利用SRAP分子标记分析杨属遗传变异和亲缘关系

[目的]对采集自不同地区的22个杨属树种33个样本的遗传变异和亲缘关系进行研究。[方法]利用从72对引物中筛选出的40对相关序列扩增多态性(SRAP)引物组合对杨属不同树种进行遗传变异和亲缘关系分析。[结果]40对引物共扩增出487条清晰条带,其中,多态性条带为441条,多态性条带比率为90.55%。利用UPGMA得到的聚类分析结果表明了33个样本间的遗传关系,遗传相似系数为0.448 6～0.910 3;白杨派和胡杨派的派间平均遗传距离最大,为0.377 7。聚类分析结果表明,33个样本可分为4大类,这一聚类结果与传统的分类结果一致。通过系统发育树可以看出,白杨派单独形成一个分支,黑杨派、胡杨派和青杨派形成另一分支,可能暗示白杨派与其他各派的亲缘关系较远,青杨派与黑杨派和胡杨派的亲缘关系则比较近。[结论]不同的杨树品种在SRAP位点有较高的多态性,SRAP分子标记适用于分析杨属的遗传变异和亲缘关系,研究结果为杨属树种的分类鉴定、系统进化等提供了一定的理论依据。     

松树脂溃疡病菌及其近缘种AFLP分析

利用AFLP分子标记技术对松树脂溃疡病菌及其近缘种进行DNA指纹分析,筛选出10对多态性较高的引物.上述引物在供试的9种17个菌株中共扩增出298条带,其中有多态性带283条,多态性位点百分率为94.97%.每对引物产生的多态性位点百分率在89.29%-100%之间,表明松树脂溃疡病菌及其近缘种间在DNA水平上存在广泛变异.根据AFLP标记结果计算松树脂溃疡病菌及其近缘种间的相似系数,对它们的亲缘关系进行定量描述.聚类分析结果表明,菌株间的聚类与生物学种分类的结果一致.分析引物E-AT/M-CAA绘制的镰刀菌AFLP指纹图谱遗传多样性,确定李瑟组镰刀菌各交配群的特异带、差异带,区分供试的7个交配群.     

97个山杏无性系的遗传多样性及SSR指纹图谱

【目的】山杏是北方半干旱地区重要的生态经济型树种,种质资源异常丰富,形态鉴定与分类难度大。利用SSR分子标记研究山杏优选无性系的遗传多样性并构建指纹图谱,以期为山杏种质鉴定提供科学依据。【方法】根据山杏简化基因组测序结果,合成600对SSR引物,利用4个山杏无性系进行引物筛选,选出155对扩增条带清晰的引物,对97个山杏优选无性系进行PCR扩增。应用引物组合法构建指纹图谱,采用非加权组平均法(UPGMA)进行聚类分析。【结果】利用155对SSR引物对97个山杏无性系进行扩增,共扩增出933个等位基因,每个位点的等位基因数为3~11个,平均为6.019个;各位点的多态性信息含量(PIC)为0.476~0.885,平均值为0.681,具有较高的多态性。50个山杏无性系在59个位点上具有特异等位基因,89个无性系在131个位点上具有特异基因型。采用5对引物(L56、X47H、L79H、P40H和X47)的组合可区分全部97个无性系,构建了指纹图谱。对97个山杏无性系进行亲缘关系分析,无性系间的遗传相似系数变化范围为0.669~0.943,平均值为0.757;基于遗传相似系数进行聚类分析,将97个无性系分为5大类,第1大类和第2大类下又分为3个亚类,分类结果与无性系的来源区域有明显的相关性。【结论】从600对SSR引物中筛选出155对,其扩增位点多态性较高、重复性较好。发现89个山杏无性系具有特异基因型,其中50个既具有特异基因型也具有特异等位基因。应用引物组合法构建了基于5对SSR引物扩增位点的山杏无性系指纹图谱。供试山杏无性系遗传差异较小,亲缘关系较近。研究结果可为山杏种质鉴别提供科学依据,也为山杏的育种工作奠定基础。     

湖南省部分柚及近缘种遗传多态性的SRAP分析

采用新型分子标记SRAP技术对湖南省32份柚类及近缘种进行遗传多态性分析.筛选110对引物,选取稳定的12对引物扩增基因组DNA,各引物组合产生10～23条扩增带,共获得172条带,其中150条为多态性条带,每对引物平均提供12.5个标记信息.由UPGMA方法得到的聚类分析结果表明SRAP标记是一种能够较好的区分柚类种质的分子标记.     

