绵麦冬多糖的分离纯化及自由基清除活性

绵麦冬经乙醇除脂后,用超声波辅助法进行提取,再经三氯乙酸除蛋白,乙醇沉淀后得粗多糖(CP).用DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换柱色谱分离纯化粗多糖,并进行光谱学分析和自由基清除活性探讨.结果显示:经离子交换柱首次分离出1种中性糖(NP)和3种酸性糖(AP).中性糖的1,1-二苯基-2-三硝基苯肼...     

软枣猕猴桃“龙成2号”果实中多糖提取及纯化工艺优化

采用水提醇沉法和微波法提取"龙成2号"软枣猕猴桃果实多糖,用单因素分析法比较提取效果,获得最优提取工艺;采用DEAE-52纤维素阴离子交换柱层析法对粗提物进行分离纯化,绘制洗脱图谱,用单因素分析法比较纯化效果,获得最优纯化工艺。经透析、浓缩及冷冻干燥获得纯化多糖,保存备用。水提醇沉法提取多糖最优工艺条件:水浴及醇沉时间均为4 h,无水乙醇量为4倍样品体积,多糖提取率9.29%。微波法提取多糖最优工艺条件:料液比1︰30 g·m L-1,功率400 W,多糖提取率4.35%。且水提醇沉法提取效果优于微波法。DEAE-52纤维素阴离子交换柱层析法纯化多糖最优工艺条件:上样量10 m L、4 m L/管收集。经蒸馏水,0.1、0.2、0.3 mol·L-1Na Cl洗脱后得率分别为16.1%、7.2%、4.5%、2.3%。     

偏肿革裥菌锰过氧化物酶的分级纯化

【目的】研究白腐菌偏肿革裥菌(Lenzites gibbosa)锰过氧化物酶(MnP)的分级纯化,以期得到L.gibbosa MnP的纯品和进行后续酶学性质研究。【方法】在对L.gibbosa所产MnPs进行优化培养、获得大量MnPs粗酶液的基础上,通过硫酸铵(NH4)2SO4分级盐析、聚乙二醇(PEG)沉淀进行粗酶液浓缩、在起始缓冲液中进行透析、经DEAE-琼脂糖CL-6B离子交换柱层析进行梯度洗脱和葡聚糖G-75凝胶过滤柱层析等方法对MnPs粗酶液进行纯化,并对分级纯化方法进行优化,对纯化浓缩后的纯酶样品采用SDS-PAGE方法进行酶纯度检验。【结果】在75%、80%和85%这3种(NH_4)_2SO_4饱和度中,85%的(NH_4)_2SO_4是沉淀MnPs的适宜饱和度,在该饱和度下测得上清液中酶活为3.63 U·L~(-1),蛋白浓度为0.132 mg·mL~(-1),表明MnPs已基本沉淀完全;试管小试法确定离子交换柱层析中上样的最适缓冲体系为pH7的Na_2HPO_4-NaH_2PO_4起始缓冲液;离子交换柱层析后收集的洗脱液检测到3个蛋白吸收峰,其中只在第2个蛋白吸收峰中检测出MnP活性,该MnP活性值变化曲线与蛋白吸光值一致。这个活性峰经凝胶过滤柱层析后,洗脱结果只出现1个明显的蛋白吸收峰,在其中检测出较高的MnP活性;浓缩后的冻干样品经SDS-PAGE电泳检测只在约40 k Da处有1条清晰的蛋白谱带,表明对MnP的纯化已达到电泳纯。【结论】筛选出85%饱和度的(NH_4)2_SO_4盐析法是初期沉淀与纯化L.gibbosa所产MnPs的最适方法;PEG浓缩法简便、易行、有效;初期浓缩后再经过离子交换柱层析和凝胶过滤柱层析可以得到电泳纯的MnP纯化样品。     

老龙皮多糖的分离纯化及体外活性研究

地衣植物老龙皮富含多糖和三萜皂苷类化合物,是一种资源丰富的具有抗炎、抗氧化等活性的中草药。以老龙皮为原料,通过甲醇抽提脱脂、水浸提、三氯乙酸(TCA)法脱蛋白等方式粗提,然后分别采用梯度浓度乙醇分级沉淀法和DEAE-52纤维素柱层析的方法对老龙皮多粗多糖进行分级纯化。梯度浓度乙醇(乙醇质量浓度分别为15%,30%,50%和70%)分级沉淀得到4种多糖组分,以DEAE-52纤维素柱层析法洗脱得到5种老龙皮多糖组分。采用高效阴离子色谱(HPAEC)与红外光谱法(FT-IR)分析了老龙皮多糖组分的单糖组成和结构。研究结果表明,老龙皮多糖的单糖组成主要有阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖、甘露糖和木糖。其中,甘露糖含量最高,其次是半乳糖和葡萄糖。老龙皮多糖的红外光谱特征峰为3 417,2 911,1 659,1 400,1 026和831 cm-1。利用乙醇分级沉淀和DEAE-52纤维素柱层析洗脱所得的9种老龙皮多糖组分进行体外抗氧化活性研究,结果显示老龙皮多糖具有较强的清除DPPH自由基能力和总还原力。其中:50%质量浓度乙醇沉淀的老龙皮多糖组分的清除能力最强,清除率达80.10%; 15%质量浓度乙醇沉淀的老龙皮多糖组分的还原能力最强,其吸光值最高为0.74。     

