绿色木霉产纤维素酶菌种的优化及酶学性质研究

为了研究纤维素酶的酶学性质,以产纤维素酶的绿色木霉为出发菌株,采用微波诱变处理,对其发酵生产的纤维素酶酶学性质进行研究。结果表明,绿色木霉经微波诱变与原有菌种相比产酶活力提高30%以上;该酶分别在37℃和pH 5.0时,酶活性最高;在羧甲基纤维素底物保护下,酶的热稳定性大幅度提高;金属离子Ba2+、K+对酶有激活作用,Cu2+、Ca2+、Fe2+、Mn2+、Zn2+、Fe3+对酶有抑制作用。     

黑曲霉木聚糖酶曲盘发酵及其粗酶性质研究

为研究黑曲霉菌株(Aspergillus niger)XZ-3S曲盘发酵木聚糖酶条件及所产粗酶的性质,采用曲盘(大小φ20cm×4cm)进行固态发酵条件研究,并对所产粗酶进行酶学性质测定。结果表明:在培养基干料100g、初始料水比1∶1.7、初始pH自然状态、相对干物料接种量10%、中间定时翻曲补水和28℃连续培养60h条件下,酶活力最高可达24 380IU/g干曲;粗酶最适反应pH5.0,最适温度50℃;温度低于50℃、pH3.0~8.0的条件下酶较稳定;EDTA(活性物质)、Cu2+、Co2+对酶有明显的激活作用,Pb2+、Mg2+、Fe2+、Mn2+、Ca2+、Fe3+、Al 3+对酶有不同程度的抑制作用。     

塔吉克斯坦土壤产功能酶细菌筛选及其产淀粉酶的酶学特性

[目的]对塔吉克斯坦土壤细菌产功能酶菌株筛选及产淀粉酶的酶学特性的初步研究.[方法]采用透明圈法对从塔吉克斯坦土壤细菌产几种重要的工业用功能酶筛选.通过形态学观察、16S rDNA和gyrB基因序列测定对一株产高温淀粉酶的菌株进行鉴定,研究其淀粉酶的酶学性质.[结果]从塔吉克斯坦土壤中共分离细菌菌株110个,其中有产淀粉酶菌株70个、产蛋白酶菌株56个、产纤维素酶菌株37个、产脂肪酶菌株16个,占总菌株数比例依次为63.6;、50.9;、33.6;、14.5;.对筛选出产淀粉酶活性较高的T-17菌株的粗酶学性质测定表明,该淀粉酶具有高温、中性、耐盐淀粉酶的特性,最适催化温度是70℃,30～ 70℃维持较高酶活力,最适催化pH值为7.0,pH值在较稳定6.0 ～8.0,有较强的耐盐特性,在4 mol/L的NaCI浓度下仍能保持较高的酶活性,Ca2+和K+对酶具有较强的激活作用.经形态观察和分子生物学方法将T-17鉴定为巨大芽孢杆菌(Bacillus malacitensis).[结论]塔吉克斯坦土壤微生物产功能酶多样性丰富,筛选获得的高温淀粉酶具有一定的应用潜力.     

纤维素分解菌的分离及产酶条件研究

[目的]寻求最适宜的纤维素分解菌产酶条件。[方法]通过菌种筛选与鉴定试验,研究5种碳源(麸皮、滤纸、葡萄糖、蔗糖和CMC)、5种氮源(蛋白胨、硫酸铵、草酸铵、硝酸铵、柠檬酸)、培养时间、液体发酵培养基初始pH值和5个培养温度(22、263、03、4和38℃)对微生物产酶的影响。[结果]从土壤、牛粪样品中共分离出17株微生物菌株,其中1株T2菌丝密集,菌落在PDA培养基上生长快,经鉴定为木霉菌。T2菌株最适宜的产酶条件是:碳源为麸皮、羧甲基纤维素等纤维素物质、氮源为蛋白胨和硝酸铵、培养时间为3~4 h、液体发酵培养基初始pH值为4~6、培养温度为26~34℃。[结论]T2菌株在30℃下培养时,相应的滤纸酶活力、CMC酶活力最高值分别为10.72和47.52 U/g。     