31个种源东部白松SRAP指纹图谱分析

采用8对SRAP引物对加拿大31个种源的东部白松进行分析,获得104个扩增位点,多态性位点79个,平均多态性水平76%,每对引物产生等位基因7～22个,条带分布100～1 000 bp。各种源相互间相似系数为0.653 8～0.951 9,平均0.830 5。引物组合ME1-EM6与ME7-EM7可将31个种源区分开。     

油茶岑软3号组培苗遗传稳定性SRAP分析

为了了解油茶在以芽繁芽组织培养过程中的无性系变异情况,利用扩增条带清晰的39对SRAP引物组合对油茶优良品种岑软3号组培苗进行分子检测,检测结果表明:39对引物组合对供试的26株组培苗都能扩增出220个条带,总共扩增出5 760个遗传位点,个体之间未检测到遗传位点的明显差异。这表明岑软3号在以芽繁芽的该组织培养体系中具有较好的遗传稳定性,为油茶良种的推广提供了强有力的技术支撑。     

基于松属不同树种EST序列的马尾松SSR引物开发

利用松属5个树种的EST序列,分别树种查找SSR位点,采用Primer3．0软件进行引物设计。设计的5个树种的EST-SSR引物中：所占比例最高的均为三核苷酸重复,其次是六核苷酸重复,两者之和都达到了64％以上;四核苷酸重复所占比例均为最低。从设计的引物中分别不同树种各选取20对进行引物合成和通用性检测以及马尾松群体检测,结果表明：松属5个树种的EST序列开发的马尾松SSR引物,其在马尾松中的扩增成功率为60％-80％;最高的是辐射松,最低的是海岸松,平均为72％。通用性最好的为辐射松,属内的通用性为94％;属间和科间通用性也分别达到75％和44％。不同树种序列来源的EST-SSR引物,其扩增成功率在10％-30％;最高的是北美短叶松,其次是辐射松,最低的是扭叶松和火炬松;平均为17％。     

14个油茶良种遗传多样性的SRAP分析

对14个油茶良种进行SRAP标记(序列相关扩增多态性)的遗传多样性分析。采用改良CTAB法提取的油茶叶片基因组DNA为模板,利用优化的SRAP-PCR反应体系,从16个正向引物和20个反向引物中筛选出条带特异、多态性好、稳定性高的8对引物组合。利用这些引物组合对14个油茶良种扩增出65条清晰可重复的条带,其中22条是多态性条带,多态性条带百分率为33.85%。通过生物学软件对所得数据进行遗传学分析,计算出遗传相似系数,绘制出分子聚类图,为油茶良种的后续分子鉴定及分子育种提供了科学基础。     

新疆野苹果优选无性系DNA指纹图谱构建及亲缘关系鉴定

新疆野苹果是苹果属重要的抗逆育种资源,观赏价值较高,是园林绿化的优良树种。以18个新疆野苹果无性系为研究对象,基于SSR分子标记技术对其进行分子鉴定,并构建了DNA指纹图谱。结果表明:13对SSR引物共扩增出62条条带,每对引物扩增条带数在3～6条之间,平均每对引物扩增条带4.77条,每对引物的多态位点百分比为100%,各引物的多态性信息含量PIC值的变化范围为0.512～0.879。在遗传距离0.566处,18个新疆野苹果无性系被分成4类,第一类为M-1、M-14、M-13、M-16、M-3、M-4、M-6等7个无性系;第二类为M-15 1个无性系;第三类为M-2、M-5、M-9、M-11、M-12等5个无性系;第四类为M-7、M-17、M-18、M-8、M-10等5个无性系。基于SSR扩增结果,构建18个新疆野苹果无性系的DNA指纹图谱及二维码。     

