神经激肽B在大鼠下丘脑-垂体-卵巢轴上的表达

【目的】探究初情期启动前、启动中、启动后大鼠下丘脑、垂体和卵巢中神经激肽B(Neurokinin B,NKB)的表达变化。【方法】以SD雌性大鼠为研究对象,分别取大鼠的下丘脑、垂体和卵巢组织制作冰冻切片,运用免疫荧光染色法检测SD大鼠下丘脑、垂体和卵巢上NKB的分布。【结果】NKB主要分布于各时期大鼠下丘脑的弓状核、腹内侧核、室旁核、腺垂体以及卵巢的黄体细胞、间质细胞。但NKB在不同时期表达水平不同,在初情期启动前(出生后25d)和启动后(出生后60d)表达最强,在初情期启动中最弱(P0.05)。同一时期不同核团之间NKB表达水平也不同,初情期启动前和启动中室旁核最强,弓状核次之,腹内侧核最弱(P0.05);在初情期启动后,弓状核和腹内侧核中NKB的表达显著高于室旁核(P0.05)。腺垂体中NKB在初情期启动时表达最强,初情期启动前次之,初情期启动后最弱(P0.05)。卵巢间质细胞中NKB在初情期启动中的表达显著低于初情期启动前、后(P0.05)。卵巢黄体细胞中NKB在初情期启动后表达最强,初情期启动时最弱。【结论】NKB可能与初情期启动的调控密切相关。     

外源性神经激肽B对大鼠初情期的影响

【目的】研究神经激肽B(NKB)中枢给药对大鼠初情期启动、下丘脑Kisspeptin和促性腺激素释放激素(GnRH)基因及蛋白质的表达水平,以及血清中性腺激素含量的影响,以了解NKB在调节初情期方面的作用。【方法】将初情期前SD雌性大鼠分为NKB组、NKB拮抗剂组和对照组,分别侧脑室注射60 pmol/μL NKB溶液、0.3 nmol/μL NKB拮抗剂和生理盐水,注射剂量为10μL/只,每日观察阴门开启情况,统计阴门开启时间。所有大鼠均在阴门开启时采集血样,分离血清,并采集下丘脑、卵巢、子宫,称卵巢、子宫质量。分别采用免疫荧光共定位和实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术,分析下丘脑中GnRH和Kisspeptin蛋白和基因的表达情况,并分别通过酶联免疫吸附法(ELISA)和放射性免疫法(RIA)检测血清中NKB和性腺激素(雌二醇、孕酮)水平。【结果】NKB使大鼠阴门开启时间显著提前(P0.05),卵巢质量显著降低(P0.05),对子宫质量无明显影响(P0.05);NKB拮抗剂使阴门开启时间显著推迟(P0.05),对卵巢和子宫质量无显著影响(P0.05)。与对照组相比,NKB组SD大鼠下丘脑Kiss1和GnRH mRNA的表达显著提高(P0.05);GnRH~+细胞数量在室旁核(PVN)和正中隆起(ME)显著增加(P0.05),而在下丘脑弓状核(ARC)中显著减少(P0.05),Kisspeptin~+细胞数量在ARC和室周核(PeN)中显著增加(P0.05),在PVN中无显著差异(P0.05);血清中E_2和P_4水平均显著增加(P0.05)。但在NKB拮抗剂组中,SD大鼠下丘脑Kiss1和GnRH mRNA的表达低于对照组,但无显著差异(P0.05), GnRH~+细胞数量在ARC中显著增加(P0.05),在室旁核PVN和ME则显著降低(P0.05),ARC和PeN中Kisspeptin~+细胞的数量显著减少(P0.05),且血清中E_2和P_4水平均显著降低(P0.05)。【结论】NKB通过调节下丘脑Kisspeptin和GnRH的表达以及提高血清中E_2和P_4水平来促进大鼠初情期启动。     

