华盖木组织培养过程中PPO活性及总酚含量与褐化的关系研究

以华盖木4年生嫁接苗当年生枝为外植体,在初代培养过程中每周测定外植体的多酚氧化酶(PPO)活性及总酚含量,并统计外植体的褐化率,对华盖木初代培养过程中外植体的褐化与PPO活性及酚类物质含量的关系进行分析。结果表明:华盖木外植体的总酚含量于接种后第2周时达到最大值2.4445mg/g。此后又快速下降。接种后1周内酶活性快速增加,第1～3周,酶活性又大幅度下降,第3～4周酶活性下降速度减缓。接种后第2、3周是褐化的高发生期,第3周后褐化率的增长较慢。外植体的褐化受着PPO活性和酚类物质含量的共同影响。     

热激处理对甜柿外植体总酚含量和PAL、PPO、POD活性的影响

甜柿在组织培养过程中极易褐化,为了防止褐变,在培养之前应对外植体进行热激处理。文中研究了热激处理后的宝华甜柿叶片在培养过程中其酚类物质含量和苯丙氨酸解氨酶(PAL)、多酚氧化酶(PPO)、过氧化物酶(POD)活性的变化情况,并对热激处理抑制组培褐变的生理机制进行了初步探讨。结果表明:热激处理后,宝华甜柿叶片的褐变程度比没有处理的明显减轻,其总酚含量与苯丙氨酸解氨酶(PAL)及多酚氧化酶(PPO)活性均有所降低,但热激处理对其过氧化物酶(POD)活性的抑制效果并不明显,说明热激处理通过降低外植体的PAL及PPO活性,抑制酚类物质的合成及氧化,减少了褐变产物——醌类物质的形成,从而有效抑制了褐变现象的发生。     

PVP处理对黑皮油松外植体酚类物质形成及酶活性的影响

【目的】探讨黑皮油松组织培养中聚乙烯吡咯烷酮(PVP)处理对外植体中相关酶活性、酚酸类物质含量的影响,以寻找酶促褐变的主要底物,为黑皮油松组织培养褐变这一瓶颈问题的解决提供理论依据和技术支撑。【方法】以黑皮油松休眠叶芽为外植体,研究不同浓度PVP处理对其休眠芽褐化与萌发的影响,筛选适宜的PVP处理浓度,测定PVP最佳处理浓度下外植体中相关酶活性的变化,并利用高效液相色谱仪对酚酸进行定性和定量分析。【结果】添加300～1 500 mg·L~(-1)PVP可以有效抑制黑皮油松外植体褐变,促进其休眠芽的萌发。PVP处理第8天开始抑制外植体褐化,第24天褐化率达到峰值,随后趋于稳定,并以添加1 500 mg·L~(-1)PVP抑制外植体褐化的效果最佳,褐化率仅为25.56%,休眠芽萌发率也最高(37.78%)。与对照相比,PVP处理下多酚氧化酶(PPO)与苯丙氨酸解氨酶(PAL)的活性在处理过程中均处于较低的水平,但过氧化物酶(POD)活性变化规律不明显。从PVP处理的第4天开始,PPO活性显著下降;从第8天开始,PAL活性明显被抑制。在褐变加重的第8～12天,PVP处理下绿原酸含量下降幅度显著小于对照。与对照相比,PVP处理下,在0～12天内阿魏酸含量变化较小,但在16～32天时阿魏酸含量显著高于对照组。香豆酸含量在处理全程均维持在较低的水平。【结论】PVP处理可有效抑制黑皮油松休眠芽的褐化并促进其萌发,并以1 500 mg·L~(-1)的PVP处理效果最佳; PVP处理抑制PPO、PAL活性上升而使外植体褐变较轻;同时PVP处理可以保护绿原酸与阿魏酸不被氧化进而抑制组织褐变。     

防止欧洲七叶树组织培养中外植体褐变研究

外植体发生褐变现象是欧洲七叶树组织培养过程中的主要障碍。以侧芽为实验材料作不同处理,探讨其控制褐变的有效程度。结果表明:培养基添加琼脂8g/L,选择1/2MS为基本培养基,接种前用4%PVP处理外植体,在培养基中添加2000mg/L的PVP可有效抑制褐变的发生。黑暗培养不能减轻外植体褐变。     

