小麦成熟胚愈伤组织的诱导及分化

以4个基因型不同的小麦品种成熟胚为外植体进行离体培养,研究不同质量浓度2,4-D对愈伤组织诱导的影响;以陕253为外植体研究不同KT与NAA配比对小麦成熟胚愈伤组织分化的影响.愈伤组织培养基中2,4-D质量浓度为2～4 mg/L时,小麦成熟胚愈伤组织出愈率最高,品质最好.小麦对水分敏感程度与成熟胚愈伤组织的出愈率及品质...     

不同培养基及激素配比对小麦成熟胚离体培养的影响

[目的]建立适于优良小麦品种遗传转化的高效组织培养再生体系。[方法]以小麦品种豫麦18和豫麦70成熟胚为外植体,探讨了2种培养基和4种激素配比对小麦成熟胚离体培养的影响。[结果]L3培养基的平均愈伤组织诱导率和分化率都明显高于MS培养基,供试2个品种平均出愈率达91.0%以上,平均分化率达46.4%。不同激素及其配比均可诱导小麦成熟胚愈伤组织分化,但不同处理分化率差别很大(10.5%~50.0%);以L3为分化培养基,同时添加2,4-D 0.1mg/L,6-BA 1.5 mg/L的激素配比更有利于愈伤组织的分化,平均分化率达到50.0%。[结论]MS、L3两种基本培养基对小麦成熟胚愈伤组织诱导率均比较高,且差别不大。不同激素配比对小麦成熟胚愈伤组织分化率影响很大。     

小麦成熟胚愈伤组织诱导条件优化的研究

[目的]筛选小麦成熟胚愈伤组织诱导的最适培养条件。[方法]采用正交设计试验,以2个小麦品种扬辐2号和皖麦41的成熟胚为外植体,研究不同基本培养基和激素配比对愈伤组织诱导的影响。[结果]在MS、1/2 MS、N63种基本培养基中,1/2 MS对小麦成熟胚愈伤组织诱导效果最好。IAA对扬辐2号成熟胚愈伤组织诱导有一定的影响,KT对皖麦41成熟胚愈伤组织诱导作用显著。1/2 MS+2,4-D4.0 mg/L,愈伤组织质量最好。不同小麦品种成熟胚离体培养力存在着差异,皖麦41优于扬辐2号。[结论]该研究为小麦成熟胚离体培养提供了参考。     

小麦成熟胚再生体系影响因素的研究

[目的]研究小麦离体培养的影响因素,探索小麦成熟胚愈伤组织诱导、继代、分化和植株再生的有效方法,建立一套成熟的植株再生体系,为进一步转基因研究奠定基础。[方法]采用河南的5个不同小麦品种,经小麦种子消毒,无菌取胚,然后接入诱导培养基进行愈伤组织诱导,愈伤组织再经继代培养、分化培养以至小麦植株再生。通过对它们浸种时间和成熟胚离体培养过程的观察,研究了不同预处理时间和植物激素,如2,4-D、ABA、KT、IAA和NAA,对小麦成熟胚愈伤组织在诱导、继代、分化和植株再生方面的一些影响。[结果]15h的浸种时间效果好;4.0mg/L2,4-D有利于愈伤组织形成;在继代培养基中添加0.3mg/LABA有利于小麦致密愈伤组织的诱导及再生能力的保持;KT和6-BA对提高芽的分化有显著作用;附加浓度1.5mg/LNAA和0.2mg/LIAA的1/2MS培养基可有效促进生根。[结论]浸种时间、基因型对小麦愈伤组织的继代、分化和再生有很大的影响,添加一定的外源激素有利于提高其植株的再生频率。     

