香芹酚对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(USA300)抑菌机制的研究

【目的】研究香芹酚对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)(USA300)的抑菌效果及其作用机制。【方法】测定香芹酚对MRSA标准菌株USA300的抑菌活性,并通过考察其对电导率、DNA外渗量、SDS-PAGE蛋白谱带、乳酸脱氢酶的含量、细菌形态结构以及生物被膜形成能力的影响探究香芹酚的抑菌机制。【结果】香芹酚的MIC为128～256μg/m L,MBC为512μg/mL;与对照组相比,2 MIC香芹酚作用于USA300 1 h后,菌悬液电导率上升5.57%±0.40%、DNA外渗量增加16.27±1.86μg/mL以及乳酸脱氢酶含量增长40.49%±2.77%;作用10 h后,可溶性蛋白质含量增多61.13%±7.63%;512μg/mL的香芹酚可以损伤USA300的细胞壁;亚抑菌浓度下,64μg/mL香芹酚作用于USA300后,形成的生物被膜减少68.86%±0.53%。【结论】香芹酚主要通过损伤USA300的细胞壁、增加细胞膜的通透性来抑制USA300的生长繁殖。     

10种天然产物抗茶轮斑病的生物活性

【目的】筛选抗茶轮斑病的活性天然产物,为降低茶叶农药残留和提高贵州茶叶品质提供技术支撑。【方法】采用菌丝生长速率法,测试10种天然产物(香草醛、丁香醛、愈创木酚、百里香酚、吲哚、槲皮素、香叶木素、芹菜素、肉桂酸和L-薄荷)在100μg/mL浓度下抗茶轮斑病的生物活性,并进行EC_(50)测定;通过扫描电子显微镜(SEM)观察初筛生物活性最好的天然产物在不同浓度下对茶轮斑病细胞外壁的损伤程度。【结果】在10种天然产物中,以百里香酚、愈创木酚和吲哚的生物活性较好,其对茶轮斑病的抑制率分别为82.67%、65.33%和57.33%,比阳性对照萎锈灵(34.67%)分别增加48百分点、30.66百分点和22.66百分点,差异均达极显著,其EC_(50)分别为33.79μg/mL、56.97μg/mL和75.42μg/mL,比阳性对照萎锈灵(231.52μg/mL)的EC_(50)剂量分别减少197.73μg/mL、174.55μg/mL和156.10μg/mL。在200μg/mL浓度时,百里香酚可导致茶轮斑病真菌细胞壁的表面形态从光滑圆润变为部分裂开;在500μg/mL浓度时,真菌细胞壁的受损程度明显增加。【结论】百里香酚抗茶轮斑病的生物活性最好,愈创木酚和吲哚较好。     

9种天然产物对茶炭疽病的抑制效果

【目的】探明植物源天然绿色农药抑制茶炭疽病的效果,为茶树炭疽病的绿色防控和绿色农药的研制提供参考。【方法】采用菌丝生长速率法,测试9种天然产物在100μg/mL浓度下抗茶炭疽病的生物活性,并进行EC50测定;通过抗茶炭疽病活体试验,测定生物活性最好的天然产物在500μg/mL浓度下对茶叶感染茶炭疽病的保护和治疗效果。【结果】在9种天然产物中,以百里香酚和愈创木酚抗茶炭疽病的生物活性较好,其对炭疽病菌的抑制率分别为83.33%和76.55%,比阳性对照萎锈灵(74.69%)分别增加8.64百分点和1.86百分点;其EC50分别为18.55μg/mL和25.11μg/mL,比阳性对照药萎锈灵(35.53μg/mL)分别减少用药剂量16.98μg/mL和10.42μg/mL。在500μg/mL浓度下,百里香酚对茶叶感染茶炭疽病的保护活性和治疗活性分别为32.66%和38.09%,比阳性对照萎锈灵(20.42%和25.72%)分别增加12.24百分点和12.37百分点。【结论】百里香酚对茶叶感染茶炭疽病具有较好的保护和治疗效果。     

单萜酚类化合物与苯醚甲环唑和噻呋酰胺混配对立枯丝核菌的抑菌活性

为探究单萜酚类化合物与杀菌剂混配对立枯丝核菌的抑制效果，筛选能够防治水稻、玉米纹枯病的药剂，本研究分别将百里香酚、香芹酚与苯醚甲环唑、噻呋酰胺混配，通过菌丝生长速率法测定了其对R. solani的抑菌活性，并以孙云沛法评价了单萜酚与杀菌剂混配的增效作用。试验结果表明：香芹酚、百里香酚与噻呋酰胺以1:5、1:4、2:3、3:2、4:1和5:1比例混配均表现出协同增效作用，其中香芹酚和噻呋酰胺4:1混配的抑菌效果最好，EC50值为0.928 mg/L，共毒系数(CTC)为1397.39；香芹酚与苯醚甲环唑以3:2、4:1和5:1比例混配以及百里香酚与苯醚甲环唑以2:3、4:1和5:1比例混配也表现出协同增效作用。百里香酚和香芹酚对苯醚甲环唑和噻呋酰胺增效作用明显，香芹酚与噻呋酰胺的4:1混剂对R. solani抑菌活性高，具备应用于水稻、玉米纹枯病的防治的潜力。天然单萜酚类化合物与杀菌剂以一定比例混配能够显著提高其抑菌活性，在杀菌剂研发、筛选中具备很高的研究价值。     

