真菌诱导子对南方红豆杉细胞生长及紫杉醇合成的影响

用真菌诱导子处理南方红豆杉(Taxus chinensis var.mairer)悬浮细胞,测定细胞生长指数、紫杉醇含量及其细胞酶活的变化,初步探讨真菌诱导子对南方红豆杉悬浮细胞生长的影响。结果表明,在细胞悬浮培养第8天加入100μg/m L真菌诱导子,可明显增加悬浮细胞的生物量,紫杉醇的含量也有提高;添加真菌诱导子能抑制细胞多酚氧化酶(PPO)和苯丙氨酸解氨酶(PAL)的活性,有利于细胞生长。     

红豆杉细胞培养生产紫杉醇的研究

紫杉醇最初是从红豆杉属植物短叶红豆杉（Taxusbrevifolia）树皮中分离出的一种二萜类化合物，它对卵巢癌、转移性乳腺癌、肺癌和恶性黑色素瘤等具有明显疗效，此外，它对类风湿性关节炎、老年性痴呆症和先天性多囊肾病等疾病的治疗也有一定的作用，是一种具有很大开发价值的抗癌药物。但是天然红豆杉生长缓慢，紫杉醇含量低，仅靠这种方式生产紫杉醇远远不能满足人们的需要，多年来，利用细胞和组织培养方法生产紫杉醇是最有效的途径。这种方法的优点是不破坏资源，只取少量材料就能得到细胞系，并且可以一代代繁殖下去，既保护了生态平衡…     

河南地区红豆杉中紫杉烷类化合物含量分析

采用高效液相色谱法测定河南地区红豆杉不同产地、品种、部位紫杉烷类化合物含量,为河南省红豆杉人工林培育奠定基础。结果表明:信阳与开封栽植的加拿大曼地亚红豆杉中,紫杉醇含量无显著差异;10-DAB在信阳加拿大曼地亚红豆杉针叶中含量较高,为170.37μg/g;巴卡亭Ⅲ在信阳加拿大曼地亚红豆杉枝中含量较高,为60.95μg/g。开封种植的5种红豆杉中,东北红豆杉紫杉烷类化合物总含量较高,针叶中为456.61μg/g,枝中为165.43μg/g。可在信阳推广栽培加拿大曼地亚红豆杉,在开封建立东北红豆杉枝叶药用采集基地,综合利用可再生资源。     

Cu2+对红豆杉培养细胞中紫杉醇形成的影响

用Ｃｕ＾２＋对红豆杉（Ｔａｘｕｓ ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）培养细胞中紫杉醇形成的影响进行了研究。在红豆杉细胞悬浮培养２０ｄ即指数生长期末,每１Ｌ细胞悬浮培养物中加入３０μｍｏｌ ＣｕＣｌ２,Ｃｕ＾２＋促进紫杉醇形成的作用最大。添加ＣｕＣｌ２对红豆杉细胞生长没有明显影响,但引起培养细胞中可溶性蛋白质含量、苯丙氨酸解氮酶活性及培养基ｐＨ值的变化。     

Whirly转录因子对非寄主菌诱导水稻HR反应的负调控作用

用RNA干扰技术研究了Whirly转录因子对水稻非寄主抗性反应HR的调控作用。PCR扩增编码Whirly转录因子的Oswhirly基因片段,分别以正向、反向顺序连接到载体pTCK303的两个多克隆位点中,构建Oswhirly基因沉默的RNA干扰载体pTCK303-Oswhy,经农杆菌EHA105菌株转化水稻细胞,结果发现转基因水稻细胞受非寄主菌诱导后,HR反应明显,细胞死亡率显著高于野生型及空载体转化水稻细胞。Oswhirly基因沉默导致HR反应增强,初步揭示Whirly转录因子可能是调控水稻HR反应的负调控因子。     

前体物质对红豆杉内生真菌产紫杉醇的影响

根据紫杉醇的结构特点和红豆杉中紫杉醇的合成机制,选取了几种前体物质,研究其对红豆杉内生真菌合成紫杉醇的影响。结果表明,在发酵培养的第10天,补加下列任一前体物质,使发酵液中初始浓度分别达到苯甲酸钠30.0 mg/L,酪氨酸20.0 mg/L,L-苯丙氨酸3.0 mg/L,乙酸钠3.0 g/L,均能提高紫杉醇产量。进一步采用L_(16)(4~5)正交试验分析得到,4种前体物质在培养基中的最佳组合为A_3B_3C_3D_1,即L-苯丙氨酸3.0 mg/L,酪氨酸40.0 mg/L,乙酸钠3.0 g/L,苯甲酸钠10.0 mg/L,对应发酵液中紫杉醇含量达到987.3μg/L。     

