香樟胚性与非胚性愈伤组织间的差异研究

【目的】通过组织细胞学观察、扫描电镜观察、生理生化指标测定三种方法为香樟胚性和非胚性愈伤组织的区分提供了可靠的判断依据,建立起愈伤组织的胚性发生能力与生化代谢间的关系,以此为基础可以提高香樟体胚诱导率、优化体胚发生体系。【方法】以长沙7月初采摘的香樟Cinnamomum camphora L.的未成熟合子胚为材料,诱导出四种不同类型的愈伤组织,对其进行组织细胞学观察以及生理生化测定。【结果】研究结果表明:胚性愈伤组织多为白色,表面散布淡黄色颗粒,细胞壁厚质浓、细胞体积较小,排列紧密,在电镜下表面细胞成团分布,大小近似,细胞核大核仁明显,细胞器丰富。而非胚性愈伤组织多为灰色、白色或深黄色,细胞壁薄,内含物少,空泡化明显,细胞多数衰老、破碎,在电镜下非胚性愈伤表面细胞不饱满大部分死亡破裂,且表面存在附着物,内部几乎没有细胞器。且胚性愈伤组织的适应性、抗逆性强于非胚性愈伤组织。对于胚性愈伤组织和非胚性愈伤组织发生的位置来说,非胚性愈伤组织先发生在两片子叶的中间向外部扩增。胚性愈伤组织的发生位置有三种:一种是发生在胚根端,第二种发生在已形成的愈伤组织的外侧,第三种褐化的愈伤组织边缘。【结论】四类愈伤组织中有三类为非胚性愈伤组织,一类为胚性愈伤组织。     

桂花幼胚培养及愈伤组织增殖诱导

采用不同培养基对桂花胚的培养进行了试验研究,结果表明:MS 1-1.5 mg.L-16-BA有利于桂花幼胚的萌发;MS 2 mg.L-16-BA 0.3 mg.L-12,4-D有利于幼胚苗的幼叶愈伤组织的诱导,诱导率高,且质地致密;B5 1.5 mg.L-16-BA 0.05 mg.L-1NAA有利于幼胚苗基部产生的愈伤组织的增值诱导,所形成的新愈伤组织呈淡绿色,且质地致密,生长很好,并能分化出根。     

柳树愈伤组织形态和细胞学观察

以柳树叶片为材料,接种在诱导培养基上诱导愈伤组织发生,采用石蜡切片法对愈伤组织的内部细胞结构进行观察。结果表明,叶片组织脱分化的起始部位在微管束鞘;胚性细胞多发生在所形成的愈伤组织的表层或近表层,和非胚性细胞在形态和细胞学上有很大差别,胚性细胞核大、质浓,与周围细胞存在生理隔离;多细胞原胚以平周分裂为主,并由此表现出有序生长;胚性细胞内含有丰富的淀粉粒,随细胞的分裂和分化逐渐减少;愈伤组织有根产生。     

香樟胚性愈伤组织遗传转化体系建立

通过根癌农杆菌介导的遗传转化方法,建立香樟胚性愈伤组织遗传转化体系.结果表明:以胚性愈伤组织为受体,能取得比较理想的转化效果;50 mg·L-1的潮霉素对胚性愈伤组织有很好的筛选效果;根癌农杆菌OD600为0.6时,能获得较高的转化率;侵染时间提高为40min时,对提高转化效率有显著的效果;共培养3 d能够得到较好的转化效率.对转基因香樟愈伤组织进行PER检测,结果表明GUS基因已整合到香樟胚性愈伤组织的基因组中.     