芽孢杆菌N-6的鉴定及其产β-甘露聚糖酶最适条件的研究

为获得产酶量高、产酶快的菌株,采用碘液染色法从土样分离到1株产β-甘露聚糖酶量高的菌株Bacillussp.N-6,通过16 S rDNA序列相似性比较及生理生化性状鉴定为枯草芽孢杆菌;为得到最佳产酶配方进行了发酵条件优化。结果表明:100 mL培养基加入2 g魔芋粉、1 g酵母粉、1 g豆饼粉、起始pH 8.0、32℃150 r/min振荡培养18 h,产酶量最高,达316.53 U/mL。该酶在pH 5.0~9.0和40~55℃下稳定,作用最适条件pH 6.0和50℃。Co2 对酶有激活作用,Fe3 ,Ag 和EDTA对酶有较强抑制作用。     

产丝素蛋白酶菌株发酵条件的优化

采用单因素法,研究了产丝素蛋白酶菌株在发酵过程中,培养温度,培养基初始p H值,培养基碳源、氮源、金属离子等因素对产丝素蛋白酶菌株的发酵影响,最后通过对发酵产生的产丝素蛋白酶酶活及丝素蛋白降解的影响分析,来初步确定最佳发酵条件。研究结果表明:培养温度30℃,培养基初始p H值8.0,培养基中添加丝素,以玉米粉作为碳源,KNO3为氮源,以Mg2+作为金属离子,在该条件下发酵所得丝素蛋白酶活性最高,降解程度最大。     

产纤维素酶枯草芽孢杆菌C-36的产酶条件研究

以产纤维素酶的枯草芽孢杆菌菌株C-36为研究对象,从碳源、氮源、接种量、培养基初始pH、温度等方面研究该菌株的产酶条件,结果表明该菌产酶的最适碳源为2%的CMC-Na,最适氮源为2.5%的蛋白胨+酵母粉复合氮源,最佳接种量为4%,最适起始pH为5.0,产酶最适温度为37℃。在此条件下,培养36 h后达到产酶高峰,CMC酶活为196.33 U/mL,是优化前的3倍。     

海洋产几丁质酶微生物选育及组合发酵优化

[目的]探索海洋产几丁质酶微生物最佳的发酵组合。[方法]从唐山港曹妃甸港区海泥中分离筛选出2株几丁质酶活性强的菌株,研究不同的培养条件、诱变及组合发酵对菌株产酶的影响。[结果]通过紫外诱变产生的菌株的透明圈较大,直径在3~4 mm,但数量不多;培养基碳源以胶体几丁质最好,产几丁质酶的最适温度在32℃;pH在7.0~8.0产酶量最高;以蛋白胨和酵母粉为氮源对产酶的效果明显;添加Mn2+的培养基产酶能力最强;随着培养时间的增加,诱变的菌株组合发酵产酶后,几丁质酶活性显著提高。[结论]在组合发酵中,选取高产酶培养条件、不同来源的菌株混合培养对组合发酵有着重大的意义。     

海洋氧化短杆菌15E产碱性蛋白酶的发酵条件

对氧化短杆菌15E菌株(Brevibacterium oxydans)产碱性蛋白酶的发酵条件进行研究,结果表明,培养基初始pH值9.0、培养温度28℃、摇床转速200.rmin-1条件下培养40 h,菌体生长最适且总酶活力达到最大;菌株在添加5 g.L-1牛肉膏、1 g.L-1葡萄糖的酪蛋白培养基中生长和产酶均达到最佳;人工海水中的K+、Ca2+和Mg2+浓度较为适合15E菌株生长和产酶,其中K+对菌株产酶起关键作用.     

高产β-葡萄糖苷酶菌株的筛选及产酶条件优化

通过七叶苷平板法从腐殖质土壤中筛选得到高产β-葡萄糖苷酶的2个菌株(H_2和H_5),并利用单因素法对这2个菌株的产酶条件进行了优化。经形态学特征初步鉴定,菌株H_2和H_5均为黑曲霉(Aspergillus niger)。H_2的最优发酵条件为:以蔗糖为碳源,以硫酸铵+尿素(1∶1)为氮源,培养5 d,培养温度28℃,初始pH 4.0。H_5的最优发酵条件为:以红糖为碳源,以硫酸铵+硝酸铵(1∶1)为氮源,培养5 d,培养温度28℃,初始pH 4.5。在优化的各因素中,以培养温度对菌株H_2和H_5所产β-葡萄糖苷酶活力的影响最大。     