紫枝玫瑰组织培养中抑制褐化措施的研究

研究探讨了不同取材时间、不同抗褐化剂及低温处理对紫枝玫槐外植体褐变的影响,结果表明:①取材时间尽量避免高温季节,以3~5月为宜;②在培养基中分别添加PVP、Vc、AC三种抗褐化剂,其中AC可有效抑制紫枝玫瑰茎段的褐化,同时促进了外植体的生长;③对外植体进行适当时间的低温处理可减轻外植体的褐变。     

预处理对板栗总酚含量及其氧化酶活性的影响

由于褐变与多酚氯化酶的活性及酚类物质的含量密切相关．而褐变又是制约板栗组织培养成功与否的关键,对板栗总酚含量及其氧化酶活性的影响进行了研究．采用不同采样时间、水冲洗时间处理板栗离体组织,测定了其总酚含量和多酚氧化酶活性．结果表明:4月25日所采样品,其总酚含量和多酚氧化酶活性均降到最低值;板票叶片经水冲洗1 h后．其总酚含量、多酚氯化酶活性降到最低值．因此．在进行板栗的组织培养时,采用4月下旬所采样品会有效地减轻外植体的褐变;采回的叶片先用水冲洗1 h后再进行组织培养,外植体褐变将会减小到最低程度．     

蒙古扁桃组织培养中愈伤组织褐化机理初探

选取不同培养时间及不同培养条件下的15个样品,通过分光光度法测量其总酚含量、多酚氧化酶(PPO)活性、超氧化物歧化酶(SOD)活性、过氧化物酶(POD)活性,发现除总酚含量与愈伤组织褐化情况相关外,较高的SOD酶活性与较低的POD酶活性也是导致愈伤组织褐化的重要因素。     

抗褐化剂对天女木兰芽外植体褐化与酚酸氧化的影响

[目的]确定引起天女木兰褐化现象的酚酸种类,筛选出最佳抗褐化剂及使用最适浓度。[方法]在B5培养基中分别添加各种抗褐化剂,芽外植体培养30 d后计算出褐化率,对褐化率结果进行统计分析,并比较三种抗褐化剂的抗褐化效果;另外,在组培过程中定期取样,利用HPLC测定芽外植体中咖啡酸、绿原酸和对香豆酸含量变化。[结果]表明:天女木兰芽外植体褐化过程中咖啡酸和绿原酸含量下降幅度较大,而对香豆酸含量下降幅度较小,说明咖啡酸和绿原酸容易被氧化,而对香豆酸较为稳定;三种抗褐化剂控制褐化现象发生的最佳效果排序为VCPVPCA;尽管PVP控制酚酸氧化效果不如CA,但是预防褐化效果确强于CA,其原因是由于二者抗褐化机理不同所致;VC使用的最适浓度为500 mg·L~(-1),如果超过此浓度会导致外植体褐化率增加;PVP最适浓度为1 000~1 500 mg·L~(-1),CA最适浓度为300 mg·L~(-1)。[结论]天女木兰芽外植体褐化底物是咖啡酸和绿原酸,而与对香豆酸无关;VC、PVP和CA三种抗褐化剂抗褐化机理各不相同,综合比较VC抗褐化效果最好,其次是PVP,CA排在最后。     

板栗组培过程中褐变研究初探

通过研究板栗组织培养过程中愈伤组织过氧化物酶(POD)和多酚氧化酶(PPO)的活性，结果表明，在板栗愈伤组织培养过程中多酚氧化酶(PPO)的活性与培养材料的褐变程度有一定的相关性，酶活性高，愈伤组织褐变严重。但过氧化物酶(POD)与褐变的关系不明显。通过在培养基中添加不同浓度的活性炭、抗坏血酸，以及培养于不同光照条件和不同培养温度，能够有效抑制多酚氧化酶的活性，减轻褐变程度，提高愈伤组织的产量和质量。     

