玫瑰基因组AFLP反应体系的建立和优化

以玫瑰(Rosa rugosa)叶片为材料,利用改良的CTAB法,提取到了高质量的玫瑰叶片DNA,并建立了37个玫瑰品种和5个蔷薇品种的AFLP银染反应体系,首次在玫瑰DNA提取、酶切连接、预扩增、选择性扩增等实验过程取得了成功,得到了清晰的玫瑰品种的AFLP指纹图谱,为玫瑰基因库的建立、优良品种选育以及亲缘关系的系列研究奠定了理论基础.     

我国紫薇属植物AFLP分子标记体系的优化

以采自广西、云南和河南等地的紫薇属Lagerstroemia植物紫薇L.indica,南紫薇L.subcostata,福建紫薇L.limii和桂林紫薇L.guilinensis叶片为材料,利用改良CTAB（十六烷基三甲基溴化铵）法提取叶片基因组DNA,获得了高质量的紫薇叶片DNA,并以其基因组DNA为模板进行了酶切连接,利用酶切连接的产物稀释一定倍数作为预扩增的模板,最后以稀释一定倍数的预扩增产物进行选择性扩增,进行紫薇和南紫薇的AFLP（扩增片段长度多态性）银染反应体系的优化。AFLP体系中每一步反应都设置了不同的反应体系,采用了160对引物作为初选引物,筛选出了10对适合紫薇基因组扩增的引物。结果表明,适宜紫薇基因组扩增的最佳酶切、预扩增和选择性扩增体系为：酶切连接体系1;预扩体系3;选扩体系3,反应体系中Mg2＋质量浓度为1.2×10-6kg.L-1时扩增效果较好。     

黄瓜基因组DNA提取及AFLP体系优化研究

［目的］提取黄瓜基因组DNA,并对AFLP体系进行优化。［方法］以黄瓜嫩叶为材料,利用改进的CTAB法提取高质量的黄瓜叶片总DNA,通过优化酶切连接、预扩增、选择性扩增等试验条件建立适合黄瓜的AFLP银染体系,得到清晰的黄瓜AFLP指纹图谱。［结果］DNA 模板的质量影响酶切以及后续的连接扩增反应,改良的CTAB 提取法可用于黄瓜AFLP 分析,形成清晰的AFLP 指纹。优化的酶切连接体系为：以37 ℃酶切连接12 h为宜,酶切连接的基因组DNA用量为200 ng,预扩增时Taq酶用量为0.5 U/20 μl体系,预扩增产物稀释40倍作为选择性扩增的模板。在此优化的体系下引物E41M47扩增出清晰的条带。［结论］为黄瓜品种的分子标记和黄瓜品种间亲缘关系等研究奠定了基础。     

青阳参叶片DNA的提取与AFLP反应体系的建立

以青阳参叶片12个样品为材料,利用改良的CTAB法,提取得到高质量的青阳参DNA,通过对AFLP分析过程中DNA的提取、酶切、连接、预扩增、选择性扩增、电泳和银染等诸多因素进行优化、分析,建立了一套适合青阳参的AFLP技术优化体系,得到了清晰的青阳参AFLP指纹图谱,为青阳参基因库的建立、遗传多样性研究等奠定了理论基础。     

黄瓜叶片DNA的提取及AFLP分析体系的建立

以黄瓜叶片为研究材料提取基因组DNA并进行了AFLP扩增。对影响AFLP分析体系的关键因素进行了比较和优化,探索出适宜黄瓜的DNA提取方法,并建立了AFLP分析体系,得到了较为清晰可辨的AFLP指纹图谱,为进行黄瓜的遗传多样性分析、遗传图谱构建和基因定位等研究奠定基础。     

板栗叶片DNA的提取及AFLP反应体系的建立

以初展开的板栗嫩叶为材料,利用改进的CTAB法,提取到高质量的板栗叶片总DNA。通过优化酶切连接、预扩增、选择性扩增等试验条件,建立了板栗AFLP银染反应体系,得到了清晰的板栗AFLP指纹图谱。为板栗品种的分子标记和板栗品种间亲缘关系等研究奠定了基础。研究结果表明:①DNA模板的质量影响酶切以及后续的连接扩增反应。以初展开的嫩叶提取的板栗叶片总DNA纯度最高,所含蛋白质、小分子杂质少,改良的CTAB提取法可用于板栗AFLP分析,形成清晰的AFLP指纹。②先进行酶切后再进行酶连的反应体系比酶切酶连一起进行的体系效果更好。板栗基因组DNA最佳酶切反应体系为:模板DNA总量500ng,反应体积为25μl,10×Y+/TanqoTMBuffer2.5μl,BSA0.8μl,EcoRI5U,MseI5U。连接反应体系中T4DNA连接酶浓度2U即达最佳效果。酶切、酶连反应最佳温度均为37℃。③以板栗为材料进行AFLP标记时,E AAC+M CAA、E AAC+M CAT和E AGT+M CAT三个引物均获得较好的多态性。其中以E AGT+M CAT引物组合的扩增条带信号强度一致性好,条带分布均匀,能够得到稳定、清晰、分辨率较高的指纹谱带,可进行中国板栗的遗传变异分析。     

