培养基的方式为好;叶片不同部位处理以带叶柄的基部叶块最易再生;叶片接种后在25℃室温条件下,先暗培养3周再照光,利于不定芽的再生。     

黑穗醋栗组织培养和遗传转化

通过对不同激素质量浓度配比实验,建立黑穗醋栗茎尖高频再生体系。结果表明,MS+6-BA1.0mg·L-1+NAA0.1mg·L-1培养基可高效诱导黑穗醋栗茎尖的分化,1/2MS培养基可快速诱导根的生成,形成再生植株。25mg·L-1卡那霉素可以抑制茎尖的分化,20mg·L-1卡那霉素可以抑制分化小苗的生根。利用农杆菌介导法将osMAPK4基因转化黑穗醋栗,获得了抗卡那霉素的再生植株。提取转基因植株基因组DNA,进行PCR检测,结果表明osMAPK4基因已经被整合到黑穗醋栗基因组中。     

云南野生早花象牙参叶片再生体系的建立

 以云南野生的早花象牙参叶片为外植体, 探讨了叶片的不同部位、植物生长调节剂组合、暗培养、水解酪蛋白和椰子汁对愈伤组织诱导和不定芽再生的影响。结果表明: 叶片基部, 暗培养, 水解酪蛋白和椰子汁均有利于愈伤组织的诱导; 暗培养促进了不定芽的再生。适宜早花象牙参叶片愈伤组织形成的诱导培养基为MS + 6-BA 1.5 mg·L ^{- 1} +NAA 0.1 mg·L ^{- 1} +水解酪蛋白800 mg·L ^{- 1} +椰子汁50 mL ·L ^{- 1} , 再生培养基为MS + 6-BA 1.5 mg·L ^{- 1} +NAA 0.1 mg·L ^{- 1} , 增殖培养基为MS + 6-BA 0.6 mg·L ^{- 1} + NAA 0.1 mg·L ^{- 1} , 生根培养基为1/2MS +NAA 0.8 mg·L ^{- 1}。