红锥优树外植体褐化抑制方法研究

植物组织培养技术是红锥(Castanopsis hystrix)优树无性化推广的重要途径,但外植体诱导培养过程中的褐化现象严重影响了其高效组织培养再生体系的建立。文章通过对红锥外植体取材季节、木质化程度、灭菌处理、光照等技术要素以及防褐化剂种类等进行生长对比试验,结果表明:外植体取材季节对褐化率无显著影响;外植体木质化程度对褐化率有极显著影响(P0.01);采用75%酒精进行外植体灭菌与未采用酒精的外植体相比,褐化率增加15.0个百分点,褐化程度加剧,其中采用2 min的新吉尔灭(1%)+2.5 min升汞(0.1%)两者结合进行灭菌效果较好;低温预处理外植体及暗培养均未达到抑制褐化的效果;添加防褐化剂PVP 80 mg·L~(-1)、V_C1.0 g·L~(-1)均能有效抑制褐化,褐化率分别为33.3%、12.2%,且腋芽长势好。     

红锥优树外植体褐化抑制方法研究

植物组织培养技术是红锥（Castanopsis hystrix）优树无性化推广的重要途径,但外植体诱导培养过程中的褐化现象严重影响了其高效组织培养再生体系的建立。文章通过对红锥外植体取材季节、木质化程度、灭菌处理、光照等技术要素以及防褐化剂种类等进行生长对比试验,结果表明：外植体取材季节对褐化率无显著影响;外植体木质化程度对褐化率有极显著影响（P ＜0．01）;采用75％酒精进行外植体灭菌与未采用酒精的外植体相比,褐化率增加15．0个百分点,褐化程度加剧,其中采用2 min 的新吉尔灭（1％）＋2．5 min 升汞（0．1％）两者结合进行灭菌效果较好;低温预处理外植体及暗培养均未达到抑制褐化的效果;添加防褐化剂 PVP 80 mg·L －1、VC 1．0 g·L －1均能有效抑制褐化,褐化率分别为33．3％、12．2％,且腋芽长势好。     

鲜切新高梨褐变相关酶活性研究

测定了鲜切新高梨贮藏中的褐变度及多酚氧化酶（PPO）、过氧化物酶（POD）和超氧化物歧化酶（SOD）的活性变化,为控制鲜切新高梨贮藏期间的质量变化提供依据。结果显示,鲜切新高梨贮藏中褐变度不断增加,PPO活性在前7d急剧增加而后缓慢增加,POD活性在贮藏期逐渐增加,POD在整个贮藏过程中活性很高且变化很大,SOD活性在前4d逐渐增加而后下降。新高梨PPO、POD和SOD对褐变影响程度依次是PPO〉POD〉SOD。说明PPO、POD和SOD三者共同作用影响新高梨的酶促褐变。     

山茶花组织培养过程中的防外植体褐化试验

针对山茶花组织培养过程中外植体出现褐化的问题,用山茶花的嫩茎段及芽尖为外植体作不同的处理试验,以比较其减轻外植体褐化的效果。得出的结论为:黑暗条件下培养外植体、用1/1000抗坏血酸处理外植体、在培养基中加入一定比例的活性碳、在接种前再剪去一部分茎段外植体、对外植体勤转瓶这些措施在一定程度上可以减轻山茶花组培过程中外植体的褐化程度,从而提高其组培的成功率。     

楸子初代组织培养中防止外植体褐化的研究

为了防止楸子(Malus prunifolia Willd.Borkh)初代组织培养外植体褐化,设置选用不同外植体、消毒方法、培养温度、光照、6-BA浓度及不同防褐化剂类型与浓度研究楸子离体培养过程中外植体褐化影响因素。结果表明,选用当年生新枝上1~3cm的带芽茎段作为材料,使用0.1%HgCl_2消毒,4℃低温暗培养5d,并在培养基中添加1~2g/L抗坏血酸或0.5~2g/L聚乙烯吡咯烷酮及0.5mg/L的6-BA可以有效防止褐化,且植株生长旺盛,色泽正常,生长势较好。     

