水稻醇溶蛋白启动子驱动下的ipt基因表达及对烟草种子iPAs含量和种子重量的影响

将种子特异性表达的水稻醇溶蛋白启动子P与ipt基因融合,构建了pBI121-Pi植物表达载体,通过农杆菌LBA4404介导将基因整合到烟草的基因组中,利用抗生素筛选和PCR检测及序列分析,筛选出转基因的植株,成熟种子通过ELISA试剂盒检测其细胞分裂素含量,发现iPAs的含量为对照的4.17倍,种子的千粒重与对照相比增加了12.14%。     

生长素合成关键酶基因iaaM种子特异表达载体的构建及转基因油菜的获得

生长素是重要的植物激素,它对植物的生长发育具有重要的调控作用,它能诱导营养物质向其含量高的部位运输。通过转基因技术提高内源生长素在油菜种子中的含量,诱导营养物质向种子运输,为提高油菜灌浆速度,增加产量提供了新的研究方向。iaaM基因编码的色氨酸单加氧酶是催化色氨酸(Trp)转变为生长素(IAA)的关键酶,将iaaM基因与油菜(Brassica napusL.)种子发育早期特异性表达的储藏蛋白专一性启动子(Napin)融合并插入植物表达载体pCAMBIA3301中,构建iaaM基因的种子特异表达载体,并经农杆菌介导转化甘蓝型油菜。经PPT抗性筛选、GUS组织化学检测、PCR检测,初步证实外源基因已整合进油菜基因组,获得转基因植株。     

油茶近成熟种子表达的发育相关基因及其分析

以油茶优良无性系湘林1号和湘林4号近成熟种子为材料构建cDNA文库．随机挑取2327个克隆进行3’端测序，并将所得序列与核酸数据库进行同源性比较．发现16种58条与油茶种子胚胎发育及种子成熟相关的基因序列，这些序列与核酸数据库中其他物种相关序列有很高或较高的同源性．其中，脱落酸应答蛋白、成熟控制蛋白、翻译控制肿瘤蛋白、胚胎特化蛋白、乙烯应答因子包含域蛋白等基因序列为高丰度表达；种子成熟蛋白、细胞分化蛋白、乙烯应答因子、脱水素等编码基因属中等丰度表达；而成熟相关蛋白、胚珠发育蛋白、伸展蛋白、生长控制因子、休眠相关蛋白、衰老相关蛋白和脱水应答蛋白等基因只检测到1条序列．属低丰度表达．这些结果为揭示油茶种子油脂转化过程中的基因表达和生理过程提供了科学依据．     

甘蓝型油菜pep基因片段的克隆和种子特异性反义表达载体的构建

丙酮酸羧化酶(PEP)是控制油菜蛋白质／油脂含量比例的一个关键酶,抑制种子中pepc基因的表达,使其底物(丙酮酸)更多地朝生成油脂的方向流动,对提高种子的含油量,增加油菜的经济价值具有重要的意义、利用PCR技术从甘蓝型油菜湘油15号基因组中扩增了PEP基因片段,并将其克隆到pGEM-T Easy载体上进行测序．测序结果表明：扩增片段长576bp,与Yannai报道的PEP基因相应区域的同源性为95％．用扩增引物上设计的BamHI和SacI两位点酶将PEP基因片段切下,反向插入到pBII21．N质粒的Napin启动子之后,构建了种子特异性反义PEP表达载体,并通过农杆菌介导法将反义PEP基因转化到湘油15号中。     

印楝种子粗提物诱导烟草炭疽病抗性的生理效应

[目的]研究印楝诱抗烟草炭疽病的机理,为烟草炭疽病的生物防治提供理论依据.[方法]测定根施印楝种子粉末对烟草炭疽病的防效,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测印楝种子粉末处理后烟草的NTF6、NtLox、NtS-GT1、NtPAL、NtPDF、NPR1、NtRar1和PR1a等8个相关抗病基因的表达变化;对比叶面喷施不同印楝种子提取物(甲醇、乙酸乙酯和石油醚)溶液对烟草抗氧化酶活性的影响,并测定叶面喷施印楝种子甲醇提取物不同分离流分处理的烟叶总酚含量及抗炭疽病效果.[结果]根施印楝种子粉末可使烟草炭疽病的病情指数(26.67%)较对照(74.17%)显著降低(P<0.05,下同).qRT-PCR检测结果表明,NPR1、NtRar1、NtSGT1和PR1a等4个抗病基因的相对表达量与印楝诱导烟草抗炭疽病相关.印楝种子甲醇提取物对烟草抗氧化酶活性的影响最大,其丙酮流分段在处理后6和96 h诱导烟草的总酚含量较对照明显提高,分别为对照的2.52和3.34倍,且其诱导烟草抗炭疽病的能力最强,病情指数(25.00%)显著低于对照(69.17%).[结论]印楝种子提取物通过诱导提高PPO和POD抗病相关酶活性及诱导NPR1、NtRar1、NtSGT1和PR1a等抗病相关基因的表达产生抗炭疽病作用,且诱导活性成分主要存在于甲醇提取物的丙酮流分,其可作为烟草炭疽病的诱抗剂推广应用于烟草生产.     