家猪AFLP分析体系的建立

以大白等6个猪品种为试验材料，建立了家猪扩增酶切片段长度多态性(AFLP)分析体系，对其分析过程中DNA提取、双酶切、连接、预扩增、选择性扩增、银染效果进行了检测。用E39M48引物组合构建了供试猪的AFLP指纹图谱。条带清晰可辨，扩增信号强，无背景干扰。     

药用植物草珊瑚AFLP反应体系的建立

从草珊瑚(Sarcandra glabra)的幼嫩叶片中提取基因组DNA,建立草珊瑚AFLP反应体系,对AFLP反应体系中模板DNA的浓度、基因组DNA的双酶切时间、预扩增产物的稀释倍数和引物组合的筛选等关键因素进行摸索.优化的草珊瑚AFLP反应体系为模板DNA的用量20 ng/μL、酶切反应时间4h、预扩增产物稀释15倍,初步筛选出8对较为适合草珊瑚AFLP分析的引物组合.     

牡丹基因组AFLP银染反应体系的建立和优化

采用改进的SDS方法,从牡丹成熟叶片中提取基因组DNA,所得DNA样品的A260/A280值在1.7～1.8之间,琼脂糖凝胶电泳主带清晰、DNA纯度高、较少降解、不含酶反应抑制剂,可被MseⅠ和PstⅠ两种限制性内切酶完全酶切.通过酶切连接、预扩增、选择性扩增、银染等试验过程,成功建立了牡丹品种AFLP银染反应体系,得到了清晰的指纹图谱.对扩增结果进行聚类分析,得到了23个牡丹品种的聚类分析图.     

栓皮栎AFLP反应体系的建立

以栓皮栎叶片为材料,研究了AFLP反应体系中酶切-连接反应的方法与时间、预扩增反应和选择性扩增反应等几个关键因素。建立一套适于栓皮栎基因组的AFLP反应体系:基因组DNA的提取宜采用改良的CTAB法;酶切-连接反应体系采用一步法,其中DNA模板用量为200ng,酶切-连接反应4h;酶切-连接产物用于预扩增反应的最佳稀释倍数为20倍;预扩增产物不需要进行稀释直接用作选择性扩增反应。对各环节的效果检测与引物筛选验证表明该体系适合栓皮栎的AFLP分析。     

小麦印度腥黑穗病菌和黑麦草腥黑穗病菌的单孢检测

设计了小麦印度腥黑穗病菌(Tilletia indica)和黑麦草腥黑穗病菌(Tilletia walkeri)通用引物H4／H7和H11／H12，结合T.indica特异性引物Tin3/Tin4和T.walkeri特异性引物Tin11／Tin4建立了检测T.indica和T.walkeri冬孢子的套式PCR(nested PCR)检测方法。检测的灵敏度达1个冬孢子，检测时间缩短为8h。PCR产物的测序验证了PCR反应的可靠性。这一方法克服了冬孢子休眠或不具存活力以及常规PCR检测时间长的困难，有效地解决了漏检问题。     

普通野生稻和亚洲栽培稻核基因组的RFLP分析

 本研究通过对来自亚洲10个国家的122份普通野生稻（O.rufipogon Griff.，简称普野，下同）和76份亚洲栽培稻（O.sativa L.）的核DNA RFLP分析，探讨了中国普野与南亚、东南亚普野，普野与栽培稻以及籼粳之间的遗传分化关系。结果表明，籼粳分化是栽培稻核DNA遗传分化的主流。在核DNA分化上，中国普野可分为原始普野型，偏籼型和偏粳型；南亚普野只有原始普野型和偏籼型，没有偏粳型；东南亚普野有原始普野型和偏籼型，还可能有偏粳型。中国普野因地理分布不同，其遗传分化表现出多态性，江西东乡和湖南茶陵以及部分云南元江普野既不与籼稻聚在一起，又不与粳稻聚在一起，而独聚一类，其形态上亦比较原始，属于原始祖先型。广东、广西普野则表现为偏籼或偏粳。根据中国、南亚、东南亚普野的遗传分化关系，再次论证了中国和南亚（以印度为中心）是栽培稻起源演化的两个原始中心，并提出了籼粳演化应该是多途径的。     