伊菇820及香菇808单孢菌丝体多糖产量比较

实验以伊菇820为实验菌株,通过单因素实验,研究微波辅助提取香菇多糖的最佳提取时间。并测量伊菇820及香菇808单孢菌株菌丝体生长量,用微波法提取两种菌株的粗多糖。结果表明,用微波辅助提取香菇多糖在9min时有最大值,得率为6．17％。香菇808单孢菌株的菌丝体生长量及多糖产量均大于伊菇820。     

灵芝多糖体的提取及其理化性质的研究

灵芝是一种木材腐朽菌,具有良好的药用价值,在中国和其它一些国家享有盛誉。作者对赤(灵)芝(Ganoderma lucidum)子实体多糖的提取及其理化性质进行了研究。结果表明,粗多糖得率为1.38％,纯化后的糖经薄层色谱和气相色谱分析查明含有木糖、甘露糖、阿拉伯糖、半乳糖和葡萄糖,糖基比依次为1:1:1.7:5:20。用凝胶过滤得分于量约为23000和34000。经红外光谱测定该多糖在1050、1140、1420和3400cm~(-1)处均有明显的吸收峰。本文提出了一个从灵芝子实体分离和纯化多糖体的方法。     

海藻的提取方法

从海藻中提取多糖、植物增长激素、EPA、DHA等物质的方法,是将海藻粉碎、加酸浸提、加乙醇沉淀分级、酸水解等步骤、获得分子量不同的多糖产品;提取多糖后往海藻残渣中加乙醇浸提、回收溶剂、萃取、分离提纯得到蕨藻红素;提取多糖后的海藻残渣用乙酸乙脂萃取,回收溶剂,色谱分离得EPA和DHA的单酯衍生物,再酸水解、萃取、得EPA、DHA。     

一种经济有效的森林土壤粗品DNA纯化方法

尽管人们采用多种提取方法乃至使用商品试剂盒,但从森林土壤中获得纯品DNA仍然是比较困难的事情。本文经多次研究探索提出了一种经济有效的森林土壤粗品DNA进一步纯化方法。此方法由两步组成:1.利用提取缓冲液将提取的粗品DNA溶解,经氯仿/异戊醇去除杂质后,再用异内醇沉淀析出DNA;2.使用普通凝胶回收试剂盒回收柱进一步纯化DNA。结果表明:经第一步纯化后,82%-91%腐殖酸杂质被除去。经第二步纯化后,残留的少量腐殖酸杂质被去除干净。经上述连续的两步纯化后获得的DNA非常纯净,可直接用于对抑制物非常敏感的常规PCR反应。本研究报道的DNA进一步纯化方法有效、经济且省时。此外,采用其它各种提取方法获得的土壤粗品DNA均可使用本方法进一步纯化。图4表2参15。     

仙人掌超氧化物歧化酶提取与纯化工艺研究

为了实现对仙人掌资源的深度开发利用,试验研究了以规模化种植的食用仙人掌为材料,提取和纯化SOD的工艺路线和相关参数。去除新鲜仙人掌表面的刺和蜡质、清洗、榨汁、粗滤、超声波处理、离心,得仙人掌粗酶液,再经热处理、硫酸铵盐析和SephadexG-100柱层析分离纯化,高分子聚合物脱水,真空冷冻干燥,获得仙人掌SOD粗酶粉,得率为13.3mg/100g.fw,酶活力为860U/mg。超声波处理能够显著降低仙人掌原浆的黏稠度,提高出汁率,相应提高从原浆里提取SOD的得率。通过正交试验,超声波功率600W、温度40℃与时间20min的组合,所得仙人掌汁液SOD活力收率最高,达215.6U/mL。硫酸铵饱和度40%和85%分别用于除杂质和沉淀SOD目标蛋白具有纯化和浓缩的双重效果。     

灰树花多糖的分步酶解法提取工艺研究

首先采用纤维素酶、果胶酶、木瓜蛋白酶,分别对灰树花子实体进行酶解提取灰树花多糖,经正交试验获得各种酶的最佳工艺参数;然后依次分步采用纤维素酶、果胶酶和木瓜蛋白酶组合处理灰树花子实体提取灰树花多糖,并与传统的热水浸提法进行对比。结果表明：分步酶解法提取灰树花粗多糖的提取率可达28.62%,比传统的热水浸提法提取灰树花粗多糖的提取率提高了40.4%。经紫外光谱和红外图谱分析表明,分步酶解法提取灰树花多糖的纯度明显高于热水浸提法提取的灰树花多糖。