‘凤丹白’成熟胚愈伤诱导、增殖及组织学观察

【目的】探讨植物生长调节剂对‘凤丹白’成熟胚愈伤组织诱导与增殖的影响,鉴定具分化潜能的愈伤组织,为‘凤丹白’再生技术体系的完善与遗传改良提供参考。【方法】以‘凤丹白’成熟胚为外植体,进行愈伤组织诱导和增殖培养,并对不同类型的愈伤组织进行外观形态与细胞组织学观察。【结果】在改良MS+0.5 mg/L水解酪蛋白+6 mg/L PIC+0.5 mg/L TDZ+30 g/L蔗糖的培养基上,‘凤丹白’成熟胚愈伤组织诱导率最高,达到70.61%;在改良MS+0.5 mg/L水解酪蛋白+4 mg/L 2,4-D+30 g/L蔗糖的培养基上,愈伤组织诱导率最低,为21.88%。诱导出的初代愈伤组织经增殖培养后,出现6种状态的愈伤组织,即松散透明、致密白色、致密绿色、致密片状、絮状披针形和透明褐色。石蜡组织切片观察结果表明,松散透明、致密白色和致密绿色愈伤组织为胚性愈伤组织,致密片状、絮状披针形和透明褐色愈伤组织为非胚性愈伤组织。在改良MS培养基+0.5 mg/L水解酪蛋白+6.0 mg/L PIC+0.5 mg/L NAA+30 g/L蔗糖的培养基上,愈伤组织扩增率最高,为97.78%,扩增系数为19.97;在改良MS培养基+0.5 mg/L水解酪蛋白+0.4 mg/L PIC+30 g/L蔗糖的培养基上,愈伤组织扩增率最低,为13.46%,扩增系数为2.97。【结论】诱导14 d后,成熟胚开始形成愈伤组织,PIC和TDZ为‘凤丹白’成熟胚愈伤组织诱导和扩增的适宜激素,经继代培养后松散透明、致密白色和致密绿色的愈伤组织具有分化潜能。     

山杏体细胞胚胎发生及其组织学观察

为了建立山杏体细胞胚胎发生再生体系,以山杏茎尖为外植体,研究山杏体细胞胚胎发生及其主要影响因子。结果表明:山杏茎尖在MS+6-BA(0.5 mg/L)+NAA(0.2 mg/L)培养基中愈伤组织诱导率达100%,胚性愈伤组织增殖的最佳培养基为MS+6-BA(0.5 mg/L)+2,4-D(0.2 mg/L)+水解酪蛋白(0.5 g/L)。山杏体细胞胚胎发生过程中能明显看出球形胚、心形胚、鱼雷胚、子叶胚等阶段。     

‘凤丹’子叶愈伤组织诱导及分化研究

研究了层积时间对‘凤丹’胚萌发的影响,并探讨了基本培养基、植物激素等因素对子叶愈伤组织的诱导及不定芽分化的影响。结果表明:40d层积时间对胚萌发的效果最好,MS+Ca2++2mg/L2,4-D+30g/L蔗糖是胚诱导愈伤组织的最佳培养基,诱导率85%;MS+Ca2++1.5mg/L6-BA+0.5mg/LNAA+20g/L蔗糖是诱导不定芽发生的最佳培养基;不定芽高约1.5cm转入生根培养基,生根率可达80.7%。     

杂交榛子体细胞胚发生研究

不同培养基、激素种类及浓度和外植体对杂交榛子体细胞胚直接和间接诱导的影响的结果表明,MS培养基为杂交榛子体细胞胚发生最佳培养基;激素对杂交榛子体细胞胚直接诱导无显著影响,均可诱导成熟植株;筛选出杂交榛子愈伤组织培养最佳培养为:MS+6-BA2.0 mg/L+NAA1.5 mg/L;再生植株分化最佳培养基为:MS+6-BA2.0mg/L+N AA1.5 mg/L转入MS+6-BA 5.0 mg/L+N AA 0.01+GA3 0.5 mg/L;杂交榛子体细胞胚发生以子叶诱导率最高,以龙榛胚性愈伤组织诱导率最高。     

杉木愈伤组织诱导及植株再生

以杉木成熟合子胚为起始外植体,研究了基本培养基、植物激素、凝固剂种类、有机附加物等因素对杉木愈伤组织的诱导、愈伤组织的继代培养及不定芽分化的影响。结果表明:1/2MS+2,4D2mg/L+6-BA1mg/L+KT1mg/L+糖30g/L是成熟合子胚诱导愈伤组织的最佳培养基;1/2MS+2,4-D1mg/L+6-BA0.5mg/L+KT0.5mg/L+糖30g/L适于杉木愈伤组织继代增殖;改良MS+6-BA0.5mg/L+KT1.5mg/L+蔗糖30g/L是诱导不定芽发生的最佳培养基。     