雌激素和IFN-γ对去卵巢大鼠下丘脑中Bcl-2和Bax表达的影响

【目的】研究雌激素与γ-干扰素(IFN-γ)对下丘脑的协同保护作用。【方法】建立去卵巢(OVX)模型大鼠,然后将其分为摘除卵巢(OVX)组、假手术(SHAM)组、OVX+17-β雌二醇(E2)组、OVX+E2+50IU IFN-γ组、OVX+E2+200IU IFN-γ组和OVX+E2+800IU IFN-γ组共6组,分别在处理后的0,2,4,6,8周,用免疫组织化学SP法对各组大鼠下丘脑中凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达进行检测。【结果】OVX组大鼠下丘脑中Bcl-2的相对表达量随时程逐渐减少,4周后最低,6周后又逐渐上升,随后维持在一定的水平,Bax表达量的变化趋势则与之相反;OVX组Bcl-2和Bax的表达量与SHAM组差异极显著(P<0.01)。OVX+E2组大鼠下丘脑中Bcl-2的相对表达量增加,Bax的相对表达量降低,均与OVX组差异显著(P<0.05)。OVX+E2+200IU IFN-γ组Bcl-2的相对表达量极显著高于OVX组,显著高于OVX+E2组,Bax的总体变化趋势与OVX+E2组一致;OVX+E2+50IU IFN-γ组和OVX+E2+800IU IFN-γ组Bcl-2和Bax的相对表达量与OVX+E2组差异不显著(P>0.05)。【结论】雌激素的缺乏增强了下丘脑神经元对凋亡的敏感性,而外源生理剂量E2与适当剂量的IFN-γ,在一定时期内对这种凋亡有重要的保护作用。     

外源性神经激肽B对雌性大鼠生殖轴GnRH和Kisspeptin表达的影响

为研究外源性神经激肽B(NKB)对雌性大鼠下丘脑促性腺激素释放激素(GnRH)和下丘脑-垂体-卵巢轴(HPOA)GnRH和Kisspeptin表达的影响,将40只60d的Sprague-Dawley(SD)雌性大鼠随机分为试验组和对照组,侧脑室分别注射NKB溶液和等体积生理盐水,20min后处死采集样品。采用免疫荧光技术分析各组织的GnRH和Kisspeptin蛋白表达,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)分析GnRH和Kiss1mRNA的表达量变化。结果显示,与对照组相比,试验组下丘脑GnRH mRNA显著增加(P0.05),Kiss1 mRNA表达量显著降低(P0.05);试验组下丘脑视前区(POA)中GnRH阳性细胞数量显著增加(P0.05),弓状核(ARC)和正中隆起(ME)中GnRH阳性细胞数量增加(P0.05),但下丘脑ARC,POA,室旁核(PVN)和前腹侧室旁核(AVPV)中Kisspeptin阳性细胞数显著减少(P0.05);且NKB抑制腺垂体中Kisspeptin的表达(P0.05),但不影响卵巢中Kisspeptin的表达。综上,NKB通过调节HPOA Kisspeptin和下丘脑GnRH的表达来调控雌性大鼠的生殖。     

17-β雌二醇对去卵巢大鼠垂体前叶IFN-γ表达的影响

【目的】探讨雌激素对去卵巢大鼠垂体前叶γ-干扰素(Interferon-γ,IFN-γ)表达的影响。【方法】将大鼠分为对照组(CG组)、去卵巢组(OVX组)和去卵巢并用17-β雌二醇治疗组(OVX+E2组),应用免疫组化SP法检测不同时程各组大鼠垂体前叶IFN-γ免疫阳性物质含量的变化特点。【结果】去卵巢后不同时程,OVX组大鼠垂体前叶IFN-γ表达较CG组显著减少(P<0.05);OVX+E2组大鼠IFN-γ表达显著回升(P<0.05),且在第4周时回升至CG组水平。【结论】雌激素对大鼠垂体前叶IFN-γ免疫阳性物质的表达有明显影响,提示IFN-γ可能以自分泌或旁分泌方式,参与雌激素对垂体前叶调节功能的部分作用。     