小麦成熟胚愈伤组织的诱导与分化

[目的]筛选再生能力强的基因型小麦品种,建立高效的小麦成熟胚高频植株再生系统。[方法]以小麦品种抗冻早-30、百麦4411和06-4046的成熟胚为外植体,以MS为基本培养基,添加不同激素,组配诱导、继代、分化和生根培养基,通过胚性愈伤组织诱导。探讨影响小麦愈伤组织诱导和分化的因素。[结果]2,4-D浓度为1—5mg／L时对3个小麦品种愈伤组织的诱导差异不大,诱导率均高于80％,但2,4-D浓度为2mg／L时更有利于诱导胚性愈伤组织,诱导率在90％以上;在抗冻早-30和百麦4411分化培养基中加入2mg／L KT有助于提高分化率和再生率,在06-4046分化培养基中加入0．5mg／L KT对小麦成熟胚的分化和再生苗比较有利。[结论]在MS培养基中添加2mg／L2,4-D和一定量的KT可促进小麦成熟胚愈伤组织的诱导和分化再生苗。     

小麦成熟胚诱导愈伤组织研究

以小麦成熟胚为外植体进行离体培养,研究不同预处理温度、消毒剂、胚的放置方式、2,4-D(2,4-二氯苯氧乙酸)浓度等因素对愈伤组织的质量和诱导率的影响.结果表明:低温预处理使愈伤组织的诱导率提高,但差别不显著;0.1%HgCl(2)(氯化汞)消毒处理比20%NaClO(次氯酸钠)处理效果要好;将成熟胚盾片向上放置可明显提高愈伤组织的诱导率;培养基添加2 mg/L 2,4-D时,2个小麦品种愈伤组织诱导率均高达80%,但随着2,4-D浓度的升高或降低,2个品种的诱导率均呈现下降趋势,不同品种间诱导率差异不大;在继代培养基中添加0.5 mg/L6-BA和0.3 mg/L ABA可以显著改善愈伤组织的质量,并且能提高胚性愈伤组织的产生率.     

小麦幼胚培养特性对外源物质响应的研究

以豫麦49、豫麦18和兰考906为试验材料,研究了不同外源物质(2,4-D、ABA和AgNO3)对小麦幼胚愈伤组织培养特性的影响。结果表明不同浓度外源物质间小麦幼胚胚性愈伤组织诱导率和愈伤组织绿点率差异均达到0.01显著水平,其中以2.0~3.0 mg/L 2,4~D、2.0 mg/L2,4-D 0.1 mg/L ABA和2.0mg/L 2,4-D 0.1 mg/L ABA 5.0mg/L AgNO3浓度处理适宜小麦幼胚胚性愈伤组织诱导和愈伤组织分化。在适宜浓度2,4-D、ABA和AgNO3培养条件下,3个供试品种间胚性愈伤组织诱导率和愈伤组织绿点率差异达到0.01显著水平,其中以豫麦18胚性愈伤组织诱导率和愈伤组织绿点率最高。     

玉米自交系幼胚再生体系建立的研究

[目的]探索出玉米高频诱导具有胚性的愈伤组织和植株再生的条件。[方法]以玉米自交系幼胚为外植体,研究了不同2,4-D浓度对愈伤组织诱导、6-BA浓度对试管苗分化以及IBA浓度对试管苗生根的影响。[结果]2,4-D对玉米胚性率诱导有明显影响,其最佳诱导培养基为N6＋2,4-D 2 mg/L＋水解酪蛋白（CH）500 mg/L＋脯氨酸（pro）500 mg/L＋AgNO310 mg/L;试管苗分化适宜的培养基是N6＋6-BA 0.5 mg/L＋水解酪蛋白500 mg/L;试管苗生根的最佳培养基为1/2 MS＋IBA 0.5 mg/L。[结论]该研究可为玉米抗病基因的遗传转化和优良抗病玉米品种的培育奠定基础。     