油茶胚组织离体培养实验

采用油茶上胚轴、下胚轴和子叶作外植体进行油茶组织离体培养诱导愈伤组织发生和不定芽分化的实验.实验结果表明,0.2％的HgCl2消毒处理油茶种胚外植体10 min效果较好;油茶上胚轴、下胚轴和子叶组织在MS+2,4-D2mg/L+KT0.5 mg/L的培养基上,愈伤组织诱导率分别为95.0％、66.7％和30.0％;在MS+6- BA2.5 mg/L+ KT0.1 mg/L+ NAA0.5 mg/L培养基上,不定芽诱导率分别是66.7％、33.3％和11.1％;以MS+6- BA 2 mg/L+ NAA 0.2 mg/L继代培养,上胚轴、下胚轴和子叶所形成愈伤组织芽增殖系数40天时为5.8、5.6和5.3.     

花榈木基因型、采种时期对体细胞胚胎的诱导

【目的】通过筛选花榈木高频率体胚发生的基因型和采种时期,为花榈木体胚发生的研究提供材料基础。【方法】花榈木7个基因型的成熟胚和5个采种时期的未成熟胚在B5培养基中添加6-BA(0.2 mg/L)+2,4-D(2.0 mg/L)+蔗糖(30 g/L)+结冷胶(2.5 g/L)+谷氨酰胺(0.5 g/L)进行胚性愈伤组织的诱导,其胚性愈伤组织在B5培养基中添加KT(0.5 mg/L)+2,4-D(1.0 mg/L)进行体胚诱导。【结果】1)在7个基因型中,基因型GZGL胚性愈伤诱导率最高(41.07%),基因型GZPT体胚诱导率最高(18.4%);胚性愈伤可溶性蛋白、可溶性糖和淀粉含量分别在基因型GZPT(7.21 mg/g)、AHQM(27.7 mg/g)和ZJLQ(18.39 mg/g)中最高。2)在不同采种时期中,胚性愈伤诱导率(37.49%)和体胚诱导率(14.2%)有一个窗口期,均以T4最高;胚性愈伤可溶性蛋白、可溶性糖和淀粉含量分别在T2(5.89 mg/g)、T1(18.39 mg/g)和T1(11.09 mg/g)中最高。3)相关性分析表明,体胚诱导率与基因型和采种时期具有显著相关性。4)利用细胞组织学技术初步了解到花榈木胚性愈伤细胞起源为内起源和外起源。【结论】不同基因型和采种时期对胚性愈伤诱导率、体胚诱导率及碳氮的积累具有较大的影响。其中,体胚诱导率以基因型GZPT最高;而在不同采种时期中,T4体胚诱导率最高。     

湿地松愈伤组织的诱导研究初报

取湿地松成熟胚作为外植体,在添加不同BA、NAA浓度配比的MS培养基上,诱导愈伤组织的最适培养基是MS+BA0.5mg/L+NAA0.5mg/L+0.6%琼脂+25g/L蔗糖。实验同时证明,NAA是胚诱导愈伤组织的必需因子。     

布迪椰子种子成熟胚诱导愈伤组织的研究

在含有0.5 mg/L NAA+0.5 mg/L 6BA+60.0 g/L蔗糖+6.0 g/L琼脂的MS培养基上分别添加6种不同浓度的2,4 D,对3种不同树龄布迪椰子种子的成熟胚进行愈伤组织诱导。结果表明：以6~7 a生布迪椰子种子成熟胚的诱导愈伤组织效果最好,添加2,4 D则以浓度为0.5 mg/L的效果最好。     

红松成熟合子胚愈伤组织诱导的适宜培养条件

为了探索以红松成熟合子胚为外植体诱导愈伤组织的适宜培养条件,以GD、DCR、LM、MS等为基本培养基,以2,4-D和6-BA组成不同浓度激素组合,进行愈伤组织诱导试验。结果表明,1供试培养基均可诱导红松成熟合子胚产生愈伤组织,但DCR培养基上诱导的愈伤组织出现最早,出愈率显著高于其他培养基,达93.3%;2在DCR培养基中添加2,4-D与6-BA的各种组合均获得了较好的愈伤组织发生,但以2,4-D 2 mg/L+6-BA 0.5 mg/L和2,4-D6 mg/L+6-BA 1 mg/L的出愈率最高,达96.7%。综上所述,红松成熟合子胚外植体诱导愈伤组织时,适宜基本培养基为DCR,适宜激素组合为2,4-D 2 mg/L+6-BA 0.5 mg/L。