雌激素对脾脏中Bcl-2和Bax蛋白表达的影响

利用免疫组化SP法,观察去卵巢大鼠脾脏中凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达的变化。结果表明,去卵巢组(OVX组)大鼠脾脏内Bcl-2表达显著减少,Bax表达极显著增加;17β-雌二醇治疗组(OVX+E2组)大鼠的2种蛋白表达可恢复到接近正常水平。说明去卵巢大鼠由于缺乏内源性雌激素,引起脾脏内Bax蛋白表达增加,Bcl-2表达减少;而补充外源性雌激素可缓解或抑制这一变化。     

青年摩拉杂交一代水牛下丘脑催产素的免疫组化定位

为研究青年期摩拉杂交水牛催产素(oxytocin,OT)神经元的表达特点,采用免疫组织化学技术中的Pic-TureTM二步法,对青年期摩杂一代水牛催产素神经元的定位及分布进行了研究。结果表明:下丘脑分泌OT的神经元主要分布在室旁核、视上核和弓状核,在视前内侧核、视交叉上核、下丘脑前核、下丘脑后核、背内侧核、腹内侧核和乳头体核等核团也有一定数量的阳性神经元;阳性神经纤维仅见于室旁核、弓状核、乳头体核,在正中隆起第三脑室室管膜附近有较多数量的阳性神经纤维。观察结果提示:下丘脑OT经神经垂体、第三脑室、血管3条途径释放;不同种属动物下丘脑OT存在差异。     

GHS-R1a在大鼠下丘脑-垂体-卵巢轴上的定位及其mRNA的周期性表达

取成年SD大鼠的下丘脑、垂体、卵巢组织制成石蜡切片,采用PV-9000两步法免疫组织化学检测GHS-R1a在下丘脑-垂体-卵巢轴上的定位.实时荧光定量PCR检测GHS-Rla mRNA在不同发情周期大鼠F丘脑-垂体-卵巢轴上的表达.结果表明:GHS-R1a主要分布在下丘脑的弓状核、腹内侧核、正中隆起等,腺垂体的嗜色细胞...     

奶山羊下丘脑中催产素神经元的分布——ABC法研究

分泌催产素的神经元主要分布在室旁核(59.1％)和视上核(17.9％),此外在穹窿周核、腹内侧核、腹外侧核、交叉上核和乳头体外侧核较多(各约占2％～4％),有少量分布在弓状核、室周核、背内侧核、环核、前连合核、下丘脑前核、下丘脑外侧区,乳头体上核、乳头体内侧核(各1％左右)。阳性神经纤维仅见于室旁核、下丘脑前核、视上核、交叉上核等少数核团,在正中隆起和第三脑室室周可见到一定数量的阳性神经纤维。     

用原位杂交法研究猪下丘脑内瘦素长形受体mRNA的分布定位

用体外转录方法合成了瘦素（leptin）长形受体（Ob-Rb)反应和正义RNA探针，用原位杂交法研究了5冰头2－3月龄母猪下丘脑内瘦素长形受体mRNA的分布定位，结果表明，猪瘦素长形受体mRNA分布于下丘脑的的弓状核、腹内侧核，背内侧核，室旁核，室周核和下丘脑外侧区。     

能量条件对鸭下丘脑5-羟色胺样神经元的影响

 选用来自同一父母代的1日龄健康樱桃谷鸭60羽，饲喂1周后，随机分为2组：高能组和低能组，分别饲喂高能和低能日粮。饲喂4周后，处理动物：灌流固定，取全脑后固定4 h，入8%蔗糖溶液中4℃保存。制作石蜡切片，采用免疫组化链霉亲和素-生物素-过氧化物酶复合物法( Streptavidin -biotin-peroxidase complex method，SABC)进行染色，并用图像分析系统作半定量分析。结果显示：高能组室旁核（17.73±1.41个/19.46×103μm2）及腹内侧核（15.80±1.71个/ 19.46×103μm2）有大量的阳性胞体；低能组外侧区（11.25±1.53个/19.46×103μm2）也有大量的阳性胞体，而室旁核没有。上述研究结果表明，下丘脑5-羟色胺样神经元参与摄食和能量代谢的调节。     