白皮松成熟合子胚的胚性愈伤组织诱导研究

[目的]建立白皮松体细胞胚胎发生快速繁殖体系,诱导出胚性愈伤组织。[方法]以白皮松成熟合子胚为外植体,以DCR作为基本培养基,研究不同浓度激素对外植体发育和胚性愈伤组织得率的影响。同时在不同激素浓度下对培养4周的外植体外形以及胚性愈伤组织进行了观察与分析。[结果]培养基中加入2,4-D可以使得外植体生长减慢,并出现愈伤组织,6-BA则使外植体的子叶变长,膨大并玻璃化。当2,4-D浓度为8mg/L、6-BA浓度为2mg/L时,胚性愈伤组织的诱导效果较好,诱导率平均为40.625%,该愈伤组织为白色半透明状,细胞小而细胞质浓,说明高浓度2,4-D和低浓度6-BA有利于白皮松成熟胚的胚性愈伤组织的获得。[结论]合适的激素种类和浓度是诱导白皮松成熟胚产生胚性愈伤组织的关键因素。     

根癌农杆菌介导的水稻遗传转化体系的研究

[目的]对新疆推广种植的水稻品种进行组织培养,探索适合新疆水稻品种的遗传转化条件,为新疆水稻的遗传改良工作奠定基础.[方法]以新疆3个水稻品种成熟胚诱导的良好胚性愈伤组织为受体,以SiPEBP为目的基因,应用农杆菌介导法对水稻进行遗传转化,同时以抗性愈伤率为依据,对影响转化的愈伤诱导率、农杆菌侵染浓度、时间和共培时间进行优化研究.[结果]在NB培养基中添加2 mg/L的2,4-D的愈伤诱导率高;相比25℃、暗培养,28℃、持续光照培养可使诱导率提高到100;,且缩短了诱导周期;在OD600值为0.3的农杆菌菌液浓度,侵染愈伤30 min,共培养2d,同时添加一张无菌滤纸,有利于提高转化效率;通过培养条件的优化,3个水稻品种的抗性愈伤率均达到40;以上.[结论]新疆水稻农杆菌转化的几个主要因素,建立了农杆菌转化体系.     

小麦洛夫林10悬浮细胞系培养条件的优化与筛选

[目的]优化和筛选小麦洛夫林10悬浮细胞系培养的条件。[方法]以成熟胚为外植体,探讨了附加不同浓度KT对愈伤组织诱导和继代培养的影响,并通过调整2,4-D、KT和蔗糖的浓度及初始接种量对悬浮细胞系的培养条件进行了优化筛选。[结果]小麦洛夫林10愈伤组织的诱导培养基中不宜加入KT;初始接种量为1.5 g,液体培养基中添加1.00~2.00 mg/L 2,4-D、0.05~0.10 mg/L KT和30.00g/L蔗糖,最有利于小麦洛夫林10悬浮细胞系的稳定。[结论]为以悬浮细胞系为材料深入开展小麦抗病机制的研究奠定了基础。     

小麦成熟胚的组织培养

【研究目的】为了筛选出小麦(TriticumaestivumL.)成熟胚(MEs)培养和遗传转化受体材料的优良基因型,【方法】以27份优良普通小麦冬性主栽品种或高代育种品系为试材,采用整粒切胚诱愈方法(endosperm-supportedmethod),对小麦成熟胚进行组织培养研究。【结果】结果表明,在成熟胚培养过程中光照、温度、培养基2,4-D浓度、基因型等因素对小麦成熟胚组织培养影响较大;同时小麦成熟胚组织培养存在着较强的基因型依赖性,不同基因型愈伤组织诱导率、分化率、成苗率的差异具有统计学意义(P<0.01)。通过研究从27个小麦基因型中筛选出了3个适合于成熟胚整粒切胚诱愈的基因型,即山农2618、泰山021、河北341,他们的成苗率分别达到了15.38%、25.27%、21.33%。【结论】小麦成熟胚组织培养优良基因型的筛选,为以后小麦的遗传转化和应用基因工程技术进行遗传改良奠定了基础。     