一株源于红树林土壤芽孢杆菌的鉴定 及其蛋白酶学性质研究

从湛江红树林土壤中分离出一株产蛋白酶的芽孢杆菌,通过细菌形态观察、生理生化试验及16S rRNA 基因序列进行分类鉴定,并研究了温度、pH 值、金属离子、EDTA 和吐温80 等因素对该菌株发酵产蛋白酶的酶学性 质的影响。结果表明,该菌株为解淀粉芽孢杆菌,命名为解淀粉芽孢杆菌y-6（Bacillus amyloliquefaciens strain y-6）; 该菌株产生蛋白酶的最适温度为55益,最适pH 为7.0~7.5,40益时,酶活性稳定,保温3 h仍有95%以上的相对酶活 力,pH 为5.5~11 时,酶活性稳定,相对酶活力均在90%以上;Ca2+、Zn2+和吐温80 对蛋白酶有一定的激活作用,Mn2+、 Fe3+、Cu2+及EDTA 对酶有一定的抑制作用,其中EDTA 对酶的抑制作用最强。     

枯草芽孢杆菌凝乳酶的酶学性质

对枯草芽孢杆菌凝乳酶的酶学性质进行了研究,结果表明:枯草芽孢杆菌凝乳酶作用的最适反应温度为55℃、最适pH值为5.0,在pH值为6.0时最稳定,在65℃保温60 min酶活基本丧失,Mn2+、Li+、Fe2+、Na+、K+、Mg2+、Ca2+对该凝乳酶有促进作用,Mg2+、Ca2+促进作用较为明显,而Cu2+对该酶有明显的抑制作用;酶修饰剂中β-巯基乙醇对凝乳酶活力的影响较小,EDTA可抑制该凝乳酶的活力;蛋白酶抑制剂σ-phenantroline可以明显抑制酶活性,证实该酶为金属蛋白酶类。在与商品酶对比中发现枯草芽孢杆菌凝乳酶与商品酶的酶学性质相近。     

一株拮抗棉花枯萎病菌产铁载体内生细菌的筛选

[目的]以盆栽控病效果良好的一株植物内生细菌为材料,通过对铁载体的研究,探索其对棉花枯萎病的拮抗机制。[方法]通过蔗糖-天冬氨酸（Modified Sugar-Aspartic Acid,MSA）平板初步判断菌株是否产铁载体及其荧光特性;根据特定波长下吸光度值测定各菌株在液体MSA培养基内产铁载体活性;不同铁离子浓度下,比较其铁载体对棉花枯萎病的抑制作用;结合形态、生理生化等特征对其进行初步鉴定。[结果]该内生细菌在MSA培养基中高产的荧光铁载体对棉花枯萎病原真菌——尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporum）具有抑制作用,随着铁离子浓度的提高对病原真菌的抑制作用减弱;初步分析确定该内生菌株属于芽孢杆菌属（Bacillus）。[结论]芽孢杆菌可以通过分泌铁载体竞争铁的吸收而抑制尖孢镰刀菌的生长。     

嗜热脂肪芽孢杆菌检测牛乳中抗生素残留的研究

基于嗜热脂肪芽孢杆菌繁殖分解乳糖产酸,将其应用于原料乳的抗生素残留检测。以嗜热脂肪芽孢杆菌为指示菌株,通过改变指示剂组成、添加增效剂乳糖酶以及对分析条件进行筛选,得到适宜的检测条件参数。具体条件参数为:菌液活菌数5×106,菌液添加量0.1mL,30g·L-1的乳糖酶溶液0.1mL,混合指示剂0.1mL,乳样0.1mL,发酵温度64℃,检测时间2.5h。与国家标准法(TTC法)相比较,所研究的方法对5种抗生素的检出限更低,结果更易于肉眼判断。     

生态养猪发酵床菌种产蛋白酶特性的研究

采用福林法对武汉芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、7号芽孢杆菌、9号芽孢杆菌、Y2芽孢杆菌、BB1芽孢杆菌进行发酵后产蛋白酶活力测定。结果表明：7号芽孢杆菌、9号芽孢杆菌、Y2芽孢杆菌产蛋白酶活力较小,武汉芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、BB1芽孢杆菌产蛋白酶活力较高;在三株产蛋白酶活力高的菌种培养基中加入微量元素,实现产酶条件优化,结果是：对武汉芽孢杆菌产蛋白酶有较大影响,对枯草芽孢杆菌和BB1芽孢杆菌影响较小。     