恒定磁场对小麦种子的生物学效应

小麦种子经０．１～０．６Ｔ恒定磁场处理后，其种子发芽率，幼苗叶绿素和可溶性蛋白质含量，ＳＯＤ，ＣＡＴ活性，根对＾３２Ｐ的吸收，地上和地下部的鲜，干重等均比对照有所提高，表明经一定强度恒定磁场处理，可对小麦种子的生物学性状起积极作用，本文还对小麦种子发芽率与磁感应强度的数学方程进行了讨论。     

烟草种子萌发过程中引发回干的效应分析

对烟草种子进行引发，在萌发过程中回干处理，分析这些措施对种子萌发率和种子内物质含量的影响．结果表明，引发72h回干处理的烟草种子萌发率最高，催芽后48h达到93％，比对照(正常种子)提前了72h．经过引发回干处理的种子再进行催芽时，种子内的蛋白质、可溶性蛋白、淀粉等大分子物质被均衡利用，其含量变化较平稳；游离氨基酸、可溶性糖等一些有利于萌发、提高种子活力的物质含量较高．     

卡那霉素胁迫对转基因烟草种子发芽的影响

利用花粉管通道法将抗菌肽Ｄ基因ＤＮＡ注入烟草子房，收获的种子经１００ｍｇ／Ｌ卡那霉素浸种发芽，结果显示，未转基因烟草种子的小苗子叶变黄，胚轴变软；转基因种子的小苗子叶始终保持绿色。用胭脂碱合成检验此法有效率达７９．２％，表明利用卡那霉素胁迫发芽是前期筛选转基因材料的有效措施。     

低温诱导芹菜种子次生休眠及其调控机制

[目的]本文旨在探究5℃低温处理对芹菜种子萌发的抑制作用及其调控机制。[方法]以‘上海黄心芹’种子为试验材料，设置5和20℃处理，探究其萌发情况、赤霉素(GA)和脱落酸(ABA)含量及代谢通路中关键基因表达量动态变化及淀粉及可溶性糖含量的动态变化。[结果]5℃低温处理显著抑制了芹菜种子萌发率、种子出苗率、相对吸水量和种胚的生长，20℃处理则能快速促进种子萌发，将5℃处理15 d后的种子转入20℃后(T_5-20处理),种子又能快速恢复萌发活力，说明5℃低温并没有对种子造成不可逆伤害，种子活力染色的结果也说明低温并没有对种胚结构造成伤害。5℃低温还显著抑制了种子萌发期间GA的合成，相关的代谢及下游基因也被明显抑制表达，而20℃处理则显著促进GA的合成，并且GA3ox1基因在20℃处理以及T_5-20处理中的高表达说明其可能对GA的合成发挥关键作用；5℃处理中ABA含量呈波动变化，但GA/ABA整体呈下降趋势，ABA降解基因CYP707A1的表达量与5℃处理种子萌发中后期的ABA含量有明显的负相关趋势。另外，5℃还明显抑制了芹菜种子的糖代谢能力，5℃...     

种子包衣增产又增效

近几年，我们采用了玉米、花生种子包衣技术，达到既防虫防病，又增产增效的目的。花生种子包衣可防治蚜虫、地下害虫，还可防治花生线虫病；玉米种子包衣可防治纹枯病。花生种子包衣千粒重比对照高9克：玉米种子包衣干粒重高于对照8克。花生种子包衣单产高于对照31公斤，增产率14．1％；玉米种子包衣单产高于对照54公斤，增产率12．4％。包衣技术要点如下。     

杂交稻种子带菌及保活剂处理与生活力的关系

为了解杂交水稻种子带菌情况及保活剂处理后贮存2年对种子发芽的影响，收集了湖南长沙、沅江、常德、临澧等地的杂交水稻种子，保活剂处理前后通过组织分离了解种子带菌情况，同时测定了种子水分含量与发芽率。结果表明：不同来源杂交稻种子携带的真菌主要为曲霉、毛锥孢、链格孢与镰刀菌。不同地区不同组合携带的真菌种类有很大的差异。1999年收获的杂交稻种用保活剂处理后保存2年，携带真菌数量减少，发芽率比对照高1．8％－15．9％；2000年用保活剂处理的杂交稻种保存1年后，发芽率比对照高0．3％－11％。     

ipt基因种子特异表达载体的构建及转基因大豆的获得

细胞分裂素是重要的植物激素,它对植物的生长发育具有重要的调控作用。通过基因工程技术提高内源细胞分裂素在大豆种子中的含量,诱导营养物质向种子定向运输,可提高大豆的灌浆效率,为增加作物产量提供了新的研究方向。ipt基因编码的异戊烯转移酶是催化AMP转化为细胞分裂素的关键酶,将ipt基因与大豆种子发育中后期特异性表达的β-伴球蛋白α-亚基专一启动子(7ap)融合,构建了植物表达载体pCAMBIA33017αp-ipt-CaMV35 3'ULR,并通过农杆菌介导转化大豆。经草铵膦抗性筛选、PCR、GUS组织化学染色及Southern Blot检测,证实外源基因以单拷贝的形式整合进大豆基因组,共获得8株转基因大豆。     