小麦成熟胚组织培养体系优化及优良转化受体基因型的筛选

为建立适于优良品种遗传转化的高效组织培养体系,本研究以3种山东省推广小麦品种（济麦19、良星99、鲁麦14）和模式品种Bobwhite为材料,以成熟胚为外植体对其愈伤组织进行诱导和分化,探讨了2,4-D不同浓度下的3种诱导培养基（MS、N6、MSB5）和4种激素配比的分化培养基对小麦成熟胚离体培养的影响。结果表明,N6培养基的诱导效果最好,平均诱导率超过了80%,且当2,4-D的浓度为4 mg/L时诱导效果最佳。4种激素配比均可诱导小麦成熟胚愈伤组织分化,但分化率较低且处理之间差别较大,添加0.5mg/L IAA和2 mg/L ZT的MS培养基的平均分化率最高,为22.58%。小麦基因型的差别主要影响其分化率的高低而对诱导率的影响不大,3个品种中用于转化的最佳品种为鲁麦14。     

高羊茅成熟胚愈伤组织诱导及植株再生

[目的]优化高羊茅成熟胚的组织培养条件。[方法]以高羊茅成熟胚为外植体,MS为基本培养基,探讨不同浓度激素和激素组合对愈伤组织诱导、继代培养及植株分化的影响。[结果]添加2,4-D2.0mg/L的MS培养基中愈伤组织的诱导率最高,达63.5%;在1.0～4.0mg/L范围内,随着培养基中2,4-D浓度的降低,愈伤组织的颗粒性增强,致密性增加,含水量下降,其中MS＋2,4-D2.0mg/L为愈伤组织继代的最佳培养基;愈伤组织在含2.0mg/L6-BA和0.10mg/LNAA的MS培养基上植株分化率最高,达80.2%;将再生苗转移至不含植物生长调节剂的1/2MS培养基上进行增殖、壮苗,然后将其移栽入沙质壤土中,移栽成活率可达90%。[结论]该研究建立了高羊茅的高效再生体系。     

洋葱胚性愈伤组织的诱导及增殖条件的研究

[目的]探讨洋葱离体培养的最佳条件,为建立其高频再生体系及转基因研究奠定技术基础。[方法]以洋葱(Allium cepa L.)种子为外植体,对洋葱愈伤组织的诱导、胚性愈伤组织获得及增殖的培养条件进行了初步研究。[结果]不同培养基种类对愈伤组织的诱导有影响,BDS优于MS和B5培养基;当培养基中24,-D浓度为0.5 mg/L时种子出愈率最高;适当降低生长素浓度,添加分裂素BA能够促进胚性愈伤组织的发生,且无分化现象产生,胚性愈伤组织诱导最佳培养基为BDS+24,-D 0.25 mg/L+BA 2.0 mg/L,增殖最佳培养基为BDS+24,-D 0.25 mg/L+BA 1.0 mg/L。[结论]该试验建立的基因转化受体系统为洋葱基因转化奠定了良好基础。     

药用植物草麻黄细胞的悬浮培养

[目的]对草麻黄的子叶诱导出的愈伤组织,进行悬浮培养。[方法]采用组织培养的方法进行了愈伤组织诱导、愈伤组织继代和悬浮培养研究。[结果]MS+2.0 mg/L 2,4-D+1.0 mg/L 6-BA为诱导子叶形成愈伤组织的理想培养基;MS+1.5 mg/L 2,4-D+1.5 mg/L6-BA是愈伤组织的适宜继代培养基;2.0 mg/L 2,4-D+1.5 mg/L 6-BA+300 mg/L水解酪蛋白(CH)是愈伤组织悬浮培养的适宜培养基,愈伤组织干重增加量为0.80 g。[结论]初步选择出草麻黄愈伤组织细胞的悬浮培养条件,为麻黄细胞扩大培养及有效成分提取奠定基础。