花卉组织培养中外殖体处理方法改良技术研究

花卉植物的各种器官,如根、茎、叶和花等,以及各种组织,如皮层、茎髓和形成层等,离体后在适当条件下几乎都能产生愈伤组织,因此,愈伤组织诱导的成败关键主要不是外殖体的来源和种类,而是培养条件,当然,外殖体的类型和在植株上所处位置对愈伤组织诱导的影响也不可忽视。     

芍药愈伤组织诱导及遗传转化技术的初步研究

利用正交设计法诱导形成愈伤组织,并探讨6-BA,NAA,2,4-D等外源激素对芍药成熟胚愈伤诱导的影响。通过根癌农杆菌介导法将衰老抑制基因(IPT)转入芍药的愈伤组织:共处理72个愈伤组织块,用含除草剂的D4培养基进行选择培养,筛选出18个生长和增殖良好的愈伤组织块;经PCR鉴定,确认其中17个愈伤组织块中导入进IPT基因。     

六、桉树组织培养

组织培养指以分离出植物各部分的组织(如分生组织、形成层、木质部、韧皮部、表皮、皮层、胚乳组织、髓部等),或已诱导的愈伤组织为外植体的离体无菌培养。桉树组织培养研究始于60年代,据报道,有20多种桉树可通过植株的不同部分(种子、下胚轴、幼苗的根、茎段、叶柄、叶片、茎尖、结节、花药、树皮外植体和花粉粒等)通过组织培养形成愈伤组织。     

四倍体刺槐嫩枝插穗生根的解剖学观察

通过对四倍体刺槐嫩枝插穗扦插前和扦插后的切片观察,结果表明:(1)在插穗的切口处有愈伤组织,在愈伤组织内未发现产生根原基;(2)四倍体刺槐嫩枝茎内无潜伏根原基,不定根由诱生根原基发育形成,诱生根原基源于髓射线细胞的分裂和分化。     

冬枣叶片愈伤组织诱导研究

组织培养条件下,以冬枣组培苗叶片为试材,分别研究了3种基本培养基、5种生长调节剂、不同暗培养时间和不同硝酸银浓度对叶片愈伤的诱导效果。结果表明,MS和1/2MS培养基中的诱导率高,愈伤的质量好;在这两种培养基中TDZ不论是单独使用还是与IBA混合使用都能得到高质量的愈伤组织并能生成不定芽;光照对叶片愈伤的诱导率无明显影响,但经过14天暗培养诱导出的愈伤组织质地致密,出芽数高;加入硝酸银对愈伤诱导率无影响但能明显促进愈伤出芽。     

温度对文冠果枝条愈伤组织形成的影响

<正> 在嫁接繁殖时,砧木和接穗各自在接口处产生愈伤组织使二者融合为一体,因此,控制适宜条件,保证愈伤组织的形成是决定嫁接成活的关键。在砧木和接穗健壮,又有一定湿度保持砧、穗水份的情况下,温度便成了影响嫁接愈合的主要因子。但不同树种形成愈伤组织所要求的温度差异较大,例如苹果、桃和梨等,在15℃时即能产生愈伤组织,而核桃一般要求的愈伤温度为28℃左右。本试验旨在掌握文冠果形成愈伤组织的适宜温度,为确定嫁接最佳时机提供依据。     

落叶松不同类型胚性和非胚性愈伤落叶松不同类型胚性和非胚性愈伤

以华北落叶松继代、增殖培养的不同类型的胚性及非胚性愈伤组织为材料，测定其氨基酸、糖类、酚酸、激素以及离子的含量，结果表明氨基酸含量的差异十分明显，质地硬的非胚性愈伤组织中18种游离氨基酸含量为胚性愈伤组织的2倍以上，经ABA处理后，胚性愈伤组织中多糖及邻苯二酚含量急剧升高；三糖含量与不同基因型密切相关；乙烯释放量在非胚性愈伤组织中高于胚性愈伤组织；金属离子CO     