油青菜心和黄瓜吸胀种子对高压静电场的反应

分别对吸胀的油青菜心和黄瓜种子进行不同场强相同时间和同一场强不同时间的高压静电场处理．测定了处理后的种子发芽势、脱氢酶和过氧化物酶活性、可溶性蛋白含量以及种子超弱发光．结果显示高压静电场处理显著提高种子活力,促进种子萌发．经高压静电场预处理的种子萌发后,种子的超弱发光较对照明显增强,并且种子超弱发光的变化与生理生化指标的变化具有明显相关性,表明超弱发光可作为一种准确、快捷、灵敏的物理指标,用于对种子最佳电场处理剂量的筛选．     

花生种子人工老化过程中发芽率和蛋白质的变化

利用双向ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析了粤油７９和油７３花生种子人工老化过程中发芽率和蛋白质的变化，结果表明，种子老化８ｄ后，种胚内出现了一种蛋白质或多肽（ｐ１６．２，ＭＷ１０ＫＤ），并且该蛋白质或多肽随种子老化程度的加深其含量逐渐增加，而对照不存在这种物质，表明随着种子活力的丧失，蛋白质的含量增加。     

香椿种子衰老机理

采用人工加速老化方法研究了香椿种子衰老与膜脂过氧化作用的关系。结果表明：随着种子老化程度的增加,产生速率增快,MDA含量增高,膜透性增大。人工老化处理5d的香椿种子,其MDA含量、相对电导率及产生速率分别较对照种子高96．20％,45．56％和353．49％香椿种子活力与膜脂过氧化程度呈显著的负相关。这表明膜脂过氧化可能是导致香椿种子衰老的主要原因之一。     

大豆种子特异性启动子的分离及结构分析

 采用PCR技术从大豆品种吉林43基因组DNA中分离到大豆β-伴球蛋白α-亚基基因启动子片段（BCSP666）。序列比较和分析表明，这一启动子片段与其它两个大豆种子特异性启动子--β-伴球蛋白α′-亚基基因启动子片段和β-伴球蛋白β-亚基基因启动子--片段在序列结构上有很大的相似性，并具有多种种子特异性启动子所特有的序列元件，据此推测该启动子片段具有种子特异性启动子活性。Δ6-脂肪酸脱氢酶是亚油酸脱氢形成γ-亚麻酸的限速酶。将启动子片段BCSP666与深黄被孢霉Δ6-脂肪酸脱氢酶基因（MI D6D）连接，构建种子特异性表达载体pBMI666。通过农杆菌介导法转化大豆子叶节，在转基因愈伤组织中表达了脂肪酸脱氢酶基因（MI D6D）,获得γ-亚麻酸，初步验证了启动子片段BCSP666的启动子活性。     

小麦种子包衣技术增产效果初探

通过对小麦种子进行包衣试验，结果表明：小麦种子包衣能有效提高种子出苗率，促进幼苗生长，防治病虫害，包衣与未包衣孤增产效果达极显著水平，两种种衣剂包衣分别比对照增产11．40％和8．82％，是值得推广的上麦种衣剂。     

包衣对黄瓜种子发芽与苗素质的影响(简报)

使用包衣剂包衣黄瓜种子，测试了种子的发芽状况，结果表明：包衣种子的发芽率、成苗数与对照比较并未降低。由于种衣剂中生物活性物质的存在使得黄瓜幼苗生长加快，酶活力、叶绿素、可溶性蛋白及过氧化物酶含量均有一定程度的提高。     

油茶种子表达的主要储藏蛋白基因及其分析

以油茶优良无性系湘林1号和湘林4号近成熟种子为材料构建cDNA文库，随机挑取2327个克隆进行3’端测序．并将所得序列与核酸数据库进行同源性比较．结果显示．有88条油脂储藏蛋白相关基因和3种61条储藏蛋白基因表达．并具有典型的“时、空”特点．这些结果为揭示近成熟时期油茶种子中储藏蛋白特异表达的丰度和生理情况提供了科学依据．     

烤烟包衣种子与自然种子对比试验

对烤烟包衣种子与自然种子进行的对比试验结果表明：包衣种子适宜播种期为２月８日－１５日，播后２０－２５天出苗，苗明显较对照健壮，成苗期茎粗、根鲜重、须根数分别校对照增加４．５％、５５％和４４．８％；苗期及整个大田期气候斑点病、黑胫病、花叶病均显著减轻；采收后亩产量、上等烟比例、亩产值分别提高１１．５％、３１．９％和１４．６％。