南方红豆杉枝叶与果实中6种紫杉烷类化合物含量分析

以南方红豆杉的枝、叶、果实为材料,建立了高效液相色谱法同时测定6种紫杉烷类化合物(紫杉醇、三尖杉宁碱、7–表–10–去乙酰紫杉醇、7–表–紫杉醇、巴卡亭III、10–去乙酰巴卡亭III)含量的方法。结果表明:以甲醇–乙腈–水(体积比为25∶36∶39)为流动相,等度洗脱,检测波长227 nm,6种紫杉烷类化合物在35 min内完全分离;南方红豆杉的枝、叶、果实中6种紫杉烷类化合物含量存在差异,其中,紫杉醇和7–表–10–去乙酰紫杉醇在种胚中含量最高,分别为866.47、722.50μg/g,10–去乙酰巴卡亭III、巴卡亭III和7–表–紫杉醇在叶中的含量最高,分别为301.20、234.08、11.74μg/g,三尖杉宁碱含量最高的部位是枝,为392.69μg/g。     

红豆杉属植物中紫杉烷类物质含量比较

建立5种紫杉烷类化合物的含量检测方法,并分析研究5种红豆杉(西藏红豆杉、云南红豆杉、南方红豆杉、东北红豆杉、曼地亚红豆杉)中5种紫杉烷类化合物含量差异,为红豆杉种源选育及野生资源保护利用提供理论依据。采用两种流动相的高效液相色谱检测10-脱乙酰基巴卡亭Ⅲ(10-DAB)、7-表-10-脱乙酰基紫杉醇(10-DAT)、巴卡亭Ⅲ、三尖杉宁碱的含量和紫杉醇的含量。西藏红豆杉、云南红豆杉、南方红豆杉、东北红豆杉、曼地亚红豆杉枝叶中紫杉醇含量分别为0.113 3、0.522 8、0.686 2、1.670 6、1.199 4 mg·g^-1,10-DAB含量分别为0.711 1、0.821 3、0.739 2、0.770 9、0.339 2 mg·g^-1,10-DAT含量分别为0.083 3、0.290 8、0.192 3、0.352 6、0.306 0 mg·g^-1,巴卡亭Ⅲ含量分别为0.190 9、0.828 7、0.442 5、0.771 2、0.289 7 mg·g^-1,三尖杉宁碱含量分别为0.186 0、0.183 2、0.235 3、0.837 5、0.530 4 mg·g^-1。紫杉醇和三尖杉宁碱含量以东北红豆杉最高,曼地亚红豆杉次之;10-DAB含量以曼地亚红豆杉最低,不到其他品种的一半;巴卡亭Ⅲ含量以云南红豆杉最高,东北红豆杉略低;10-DAT含量普遍较低。5种紫杉烷类化合物总含量以东北红豆杉最高,曼地亚红豆杉、云南红豆杉和南方红豆杉含量相近,西藏红豆杉最低。     

植物中过表达MYB转录因子调控盐胁迫响应的整合分析

MYB转录因子在调控植物适应非生物胁迫,尤其是应答盐胁迫上发挥着重要作用。采用大样本数据定量评价MYB转基因植物在盐胁迫环境条件下的表现,了解其调控机制,能够为耐盐植物品种的培育提供理论依据。搜集筛选2008～2018年间国内外与MYB转录因子和盐胁迫相关研究,采纳70篇文献包含263个相对独立研究数据,应用整合分析方法对不同盐胁迫处理条件下MYB过表达转基因植物及其野生型的生理生化、形态学等16个性状指标进行了比较研究。结果表明:在非盐胁迫处理下,MYB过表达转基因植物与其野生型在15个性状指标上没有表现出显著差异,仅在脯氨酸含量这个指标上表现出显著不同;而在盐胁迫处理下,有10个性状指标表现出显著的差异。MYB转录因子在植株总鲜重、存活率、根长、脯氨酸含量、POD酶活性、发芽率和叶绿素含量中发挥着正向调控作用,而在钠钾离子含量比、钠离子含量、丙二醛含量上发挥着负向调控作用。随着盐胁迫时间增加,MYB转录因子对植物根长的增效作用表现出减弱趋势;当胁迫的时间长于15d,对根长的生长直接显现出减效作用。在短时间盐胁迫处理下,随NaCl浓度的增高,MYB过表达转基因植物较其野生型的根长变长、叶绿素含量增多。MYB转录因子能够显著地提高植物对盐胁迫的耐性,但在调控植物适应盐胁迫的能力上因受处理时间、盐浓度和转基因数目等不同而表现出差异。     