赤桉组织培养和植株再生

赤桉腋芽、幼苗的顶芽、下胚轴,在MS培养基中添加BA0.05—1.5mg/L(单位下同)和2.4—D0.5—2.0均可诱导产生愈伤组织.且在MS+BA0.5+2.4—D1.0或1.5中愈伤组织诱导率为最高,幼苗顶芽诱导率为100％,腋芽为90％左右,幼苗下胚轴80％左右.将增殖20d左右的愈伤组织,转移到MS+BA0.5—2.0+IBA0.1—1.0中,即可产生丛生芽,在MS+BA1.0+IBA0.1或0.5中芽分化率为最高,以枝条腋芽和幼苗顶芽形成的愈伤组织的芽分化率较高,可达86.7％～92％,每块愈伤组织可形成80个左右的芽,多者可达250多个芽.待芽长到3cm左右高时,切成带一个腋芽切段转入1/2MS+IBA0.01或1/2MS+ABT1.0+IBA0.01中,即可生根,根的诱导率可达62％.     

兴安杜鹃愈伤组织诱导的研究

经预备试验可知,兴安杜鹃的根、茎、叶为外植体,根段更易产生愈伤组织。结果表明,采用根段诱导愈伤组织和丛生芽最适培养基配方为1/4MS+ZT 0.5 mg/L+IBA 0.2 mg/L+NAA 0.02 mg/L培养基,其诱导率为73.33%。     

牡丹愈伤组织扫描电镜观察

为揭示牡丹愈伤组织分化过程中的细胞变化规律,以牡丹品种“凤丹”花瓣诱导的愈伤组织为材料,利用电镜扫描的方法,观察了不同培养时间愈伤组织表面结构的变化过程。结果表明：牡丹花瓣愈伤组织类型不同,表面结构有较大差异,同一块愈伤组织上存在不同的发育时期,继代的时间不同,愈伤组织的表面结构也会随之发生变化,继代后15[XC~.TIF]20 d为愈伤组织结构变化最大的时期。初步了解了愈伤组织分化植株的过程,为建立牡丹高效再生体系奠定理论基础。     

重瓣丝石竹组织培养与栽培管理技术

利用重瓣丝石竹中3个品种“仙女”、“完美”、“火烈鸟”分别取嫩茎和顶芽作为外植体,在不同激素水平的培养基上诱导产生愈伤组织、丛生芽和根,完成植株再生。研究发现,2种外植体以项芽最好．其愈伤组织的产生的芽的分化速度较快。最后移入生根培养基上长成完整植株。同时对栽培管理技术还进行了研究和探讨。     

农杆菌介导慈竹4CL基因遗传转化梁山慈竹

以梁山慈竹2种类型成熟胚的愈伤组织为材料,采用农杆菌遗传介导的方法,将已构建好的具有降低木质素含量的PBI121-4CL-RNAi表达载体导入愈伤组织,探讨愈伤组织预培养时间、菌液浓度、侵染时间、共培养时间和温度对遗传转化的影响。研究结果表明,淡黄色、颗粒状、疏松易碎的胚性愈伤组织是较好的遗传转化材料。以在愈伤组织培养基上预培养8天的淡黄色、颗粒状、疏松易碎的胚性愈伤组织为转化受体,在菌液浓度为OD600=0.05的EHA105中侵染20min后,在25℃、黑暗条件下共培养2天(共培养基表面加一层无菌滤纸),在含有卡那霉素为55mg.L-1的抗性筛选培养基上筛选30天,抗性愈伤组织率为90%,经PCR检测,慈竹4CL基因已导入梁山慈竹愈伤组织中。抗性愈伤组织在芽诱导培养基上诱导30天,可获得丛生芽,待丛生芽长至3～5cm后,在生根培养基上经过20～30天的诱导,可产生1～8条根,获得再生植株。经PCR检测,慈竹4CL基因已导入梁山慈竹再生植株中,获得了转基因植株,转化效率为9%。RT-PCR检测结果表明,转4CL基因的梁山慈竹愈伤组织和植株的内源4CL基因的表达受到抑制,且表达量比对照明显降低。     

