莱克多巴胺单克隆抗体的研制

莱克多巴胺(Ractopamine)与戊二酸酐、氯甲酸异丁酯反应后,与牛血清白蛋白偶联,免疫BALB/c小鼠,用杂交瘤技术获得2株稳定分泌抗莱克多巴胺单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并制备腹水,间接ELISA方法测定腹水抗体效价为1∶3.2×107。该抗体与克仑特罗交叉反应率为0.3%,体外传代培养和冻存复苏后抗体分泌稳定。获得的单克隆抗体可用于肉品中莱克多巴胺残留检测和莱克多巴胺残留检测试剂盒的开发。     

莱克多巴胺单克隆抗体的制备及特性鉴定

莱克多巴胺与牛血清白蛋白偶联,免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞杂交,获得1株能稳定分泌莱克多巴胺单克隆抗体的杂交瘤细胞株,制备腹水,间接ELISA方法测定腹水抗体效价为1∶30 000。该抗体与莱克多巴胺的交叉反应率为100%,与克仑特罗的交叉反应率为0.01%。该单克隆抗体可用于对动物肉品或尿液中莱克多巴胺残留检测试剂盒或试纸条的开发。     

莱克多巴胺免疫抗原与多克隆抗体的制备

采用碳化二亚胺-N-羟基琥珀酰亚胺(EDC-NHS)法将莱克多巴胺(RAC)与活化的牛血清白蛋白(BSA)偶联,合成了免疫抗原(RAC-BSA),经聚丙烯酰胺凝胶电泳法和紫外吸收法鉴定偶联成功.用合成的免疫抗原免疫家兔获得了高效价的多克隆抗体,采用所得抗体和辣根过氧化酶标抗原建立莱克多巴胺直接竞争酶联免疫吸附分析法(ELISA),标准曲线呈典型S型,具有良好的线性关系.     

巴氯芬人工抗原的合成及其鼠源多克隆抗体的制备

【目的】合成巴氯芬（baclofen,BA）人工抗原并制备其多克隆抗体,为巴氯芬免疫学快速检测方法的建立奠定基础。【方法】采用碳二亚胺（EDC）法将BA分别与牛血清白蛋白（BSA）和鸡卵清白蛋白（OVA）偶联,合成免疫抗原BA-BSA和包被抗原BA-OVA,通过紫外扫描和SDS PAGE凝胶电泳鉴定其偶联效果。将免疫抗原BA-BSA免疫BALB/c小鼠,利用间接ELISA、间接竞争ELISA及交叉反应试验分别对所获多克隆抗体的效价、敏感性、特异性等免疫学特性进行鉴定。【结果】紫外扫描和SDS-PAGE凝胶电泳结果表明人工抗原偶联效果良好。ELISA结果表明,多克隆抗体的效价达到1∶256 00,半数抑制浓度（IC₅₀）为22.33 ng/mL,且与巴氯芬结构类似物及其他瘦肉精类药物（γ-氨基丁酸、氯丙那林、可乐定、赛庚啶、克伦特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺）交叉反应率均小于0.3%,具有良好的敏感性和特异性。【结论】成功合成了巴氯芬人工抗原,并制备了免疫学特性良好的巴氯芬鼠源多克隆抗体。     

兔抗双酚A多克隆抗体的制备

[目的]通过动物免疫制备抗双酚A多克隆抗体。[方法]采用双酚A半抗原（BPAH）和双酚酸（DPA）分别与牛血清蛋白（BSA）偶联制备免疫抗原,免疫新西兰白兔获得抗血清;采用间接竞争ELISA法测定抗血清的效价。[结果]经紫外扫描及红外光谱分析,完全抗原BPAH-BSA及DPA-BSA制备成功;供试3只阳性大白兔的抗血清效价分别为〉51200、25600和12800,完全抗原BPAH-BSA免疫的大白兔抗血清效价高于DPA-BSA免疫的大白兔抗血清效价。[结论]该研究成功制备了高效价抗双酚A多克隆抗体。     