催产素在广西本地水牛下丘脑-垂体-卵巢轴的免疫组化定位

[目的]研究催产素（OT）在广西本地水牛下丘脑、垂体及卵巢的分布,进而了解OT在下丘脑、垂体及卵巢三者之间分泌释放途径。[方法]采用免疫组织化学SuperPicTureTM二步法检测5头广西本地水牛的下丘脑、垂体和卵巢中催产素（OT）的分布情况。[结果]下丘脑中分泌OT的神经元主要分布在弓状核、视上核及室旁核,在腹内侧核、腹外侧核、交叉上核、背内侧核、乳头体、下丘脑前核等核团也有一定数量的阳性神经元;在腺垂体发现OT免疫反应阳性产物,自垂体柄和正中隆起的一侧可见平行排列的OT阳性神经纤维断续地延伸至神经部;卵巢中只在生殖上皮、卵泡颗粒细胞和黄体细胞发现有大量OT免疫阳性产物。[结论]首次发现OT存在于广西本地水牛下丘脑-垂体-卵巢轴的各个环节,并且下丘脑中各主要核团均有OT免疫阳性神经元的分布,尤其以弓状核、视上核、室旁核分布最多,为进一步研究OT的合成和作用机制提供形态学依据,并对广西本地水牛的繁殖育种及泌乳起到一定的参考指导作用。     

益母草总黄酮对去卵巢大鼠下丘脑和海马雌激素受体α及β mRNA表达的影响

目的：观察益母草总黄酮对去卵巢大鼠下丘脑和海马雌激素受体α及β mRNA表达的影响,探讨其对绝经后骨质疏松的作用机制。方法选取10~11月龄SD雌性大鼠48只,随机分为对照组、去势组、益母草总黄酮组和雌二醇组,以双侧卵巢切除法建立大鼠骨质疏松模型。益母草总黄酮组、雌二醇组分别用益母草总黄酮、雌二醇给药4个月,采用RT-PCR法检测各组下丘脑和海马雌激素受体α及β mRNA的表达。结果大鼠卵巢切除后,血清中雌二醇水平、椎骨骨密度、子宫湿重、下丘脑和海马雌激素受体α及βmRNA的表达均明显下降。雌二醇治疗后血清中雌二醇水平、椎骨骨密度、子宫湿重升高,下丘脑和海马β mRNA的表达均明显下降。益母草总黄酮治疗后,血清中雌二醇水平、椎骨骨密度、下丘脑和海马雌激素受体α及β mRNA的表达均明显升高,子宫湿重无明显改变。结论益母草总黄酮对切除卵巢所致的骨质疏松大鼠有防治作用,对子宫无不良影响。     

Effects of Shenpang acupoint-stimulation on estrogen receptor immunoreactive neurons in thalamus of rabbits

To investigate the effects of Shenpang acupoint-stimulation in reproductive endocrinology, the changes in estrogen receptor immunoreactive (ER-IR) neurons after Shenpang acupoint-stimulation were studied by using immunohistochemistry. ER-IR positive reactions were detected in most nuclei of the thalamus. In the acupuncture-treated group, a great number of ER-IR positive neurons with clear dendrites existed in the nucleus, paraventricular nucleus, ventrolateral nucleus, ventromedial nucleus, ventroprincipal nucleus, centromedian nucleus, reticular nucleus, and periventricular nucleus of thalamus, and they were mainly located in the cytoplasm, nucleus and neutrite, and some also existed in the cytoplasmic membrane. In contrast, a few neurons existed in the above-mentioned nuclei in the control group, but they were slightly stained. It is concluded that Shenpang acupoint-stimulation can promote the expression of estrogen receptors in the above nuclei. Translated from Acta Veterinaria et Zootechnica Sinica, 2006, 37(1): 71–75 [译自: 畜牧兽医学报]     

神经元在动物下丘脑中分布的研究进展

对近年来研究较多的神经元在动物下丘脑各个神经核中的分布情况作了介绍,指出神经元在下丘脑各个神经核均有分布,甚至有几种神经元同时分布在某些神经核中,视上核(SON)、室旁核(PVN)及弓状核(ARC)是多种神经元集中分布的主要神经核,为进一步研究下丘脑的生理功能提供了形态学资料。     