海洋真菌MF-08产壳聚糖酶诱导条件及酶学性质分析

通过研究不同摇床转速、不同碳源和碳源浓度、不同诱导碳源对海洋真菌MF-08产壳聚糖酶的影响,提高其产酶活性,并对海洋真菌MF-08产壳聚糖酶进行部分酶学性质研究。结果表明,最佳发酵条件为27℃,150 r/min,1.5%蔗糖,0.01%氨基葡萄糖,海水培养基发酵72 h。该壳聚糖酶的最适作用温度为40℃,最适p H 5.2,酶活在p H 4.0~6.0范围内和0~40℃相对稳定;Cu2+、Fe3+和Hg2+对该酶活具有明显的抑制作用。经过培养条件的优化,该菌的最高产酶活性达到1.769 U/m L,与优化前相比提高了7.56倍。     

穗霉属26-13-4菌株产植酸酶的酶学性质研究

从黑龙江大豆根部土壤中分离一株穗霉属菌株,对其诱变菌株26-13-4所产植酸酶进行研究。该植酸酶对植酸钠的适宜水解温度为45℃、适宜pH为5.0,在4、25和45℃下热稳定性好,在pH4.0～7.0时植酸酶比较稳定;低浓度的Fe2+、Mn2+、Ca2+对酶活性有促进作用,而Cu2+、Mg2+、Zn2+、Al3+以及高浓度Mn2+、Ca2+、Fe3+对酶活性有抑制作用;K+、低浓度的Fe3+对酶活没有任何影响。结果表明,该植酸酶以植酸钠为底物时的米氏常数Km为4.4×10-5mol·L-1。     

复合生物杀虫剂防治刚竹毒蛾研究

应用苏云金杆菌 80 1 0、白僵菌建瓯菌株、保丰 3种杀虫剂对 2～ 3龄刚竹毒蛾幼虫进行毒力测定 ,筛选出复合生物杀虫剂最佳组合为苏云金杆菌 1 .6× 1 0 6个孢子 / m L+白僵菌 1 .4× 1 0 6个孢子 / m L+保丰 60 0 0倍液 .应用复合生物杀虫剂与低浓度的 2 0 %杀灭菊酯混合 ,分别对2～ 3龄幼虫进行毒力测定和林间防治试验 ,试验表明 :苏云金杆菌 1 .6× 1 0 7个孢子 / m L+白僵菌 1 .4× 1 0 8个孢子 / m L+保丰 40 0 0倍液 +杀灭菊酯 1 0 0 0 0倍液为林间防治 2～ 3龄幼虫的最佳组合 ;复合生物杀虫剂添加低浓度的杀灭菊酯有一定的增效作用     

一株片烟中纤维素降解菌的筛选鉴定及其初步应用研究

采用刚果红平板法从津巴布韦醇化片烟上筛选纤维素降解菌,根据形态学、生理生化特征以及16S rRNA核酸序列对所筛菌株进行鉴定,并对其酶学性质和片烟降解进行研究。结果表明:初步鉴定所筛得产纤维素酶活较高的菌株C-11属于枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)。该菌株所产纤维素酶催化最适温度为50℃、最适pH值为7.0。Fe3+和Ca2+对酶活力有促进作用,Mg2+对酶活力影响较小,而K+、Co2+、Zn2+、Na+对酶活力有不同程度的抑制作用。该菌株所产纤维素酶降解片烟中纤维素的最适温度为50℃,最适时间为2 h,片烟中的纤维素失重率达到41.23%。     

爪哇正青霉Q-5产几丁质酶发酵条件的研究

通过单因素试验对爪哇正青霉Q-5产几丁质酶的条件进行了研究。结果表明:0.5%(w/v)几丁质粉末对爪哇正青霉Q-5产几丁质酶诱导性最强;pH值在5.0～7.0的范围内酶活力最稳定,pH值为4.0时,酶活力最低;金属离子Mn2+和Cu2+对爪哇正青霉Q-5产几丁质酶有明显的促进作用,而Fe3+和Ca2+则完全抑制几丁质酶的活性;以蛋白胨为氮源时,酶的活力最高可达24 U;吐温-80作为表面活性剂能显著提高几丁质酶活性。