落叶松不同类型胚性和非胚性愈伤组织的生理生化差异

以华北落叶松替代、增殖培养的不同类型的胚性及非胚性愈伤组织为材料，测定其氨基酸、糖类、酚酸、激素以及离子的含量。结果表明：氨基酸含量的差异十分明显，质地硬的非胚性愈伤组织中18种游离氨基酸含量为胚性愈伤组织的2倍以上，经ABA处理后，胚性愈伤组织中多糖及邻苯二酚含量急剧升高；三糖含量与不同基因型密切相关；乙烯释放量 在非胚性愈伤组织中高于胚性愈伤组织；金属离子CO^ 的含量，胚性愈伤组织是非胚性愈伤组织的12倍，胚性愈伤组织中铵态氮（NH4^ ）与硝态氮（NO3^-)的比值是非胚性愈伤组织中的10倍以上;实验结果为进一步探讨针叶树体细胞胚胎发生的生理生化机理提供依据。     

三个菊花品种花器官愈伤组织辐射效应的研究

用辐射剂量为10、15、20Gy的60Coγ射线对金莲、白矮生和矮红3个小花型夏菊品种的舌状花和管状花产生的愈伤组织进行辐射处理,研究了辐射处理对愈伤组织褐化率、分化率以及分化芽的数量的影响.结果表明:γ射线对3个品种不同来源愈伤组织的褐化、分化能力均有影响.随着辐射剂量的增加,不同来源的愈伤组织的褐化程度均加重,而分化能力则减弱.此外,不同基因型和不同来源的愈伤组织,对γ射线敏感性也有差异,矮红品种的愈伤组织最敏感,舌状花产生的愈伤组织比管状花产生的愈伤组织辐射敏感性强.     

碳源及植物生长调节剂对雷公藤愈伤组织生长和次生代谢产物含量的影响

以雷公藤根愈伤组织为材料,添加不同质量浓度的2,4-D,NAA,6-BA,KT或其组合,研究植物生长调节剂及其组合以及碳源对雷公藤愈伤组织的生长、次生代谢产物含量的影响.结果表明:2,4-D有利于雷公藤愈伤组织的生长和总生物碱的积累,6-BA对愈伤组织的生长起抑制作用,但明显促进愈伤组织中雷公藤内酯醇的形成,KT虽然对愈伤组织的生长起促进作用,但明显抑制愈伤组织中雷公藤内酯醇的形成;不同质量浓度2,4-D,NAA及与KT,6-BA组合试验表明,1.0 mg·L-12,4-D+0.5 mg·L-1KT明显促进愈伤组织的生长,1.0 mg·L-12,4-D+2.0 mg·L-1KT有利于愈伤组织中总生物碱的形成,而4.0 mg·L-1NA+0.5 mg·L-1-BA有利于愈伤组织中雷公藤内酯醇的合成.碳源中,对雷公藤愈伤组织的增长量以蔗糖最高,麦芽糖最有利于雷公藤内酯醇的合成,葡萄糖最有利于雷公藤总生物碱的合成.     

山苍子嫩枝扦插生根过程的形态解剖学研究

研究山苍子[Litsea cubeba(Lour.)Pers]扦插不定根的发生过程,为山苍子扦插繁殖提供理论依据。以山苍子一年生嫩枝为试材进行扦插,观察生根过程中外部形态变化;同时,利用常规石蜡切片法制片对山苍子扦插过程中不定根的形成过程进行解剖观察。结果表明,在山苍子插穗中无原始根原基存在,根原基由维管形成层的部分薄壁细胞诱导分化而来,进而发育为不定根,属于诱导生根型;愈伤组织是由皮层薄壁细胞、维管形成层的部分薄壁细胞诱导产生,且愈伤组织中未观察到根原基,不定根的发生与愈伤组织的出现不存在直接关联。山苍子属于非愈伤组织生根型树种。