The Effect of Energy on Serotonin-Like Neurons in Duck Hypothalamus

In the present study, immunohistochemical method (SABC method) was used to examine the distribution of serotonin-like neurons in hypothalamus of Cherry Valley ducks bred with high energy diet and low energy diet respectively. All films were analysed by using a computer-assisted image analysis system. In high energy group, labelled neurons are widely distributed in paraventricular nucleus(PVN, 17.73± 1.41 neurons/19.46× 103 μm2) and ventromedial hypothalamus (VMH,15.8±1.71 neurons/19.46×103 μm2); in low energy group, labelled ceils are widely distributed in lateral hypothalamus (LH,11.25±1.53 neurons/19.46×103 μm2), yet there is no positive neuron in PVN. These results indicate that serotonin-like neurons in hypothalamus are involved in the regulation of food intake and energy metabolism.     

饥饿程度对大鼠学习记忆能力影响的实验研究

目的 探究不同的饥饿程度对大鼠的空间学习记忆能力的影响。方法 将84只成年健康雄性SD大鼠随机分为8组,A-G组分别饥饿处理6、18、24、30、36、42 h,H组饱食处理作为对照组,应用Morris水迷宫对SD雄性大鼠进行行为训练,评价其对大鼠空间学习记忆能力的影响。结果 （1）A-G组不同饥饿处理的各组大鼠定位航行实验潜伏期呈现先减小后增大的趋势,饥饿24 h组VS对照组（22.58±4.44）s VS（29.23±6.81）s,P<0.01;饥饿36 h组VS对照组（35.58±4.89）s VS（29.23±6.81）s,P<0.05。空间探索实验穿越原平台次数,饥饿24 h组VS对照组：（3.18±0.72）次VS（2.33±0.67）次,P<0.05;饥饿42 h组VS对照组：（1.64±0.64）次VS（2.33±0.67）次,P<0.05,呈现先增大后减小的趋势;同样,目标象限滞留时间百分比也是呈现先增大后减小的趋势,饥饿24 h组VS对照组（40.06±3.65）% VS（33.64±4.55）%,P<0.05;饥饿42 h组VS对照组（26.70±4.50）% VS（33.64±4.55）%,P<0.05。（2）上述实验结束后的G组连续饥饿处理42 h定位航行实验的潜伏期呈现减小后缓慢增加的趋势,连续饥饿处理时间6 h VS连续饥饿处理时间24 h（28.74±5.24）s VS（20.88±4.3）s,P<0.01;连续饥饿处理时间6 h VS连续饥饿处理时间30 h（28.74±5.24）s VS（19.97±6.14）s,P<0.01。结论 短期的饥饿（18 h和24 h）有助于大鼠空间学习记忆能力的提高,长期的饥饿（36 h和42 h）处理使大鼠的学习记忆能力下降。     

“复方益孕液”治疗奶牛不孕症疗效及作用机理

选取产后60 d以上不发情,患有持久黄体和卵巢机能减退的不孕奶牛50例进行复方益孕液临床治疗试验,利用电化学发光免疫方法对部分患牛治疗前后血清雌二醇(E2)和孕酮(P4)水平进行检测.结果表明,复方益孕液治疗奶牛持久黄体和卵巢机能减退后,发情率分别为83.3%和77.3%,受胎率分别为80.0%和76.5%,显著高于对照组(P<0.01).持久黄体患牛在处理后血清中E2水平不断升高,最高值为(17.81±7.32)pg/mL,P4水平逐渐降低.最低值为(0.75±0.46)ng/mL;卵巢机能减退患牛在处理后血中E2和P4水平均升高,最高值分别为(14.16±9.45)pg/mL和(4.23±1.85)ng/mL.结果表明复方益孕液对治疗奶牛持久黄体和卵巢机能减退引起的不孕症疗效显著,且具有微调体内激素,溶解黄体和诱导发情作用.