短枝木麻黄无性系鉴定及其指纹图谱构建

[目的]构建木麻黄无性系的DNA指纹图谱鉴定体系,为今后短枝木麻黄的品种鉴定、品种权保护、新品种的选育提供依据。[方法]从71对EST-SSR引物中筛选出扩增条带清晰、多态性好、扩增稳定的12对引物,采用降落PCR和毛细管电泳的基因分型方法,以采集的9个短枝木麻黄标准无性系的基因分型结果为参照,对华南沿海地区采集的109个短枝木麻黄无性系单株进行鉴定,并结合引物组合法构建基于EST-SSR分子标记的短枝木麻黄无性系鉴定体系。[结果]12对EST-SSR引物对109个短枝木麻黄无性系单株进行PCR扩增,共检测到50个等位基因,每个位点的等位基因数为3～6个,平均为4.2个,每对引物可区分2～5个短枝木麻黄无性系。根据鉴定结果,最终所有样品被划分为22个无性系,除已知的9个标准无性系外,另有13个无性系为不知名无性系,说明不同地区的无性系存在重复命名现象;利用引物组合法进一步优化后,发现只需7对引物就可将22个短枝木麻黄无性系完全区分,并依此建立了基于7对EST-SSR引物的22个短枝木麻黄无性系的指纹图谱,每个无性系都获得了一个7位数的指纹图谱编码。[结论]利用7对EST-SSR引物构建的22个短枝木麻黄无性系的DNA指纹图谱可用于短枝木麻黄无性系的鉴别,研究表明,华南沿海地区部分短枝木麻黄无性系存在命名混乱、同物异名、无性系数量少的现象,新品种选育工作亟待开展和加强。     

湿地松、加勒比松种质资源遗传多样性分析

应用SSR与SRAP分子标记技术分析22份湿地松和28份加勒比松种质资源（其中包括15份洪都拉斯加勒比松样品、9份古巴加勒比松样品、4份巴哈马加勒比松样品）的遗传多样性,结果表明,在SSR分析中,14对SSR引物产生的多态性比率为89％,平均每对引物获得多态性条带4．3条;SRAP分析中,12对SSR引物产生的多态性比率为72％,平均每对引物获得多态性条带2．8条;SSR和SRAP标记综合分析表明,参试材料遗传距离变化范围为0．075-0．633,种质资源间存在丰富的遗传多样性。     

湿地松、加勒比松SRAP反应体系的优化及引物筛选

采用正交设计L9(34)对影响湿地松、加勒比松SRAP反应体系的DNA浓度、dNTPs浓度、引物用量、Taq DNA聚合酶浓度4个因素进行了优化试验,结果表明:扩增反应体系5优于其他体系,即25μL体系中含有DNA 40 ng、dNTPs 1mmol/L、引物10 μmol/L、DNA聚合酶1.0U.在此基础上,通过单...     

湿加松无性系苗龄与造林效果相关性分析

采用7、10、11和16个月生的湿加松无性系扦插苗造林,对造林成活率及5年生时的保存率和生长量调查分析结果显示：湿加松的成活和保存率比湿地松略低,但生长量明显大于湿地松,说明湿加松生长优势明显,有较大的推广价值;4种苗龄的湿加松无性系苗造林效果比较,10、11和16个月苗龄的湿加松苗造林后的成活率、保存率和生长量均显著优于7个月苗龄的湿加松苗。综合考虑育苗成本和造林效果,认为采用10或11个月苗龄的扦插苗造林效果好。     

湿地松×洪都拉斯加勒比松F1杂种的多性状综合评价

根据1块种植于广东省台山市红岭种子园的湿地松×洪都拉斯加勒比松F1杂种测定林的7年生数据,就杂种的生长量、树干通直度、分枝习性与湿地松、加勒比松进行了比较分析。结果表明,F1杂种的生长优势突出,树高、胸径、材积分别为9．18m、14．96cm、0．08645m^3,相对于湿地松、洪都拉斯加勒比松和古巴加勒比松种子园混合种的材积现实增益分别为315．23％、46．35％、114．89％。此外,杂种的树干通直度得分、冠幅、枝角、枝径、枝数分别为1．54分、3．45m、68．93°、1．84am、3．35条,其树干通直度得分与母本湿地松接近而显著低于父本洪都拉斯加勒比松,冠幅和枝径与父本相似而显著大于母本,枝角介于父、母本之间,枝数与父、母本没有显著差异。     