蝴蝶兰组织培养过程中减轻外殖体褐化的方法研究

采用表面活性剂（Tweens20）20×10^-6处理10min、70％酒精浸泡30s、0．5％的次氯酸钠溶液浸泡5min的方法消毒外殖体最佳；采用带腋芽的、抽4节的花梗为外殖体诱导率最高为90．2％，褐化系数最低9．8％；培养基中添加10mg／LAA和1000mg／LPVP抗褐化效果较好；添加了2000mg／L或1000mg／LAC的培养基褐变比对照轻；在诱导阶段蔗糖采用低浓度诱导效果较好；先采用低温（17～20℃）处理3～5d，然后转到正常温度培养，可以减轻褐化程度；增加光照强度外殖体褐变严重，黑暗培养的外殖体褐变发生推迟而且程度轻；蝴蝶兰在pH5．6时，褐化较轻。     

冬枣贮藏期间枣果褐变和发酵机理的研究

试验结果表明：1、气调贮藏可有效地延缓冬枣PPO活性高峰的到来,阻止总酚含量的下降,较好地保持了冬枣细胞膜的完整性,延迟了褐变的发生。2、枣果PPO的最适pH值为7.0。冬枣PPO作用的最适天然底物为没食子酸。3、冬枣在采后贮藏前65天内,乙醇含量逐步增多;65天后乙醇含量又略有下降,但在整个贮藏期间,CA的乙醇含量明显低于对照。气调贮藏会提高ADH的活性,尤其是在贮藏后期这种作用更加明显。     

无患子愈伤组织诱导与分化培养技术研究

为解决无患子组织培养中的难题,对愈伤组织诱导最佳外植体与基本培养基类型先进行筛选,再通过正交试验设计,筛选愈伤组织诱导植物生长调节剂、生长及分化培养最佳抗褐化剂和植物生长调节剂种类与浓度水平。结果显示：(1)1 a生嫩茎段是无患子愈伤组织诱导最佳外植体;(2)培养基中添加20.0 mg/L抗坏血酸和10.0 mg/L半胱氨酸能有效抑制愈伤组织褐化现象的发生;(3)以改良MS作为基本培养基,外加6-苄基腺嘌呤(6-BA)0.6 mg/L+糠基腺嘌呤(KT)0.15 mg/L+2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)3.0 mg/L植物生长调节剂浓度组合,愈伤组织诱导率最高,结构致密;(4)愈伤组织团在改良MS外加6-BA 3.0 mg/L+萘乙酸(NAA)0.4 mg/L+吲哚丁酸(IBA)0.25 mg/L植物生长调节剂浓度组合下,不定芽诱导率最高,芽苗健壮。     

防止紫叶黄栌组织培养中外植体褐变的研究

文章研究了紫叶黄栌组织培养过程中,取材时期、灭菌时间、培养基中附加物种类和浓度对外植体褐变的影响。结果表明,1月取休眠枝条水插培养后抽生的嫩茎作外植体,经0.1%HgCl2灭菌2~3min,外植体褐变程度最轻。培养基中添加1.0 mg.L-1Vc可以有效抑制褐变的发生。     

峨眉拟单性木兰多酚氧化酶活性与总酚含量的初步研究

以峨眉拟单性木兰嫩枝茎段为测试材料,研究多酚氧化酶(PPO)活性和总酚含量及其季节变化规律。结果表明,测定峨眉拟单性木兰PPO活性的最适pH值为7.0,最佳底物为0.14 mol.L-1的邻苯二酚,最佳温度为25℃;峨眉拟单性木兰PPO活性在生长期明显高于休眠期;峨眉拟单性木兰总酚含量在每年的4月、5月、9月3个时段最低,为无性繁殖取材最佳时间。     

锥栗保鲜工艺的研究

以锥栗为材料,研究锥栗的保鲜工艺。通过将10%的竹叶提取液,0.03%的纳他霉素对不同浓度的紫胶(A),柠檬酸(B),EDTA-2Na(C)进行正交试验,测定锥栗的PPO活性、POD活性、单宁含量和褐变度(BD)指标,筛选优化的涂膜保鲜剂配方组合。结果表明:筛选出的最优化保鲜剂组合为A1B2C2,即紫胶2%、柠檬酸0.2%、EDTA-2Na(0.15%、竹叶提取液10%、纳他霉素0.03%。该保鲜剂在锥栗的贮藏过程中有效地抑制了PPO活性、POD活性,降低了单宁含量和褐变度,减少锥栗褐变的发生,呈现出较好的保鲜效果。