鼠源莱克多巴胺多克隆抗体的制备

本研究根据莱克多巴胺(RAC)的结构特性,采用碳化二亚胺-N-羟基琥珀酰亚胺(EDC-NHS)法将RAC与牛血清白蛋白(BSA)偶联,经紫外光谱扫描鉴定,成功合成了免疫抗原(RAC-BSA),用合成的免疫抗原免疫小鼠获得了高效价的鼠源多克隆抗体,效价均达1:32 000以上。该研究方法和结果为动物源食品中RAC残留的检测奠定了基础。     

基于3 种载体蛋白的莱克多巴胺抗原的合成与检测

为制备高效莱克多巴胺(Ractopamine,RAC)抗体,将人工合成的RAC-琥珀酸酯半抗原与3种载体蛋白(BSA、OVA和KLH)偶联合成人工抗原,采用紫外光谱扫描、测定偶联比和ESI-MS进行鉴定;通过免疫小鼠获得抗血清,采用ELISA比较其效价,对3种人工抗原的免疫原性进行评定,结果显示3种抗血清效价为4000~32000,表明合成的3种人工抗原都具有免疫原性,其中以KLH为载体蛋白的抗原的免疫效果较好,可用于制备高效RAC抗体。     

小鼠TRIM59蛋白多克隆抗体的制备、鉴定与初步应用

【目的】制备兔抗鼠三结构域蛋白59(Tripartite motif-containing 59,TRIM59)多克隆抗体。【方法】利用PCR方法得到小鼠TRIM59基因片段,将其克隆至pGEX-2T原核表达载体中,转入大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达GST-TRIM59融合蛋白。GST-TRIM59融合蛋白经亲和层析纯化浓缩后免疫新西兰大耳白兔,制备多克隆抗体,通过ELISA测定兔抗鼠TRIM59多克隆抗体效价,用Western blot测定其特异性。用免疫组织化学方法检测TRIM59在小鼠前列腺癌组织中的表达。【结果】成功构建了pGEX-2T-TRIM59原核表达重组质粒,并诱导表达出GST-TRIM59融合蛋白,免疫新西兰大耳白兔5周后获得多克隆抗体。ELISA测定结果表明,TRIM59多克隆抗体效价为1∶106以上;Western blot分析表明,TRIM59多克隆抗体具有良好的特异性。免疫组织化学检测发现,TRIM59在小鼠前列腺癌组织细胞中高表达。【结论】成功地制备了特异性良好的兔抗鼠TRIM59多克隆抗体,其具有良好的免疫学活性,能够用于相关研究。     

西马特罗多克隆抗体的制备及其免疫学检测方法的建立

为建立一种特异、敏感、快速、准确的西马特罗(Cimaterol,CIM)残留检测方法,成功合成其完全抗原并免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,建立其免疫学检测方法。应用重氮化法偶联西马特罗与载体蛋白BSA、OVA,合成免疫抗原CIM-BSA和检测抗原CIM-OVA,并采用UV、SDS-PAGE、质谱3种方法进行完全抗原的鉴定。用CIM-BSA免疫新西兰大白兔制备抗西马特罗多克隆抗体并建立间接竞争ELISA检测方法。结果表明,成功合成了西马特罗完全抗原,具有合成抗原的分子特征;免疫新西兰大白兔后,成功制备了抗西马特罗多克隆抗体,其效价为1∶64 000,对西马特罗的半数抑制质量浓度为4.26μg/L,与特布他林、莱克多巴胺、沙丁胺醇、齐帕特罗等β_2型受体激动剂药物无交叉反应。经过条件优化,建立了西马特罗间接竞争性ELISA检测方法,其最低检测限为0.04μg/L,在0.1～12.8μg/L检测范围内,线性关系拟合度为R~2=0.977 1,拟合曲线方程为y=-0.246 9x+0.662 3。检测猪尿和饲料样品,回收率分别为96.3%～103.9%和67.0%～105.0%。综上,成功建立了具有良好应用前景的西马特罗间接竞争ELISA免疫学检测方法。     

洛美沙星鼠源多克隆抗体的制备

用合成的LMLX-BSA偶联物免疫小鼠,ELISA方法检测抗体效价,制备洛美沙星(LMLX)多克隆抗体。结果表明:5只动物中4只产生了高效价的抗体,1只产生的效价较低。用合成的LMLX-BSA偶联物免疫小鼠获得了高效价的多克隆抗体。