鸡屎藤与鱼鳅串和抗生素联合抑菌试验研究

[目的]考察鸡屎藤、鱼鳅串水提物的体外抗菌活性及其与常用抗生素的联合抑菌效果。[方法]以金黄色葡萄球菌CMCC29178和大肠埃希氏菌ATCC25922标准菌株为检测菌,采用微量肉汤稀释法测定其最小抑制浓度(MIC)和联合抑菌指数(FIC)。[结果]鸡屎藤、鱼鳅串水提物对金黄色葡萄球菌和大肠埃希氏菌都具有一定的抑菌效果,与常用抗菌药物合用表现出不同程度的协同或相加效应。[结论]水提法可广泛用于对具有抗菌活性的植物药材的初步筛选。     

紫薇籽油脂肪酸组成的GC/MS分析

紫薇是我国夏季重要观花树种,栽培广泛。为了开发和利用紫薇籽油,采用冷榨法从紫薇种子中榨取了油脂,并采用GC/MS对堇薇、红薇、银薇3个不同品种群紫薇籽油的脂肪酸组成进行了测定。分析结果表明,不同品种群紫薇籽油均含有相同的17种脂肪酸,不同品种群脂肪酸含量有差异,其中堇薇品种群不饱和脂肪酸总含量最高,为86.57％,该品种群饱和脂肪酸总含量最低,为13.05％;不饱和脂肪酸的主要成分是亚油酸和油酸,其中亚油酸含量最高,堇薇、红薇、银薇3个品种群亚油酸含量分别为71.62％、70.91％、72.87％;从紫薇籽油中检测出奇数碳脂肪酸类二十三烷酸,该脂肪酸具有抗癌活性,表明紫薇籽油是一种值得开发的保健油脂。     

邵阳市紫薇品种调查研究Ⅲ

紫薇是夏季重要的观赏花木,目前中国有50多个品种。通过对邵阳市紫薇品种资源的实地调查研究,发现紫薇品种100个,分属堇薇、红薇、银薇及复色4个品种群,其中未见文献记载的新品种69个。因篇幅所限,分3篇文章发表,本研究报道了银薇及复色2个品种群的23个新品种。     

邵阳市紫薇品种调查研究Ⅱ

紫薇是夏季重要的观赏花木,目前中国有50多个品种。通过对邵阳市紫薇品种资源的实地调查研究,发现紫薇品种100个,分属堇薇、红薇、银薇及复色4个品种群,其中未见文献记载的新品种69个。因篇幅所限,分3篇文章发表,本研究报道了红薇品种群的20个新品种。     

马兰叶中黄酮的不同提取方法比较

采用索氏提取法和纤维素酶辅助热浸提法提取马兰叶干粉中的黄酮,利用紫外分光光度法测定其提取液中黄酮含量分别为17.41、30.60mg/g,确定纤维素酶热浸提法适宜于提取马兰叶干粉中的黄酮,通过进一步的试验证实加标回收率为90.6%～93.6%,变异系数为0.05%～0.33%,结果较理想,精确度高。     

邵阳市紫薇品种调查研究Ⅰ

紫薇是夏季重要的观赏花木,目前中国有50多个品种。通过对邵阳市紫薇品种资源的实地调查,发现紫薇品种100个,分属堇薇、红薇、银薇及复色4个品种群,其中未见文献记载的新品种69个。因篇幅所限,分3篇文章发表,本文报道了堇薇品种群的24个新品种。     

不同培养基对紫薇试管苗的诱导·增殖·生根的影响

[目的]提高紫薇的繁殖速度,建立紫薇的快速繁殖体系。[方法]以紫薇种子为外植体,在MS基本培养基中添加不同浓度的6-BA、NAA、KT,研究不同培养基对紫薇试管苗的诱导、增殖和生根的影响。[结果]含有一定浓度激素的培养基中的种子的发芽率明显高于不含任何激素的培养基,紫薇试管苗的诱导培养基为:MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.01mg/L。随着6-BA、KT、NAA浓度的变化,茎段的出芽率、芽平均长度及生长情况都有较明显的变化,适宜增殖培养基是MS+6-BA2.0mg/L+KT1.0mg/L+NAA0.01~0.05mg/L。适宜生根培养基为:MS+NAA0.5mg/L,试管苗生长健壮,根系粗壮,生根数较多。[结论]6-BA、KT、NAA等激素的浓度对紫薇丛生芽的形成和生根有较大的影响。