湿加松优良家系丰产林生长表现

利用广东省湿加松良种选育协作组研制的14个优良杂种家系的扦插苗木在广东省台山市红岭种子园内营建试验示范林7 hm2,利用优良杂种家系的混合扦插苗木在广东省台山市赤溪镇营建丰产林120hm2。试验示范林5.5年生时的数据表明,优良家系扦插苗木的树高、胸径、材积生长可达到6.69 m,11.31cm,0.03603 m3,其材积生长比作为对照的湿地松、洪都拉斯加勒比松分别大136.59%,15.49%;3.5年生的丰产林的平均树高、胸径、材积分别为3.50 m,5.62 cm,0.0054 m3,材积生长比作为对照的湿地松大350%。该结果充分显示了湿加松优良家系的生长优势,说明湿加松可在广东中南部地区通过扦插扩繁、大量推广。     

湿加松的SSR反应体系优化

对湿加松SSR反应体系中模板DNA的用量、Mg^2＋浓度、dNTPs及Taq酶的用量、变性温度、退火温度、反应循环次数共7个影响SSR扩增效果的因素,逐一设置单因素多水平进行试验,以目测比较确定谱带条数、亮度、清晰度、背景透明度以及结果的重复性等为判定反应条件适合程度的指标,其反应体系为25uL,扩增程序经优化后确定为：10ng的模板、1×PCR缓冲液、2．5mM的Mg^2＋、0．2mMdNTPs、0．6UTaq酶、正反向引物各0．2uM;最优反应程序为94℃预变性2min之后进入循环,每个循环94℃变性45s,退火45S,72℃延伸45S。退火温度从Tm开始,每隔2个循环降低1℃,直至（Tm-10℃）,维持40个循环。循环结束,72℃延伸5min。     

F2代湿加松和火炬松引种试验林早期生长分析

引进湿加松、火炬松家系建立了引种试验林,并以本地马尾松做对照。4 a生调查结果表明:F_2代湿加松和火炬松生长速度明显优于本地马尾松,湿加松具有生长快、适应性强的特点,在闽北地区具有推广造林的潜力。     

5种松树造林的适生性研究

对樟木头林场引种的4种松树及马尾松7年生林分的生长状况进行调查。结果表明，加勒比松巴哈马变种和湿地松具有良好的冠形和干形，有一定的生长潜力；而马尾松的树高生长虽然较快，但自然整枝较差。树干不通直，且虫害较严重。抗性差；加勒比松古巴变种的抗逆性差。生长速度慢。三级木比例大，适生性较差。     

松属树种生长量和产脂力的比较分析

对7个松树树种的材积和产脂力进行测定分析，结果表明：地点、重复对材积和产脂力的影响均不大，树种间材积和产脂力差异规律不明显。4个年度数据中，9年生和15年生材积差异达显著和极显著水平，9年生和16年生时产脂力均达显著差异。从树种平均值分析来看，热带松、本种加勒比松和马尾松生长相对较快，而湿地松、巴哈马加勒比松以及火炬松则生长较慢；产脂力较高的是热带松、巴哈马加勒比松、马尾松优树混合种，属中等产脂力的是本种加勒比松和湿地松，产脂力较低的是垌头群马尾松（对照）和火炬松。     

杂交松组培技术研究初探

研究杂交松组织培养过程中继代与生根培养基的激素种类与浓度配比,结果表明：诱导杂交松不定芽增殖的理想激素组合是BAP2．0mg／L＋NAA0．2mg／L,不定芽增殖系数较高,且芽生长健壮。杂交松不定根诱导难度较大,生根率最高达50％。杂交松不定根诱导的适宜培养基有待进一步研究。