3种酚类物质对油茶炭疽病病菌的抑菌机制

为明确酚类物质对油茶炭疽病的多重作用方式及活性机制,从香芹酚、丁香酚、异丁香酚对油茶炭疽菌菌丝的细胞膜通透性、可溶性蛋白和还原糖含量的影响进行研究。结果表明:处理后,油茶炭疽菌菌丝畸变,粗细不均,分支增多,局部膨大;油茶炭疽菌菌丝处理液的电导率随处理时间和酚类化合物浓度增加而増大;香芹酚、丁香酚、异丁香酚在浓度为400μg/mL时,处理12 h后病原菌菌丝体内的可溶性蛋白含量分别为7. 55、7. 69、8. 01 mg/g,还原糖含量分别为4. 95、6. 18、5. 71 mg/g。试验结果为将香芹酚、丁香酚、异丁香酚开发成天然杀菌剂应用于农业生产实践提供了理论依据。     

气相色谱法测定淡水养殖区底质中的五氯酚

采用气相色谱确立了1种持久性有机污染物五氯酚在淡水养殖区底质中的检测方法。比较了不同提取试剂、不同提取方法、不同提取时间淡水养殖区底质中五氯酚的加标回收率。用SPSS16.0统计软件中的广义线性模型进行统计分析。结果表明:以正己烷:丙酮=1:1为溶剂,超声波提取法提取底质中的五氯酚,提取时间为5min,外标法定量,经气相色谱法-ECD检测器测定回收率最好。五氯酚在0.8-80μg/L范围内,其浓度与色谱峰面积有很好的线性关系。相关系数为0.997,检出限为2.93μg/kg。在8μg/kg、40μg/kg、160μg/kg 3个浓度水平,平均添加回收率为81.3%~91.1%,相对标准偏差为1.21%~1.63%,定量检出限为7.79μg/kg。方法准确度和精密度较好,满足淡水养殖区底质中五氯酚残留量监测的要求。     

亚抑菌质量浓度的百里香酚对金黄色葡萄球菌α-溶血素表达的影响

【目的】α-溶血素在金黄色葡萄球菌(金葡菌)肺炎的感染过程中起着非常重要的作用,可作为治疗金葡菌肺炎的新靶标。因此,研究百里香酚对金葡菌α-溶血素表达的影响具有重要意义。【方法】测定最小抑菌质量浓度(MIC)和生长曲线并进行了溶血试验、蛋白免疫印迹分析、荧光定量PCR以及细胞毒性试验。【结果】百里香酚对金葡菌USA300的MIC为256μg/mL,亚抑菌质量浓度的百里香酚(32μg/mL)可下调金葡菌hla和RNAIII的转录水平,降低α-溶血素的表达,对溶血素介导的肺癌上皮细胞A549损伤具有保护作用。【结论】百里香酚具有成为新型抗金葡菌感染药物的潜力。     

百里香酚体外抗伪狂犬病毒活性评价及其作用方式

采用细胞体外培养技术,以BHK-21细胞为研究模型,探讨不同质量浓度的百里香酚在体外抗伪狂犬病毒(PRV)的活性及其作用方式。使用CCK-8法检测百里香酚对BHK-21细胞的最大无害浓度(MNTC),计算得出其半数抑制浓度(IC₅₀)为(212.789±1.652)μg·mL^-1,对PRV的半数有效浓度(EC₅₀)为(30.710±0.303)μg·mL^-1,对PRV的治疗指数(TI)为6.929,说明百里香酚属于高效低毒类抗PRV药物。使用CPE观察法检测百里香酚对PRV病毒滴度和病毒一步生长曲线的影响,结果显示,百里香酚能够剂量依赖性显著降低PRV的病毒滴度,并降低PRV在BHK-21中增殖后的毒力。采用荧光定量PCR方法检测不同处理下PRV感染的BHK-21细胞的PRV-gE基因的拷贝量,研究百里香酚体外抗PRV的作用方式,结果显示,百里香酚主要是通过抑制PRV在BHK-21细胞中的增殖来发挥抗病毒活性的,同时能够直接杀灭部分PRV病毒粒子。     

香芹酚和丁香酚对杨梅致病菌的抑菌作用

试验以香芹酚和丁香酚为原料,探讨了不同浓度的植物精油对杨梅的保鲜效果;并从腐烂的杨梅中分离出杨梅致病菌,研究了植物精油对杨梅致病菌的抑菌效果;同时,以纳米醇质体为载体,制备植物精油新型纳米防腐剂,考察其是否可以增强植物精油的抑菌效果。结果表明:16‰的香芹酚和丁香酚都能有效降低杨梅的腐烂指数,且香芹酚对杨梅的保鲜效果优于丁香酚;4株杨梅致病菌对8%的香芹酚和丁香酚都表现为极度敏感,且香芹酚对杨梅致病菌的抑菌效果优于丁香酚;香芹酚-纳米醇质体对3株杨梅致病菌的抑菌活性强于同浓度的香芹酚。     

西瓜中氯吡脲残留的LC-MS/MS检测方法研究

采用液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)建立了西瓜中氯吡脲残留的定量分析方法:样品经过乙腈涡旋提取后,加入C18分散固相萃取净化,LC-MS/MS检测。结果表明:在0.1—500μg/L质量浓度范围内,氯吡脲的峰面积与其浓度呈良好线性关系,该法最低定量检出限为0.1μg/kg;在全瓜、瓜瓤和瓜皮3种基质中,100μg/kg、μg/kg和0.1μg/kg三个添加水平下,氯吡脲回收率为97%—124%,相对标准偏差为5.39%—11.2%;该方法可以满足西瓜中氯吡脲残留检测的需要。