营养胁迫对曼地亚红豆杉生长与生理指标及紫杉醇含量的影响

为探讨营养胁迫对曼地亚红豆杉生长、生理和紫杉醇含量的影响,于休眠期对曼地亚红豆杉幼苗进行氮、磷、钾3因素3水平正交试验共9种营养胁迫处理,于生长期测量其生长、生理指标及紫杉醇含量.结果表明:(1)休眠期营养胁迫促进了曼地亚红豆杉生长期的生长;(2)休眠期不同营养胁迫均提高了曼地亚红豆杉叶片中叶绿素含量;(3)脯氨酸和丙二醛含量随氮肥用量增加而升高;(4)可溶性糖含量随氮肥用量增加先升后降;(5)紫杉醇含量与脯氨酸、丙二醛、可溶性糖含量均呈现极显著负相关,而与叶绿素含量无显著相关性.     

红豆杉体外培养生产紫杉醇研究

该文从培养基组成、培养条件、培养基中不同添加物对红豆杉细胞培养和细胞中紫杉醇产量的影响 ,以及在提高紫杉醇产量中有关酶代谢调节、细胞株系选择和培养方法的改进等方面 ,着重介绍了近几年来的研究成果 .同时在毛状根培养、冠瘿瘤组织培养、水培根培养和瘤培养等培养材料的扩展方面 ,对国内外所作的尝试性研究和新的报道进行了综述 .国内外学者围绕红豆杉体外培养方法优化、提高紫杉醇产量等问题进行了许多尝试和深入细致的研究工作 ,取得了令人瞩目的进展 ,为利用红豆杉体外培养进行紫杉醇商业化生产提供了可能     

曼地亚红豆杉中紫杉醇等与产地因子的相关性

从国内8个不同产地采集曼地亚红豆杉Taxus media枝条和林下土壤,利用高效液相色谱（HPLC）法测定了紫杉醇（taxol）和10-脱乙酰基巴卡亭Ⅲ（10-deacetylbaccatin,10-DAB）质量分数,用常规方法测定了土壤的矿质元素及肥力结构等。结果表明：不同产地的曼地亚红豆杉紫杉醇和10-DAB质量分数差异很大,紫杉醇有随北纬纬度增高而递减的趋势;紫杉醇和10-DAB与多数土壤因子相关性不显著,其中：紫杉醇与有机质呈显著正相关,与北纬纬度呈显著负相关,10-DAB与土壤矿质元素钴和锰质量分数呈显著负相关;紫杉醇与10-DAB之间不存在相关性（r = - 0.197）;用多元逐步回归分析建立了紫杉醇质量分数的回归方程。推测：曼地亚红豆杉的紫杉醇及其衍生物质量分数变化规律与红豆杉属其他种相似,受生长必需环境因子影响明显。图2表3参23     

稀土化合物影响红豆杉细胞紫杉醇释放行为研究

通过对东北红豆杉细胞紫杉醇短期释放行为的研究,发现细胞内外紫杉醇的分布均呈振荡变化。稀土化合物的加入对紫杉醇细胞内外分布有显著的影响。对如何使东北红豆杉细胞转化为紫杉醇分泌型细胞进行理论性的探讨。     

曼地亚红豆杉生物学特性研究

介绍了曼地亚红豆杉的分类地位及形态、生理、生化、组培、繁殖等生物学方面的特性.     

红豆杉属植物组织与细胞培养影响因素研究进展

红豆杉中的紫杉醇具有抗肿瘤活性,直接从植物中提取紫杉醇的传统生产方法,不仅产量低,而且会对红豆杉野生资源造成严重破坏,而组织与细胞培养是一种极具潜力的紫杉醇生产技术。文章对近年来国内外红豆杉属植物组织与细胞培养工作中的培养基、培养条件、外植体选择、诱导子以及褐变等影响因素的研究情况进行了全面系统地综述。     

HPLC法测定不同年龄曼地亚红豆杉根中紫杉醇的含量

[目的]建立曼地亚红豆杉根中紫杉醇含量的HPLC测定方法,揭示不同年龄曼地亚红豆杉根中紫杉醇含量的动态变化。[方法]采用高效液相色谱法,Phenomenex Luna C18色谱柱（250.0mm×4.6mm,5μm）,流动相为甲醇-乙腈-水,流速为1.0ml/min,检测波长为227nm,柱温为40℃,进样量为20μl。[结果]紫杉醇在此色谱条件下分离良好,其质量浓度与峰面积在1.00～32.00mg/L（r=0.9999）呈良好的线性关系,平均加样回收率为100.3%,RSD值为1.6%。不同年龄曼地亚红豆杉根中紫杉醇含量差异较大。[结论]首次建立了高效液相色谱法测定曼地亚红豆杉根中紫杉醇含量的方法,该方法准确可靠,可用于其根中紫杉醇的含量检测。     

中国境内东北红豆杉天然群体紫杉醇含量变异规律

利用高效液相色谱仪（HPLC）检测了中国境内东北红豆杉天然群体和同一群体内不同单株的紫杉醇含量,以及不同树龄或不同季节的紫杉醇含量变化。 结果表明,不同群体之间紫杉醇含量存在显著差异,群体间差异高达2.7倍; 群体内个体间紫杉醇含量的变异与群体间相当,同一群体（汪清）内不同单株之间紫杉醇含量差异高达4.3倍. 说明紫杉醇含量变异来自于群体间和群体内,其变异组成是群体间为84.6%,个体间为15.0%, 并且东北红豆杉紫杉醇含量的广义遗传力(H[[sup]]2[[/sup]])为82%。 因此,群体选择或单株选择可望获得较大的遗传增益。 同时,紫杉醇含量随着树龄的增大而升高;在生长旺季植株内紫杉醇含量较低,进入休眠期含量较高。 紫杉醇含量与生长量、积温、无霜期、降雨呈负相关（－0.646 8、－0.479 6、－0.240 5、－0.119 2）,与针叶长度显著正相关（0.717 7）,与经度和纬度正相关（0.277 8和0.332 1）。 随着纬度升高,生长量降低,紫杉醇含量呈现增加的趋势。      

基于高紫杉醇质量分数的东北红豆杉优良种源选育

从东北红豆杉(Taxus cuspidata Sieb.et Zucc)国内主要分布区选取8个种源,分别在3个地点开展了种源试验,测定了12年生东北红豆杉根皮紫杉醇质量分数。结果表明,东北红豆杉不同种源间紫杉醇质量分数差异极显著(P<0.01),大兴沟种源紫杉醇质量分数最高(22.767μg/g),是最低种源(和龙)的1.69倍,因此选育出高紫杉醇质量分数的东北红豆杉优良种源——大兴沟种源。各种源紫杉醇质量分数与地点间存在显著的交互作用(P<0.01),说明某一种源紫杉醇质量分数会因立地条件和气候不同而变化。东北红豆杉优良种源适宜在吉林省中东部地区种植,在空气湿润、pH值小于7.0的沙壤土上生长良好。可采用播种和扦插方式繁殖苗木,营林方式以林下造林较好,以3～5株/穴块状造林方式最佳。     

中国红豆杉中产紫杉醇内生真菌的分离与鉴定

为了开发生产紫杉醇的新途径,以中国红豆杉根、茎、叶为试验材料,对其中产紫杉醇的内生真菌进行分离和鉴定。结果表明:从中国红豆杉中共分离出10株内生真菌,在PDA液体培养基中发酵后经薄层层析法检测,出2株能够产生紫杉醇,对产紫杉醇的菌株进行形态学鉴定表明,其中一株为青霉属,另一株为芽枝霉属。     

不同采收期东北红豆杉枝叶中紫杉醇含量分析

[目的]通过检测不同季节不同年生野生和栽培东北红豆杉枝叶中紫杉醇的含量及干物质得率确定其最佳采收期,使其药用价值得到充分的利用,为仿生东北红豆杉实现工业化生产提供理论指导。[方法]采用RP-HPLC法,TOSOH C18柱(4.6 mm×150 mm,5μm)流动相为乙腈-0.2 mol/L乙酸铵-冰醋酸(41∶59∶0.2),流速为1 ml/min,检测波长为230 nm,柱温为25℃。[结果]野生和仿生东北红豆杉中紫杉醇含量最高时期在4、5月份。[结论]该方法用于紫杉醇的测定简单,快速,准确,可用于东北红豆杉枝叶中紫杉醇的含量测定。