甜菜夜蛾多酚氧化酶的特性及其对曲酸等抑制剂的反应

 以甜菜夜蛾5龄幼虫为试材提取多酚氧化酶,经40%饱和度硫酸铵沉淀、SephadexG-100凝胶过滤等步骤部分纯化后,总活力回收率为26.67%,酶活力提高8.56倍。以邻苯二酚为底物,测得该酶反应的最佳条件:pH=6.5,T=40℃,米氏常数Km=10.73mmol·L-1。研究了曲酸、香草酸等5种化合物对该酶活力的影响,结果表明,除芦丁外均对其酶活力产生一定的抑制作用,其中以曲酸抑制力最强,其抑制中浓度I50为36.71g·ml-1。曲酸对该酶活力的抑制动力学研究表明,该化合物是典型的可逆竞争型抑制剂,     

竹笋壳黄酮提取物对酪氨酸酶活性影响的动力学研究

酪氨酸酶是合成黑色素细胞的关键酶,为了探讨竹笋壳黄酮提取物对酪氨酸酶活性的影响,对竹笋壳中的黄酮类物质进行提取纯化,并采用酶动力学方法研究了笋壳黄酮提取物对酪氨酸酶单酚酶和二酚酶的抑制作用。结果表明:笋壳黄酮提取物导致单酚酶和二酚酶活力下降50%的抑制剂浓度(IC50)分别为5.6和4.6mg/mL;笋壳黄酮提取物对酪氨酸酶单酚酶的迟滞时间有明显的延长效应,8.0mg/mL的笋壳黄酮提取物可使单酚酶的迟滞时间从1.4min延长到4.2min;笋壳黄酮提取物对酪氨酸酶二酚酶的抑制作用表现为混合型可逆抑制,笋壳黄酮提取物对游离酶的抑制常数(Ki)为3.1mmol/L,对酶底物络合物的抑制常数(Kis)为5.7mmol/L;笋壳黄酮提取物对酪氨酸酶单酚酶和二酚酶均有抑制作用。     

虫酰肼对甜菜夜蛾酚氧化酶的抑制作用

【目的】研究证实虫酰肼是否对甜菜夜蛾(Spodoptera exigua)酚氧化酶活性具有抑制作用。【方法】采用生物化学方法,分别测定虫酰肼对甜菜夜蛾5龄幼虫离体酚氧化酶的作用特点和用虫酰肼浸泡饲料饲喂5龄幼虫后,虫酰肼对幼虫头部、血淋巴及表皮组织酚氧化酶活性的抑制作用。【结果】随着虫酰肼浓度增大,酚氧化酶活力呈逐渐下降趋势,虫酰肼对酚氧化酶的抑制中浓度(IC50)为5.43μmol·L-1。虫酰肼对酚氧化酶的抑制作用表现为混合型抑制,游离酶抑制常数(K i)和酶-底物络合物抑制常数(K is)分别为11.223μmol·L-1和34.036μmol·L-1。通过研究金属铜离子和酶液对虫酰肼吸收峰的影响,推测虫酰肼对甜菜夜蛾酚氧化酶的抑制作用不是与该酶活性中心的铜离子结合,而可能是与酚氧化酶蛋白结合发生作用有关。用28.41μmol·L-1和85.23μmol·L-1亚致死剂量浓度的虫酰肼分别处理甜菜夜蛾5龄幼虫24、48和72h后,测定其头部、血淋巴和表皮酚氧化酶的活性。结果表明,随着用虫酰肼处理时间延长,两个剂量的虫酰肼对幼虫头部、血淋巴和表皮酚氧化酶的抑制作用基本呈逐渐增大趋势;处理后相同时间,高剂量的虫酰肼对酚氧化酶活性的抑制率基本上高于低剂量的抑制率;虫酰肼对头部酚氧化酶的抑制率最高,血淋巴次之,表皮最低。【结论】虫酰肼对甜菜夜蛾酚氧化酶具有明显的抑制作用,幼虫新表皮形成过程受到阻碍可能与虫酰肼抑制酚氧化酶的活性有关。     

单糖对猪精液碱性N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的影响

以D-果糖、葡萄糖、D-甘露糖和N-乙酰-D-氨基葡萄糖(NAG)为效应物,研究它们对猪精液碱性N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase,EC3.3.1.52)活力的影响及抑制机理.结果表明:在特定浓度范围内,低浓度的葡萄糖对NAGase活力表现为激活作用,而D-果糖、D-甘露糖和NAG对酶活力均表现为抑制作用,抑制程度从高到低依次为D-甘露糖、NAG、D-果糖;D-甘露糖表现为可逆的竞争型抑制,抑制常数KI为18.36 mmol·L-1;NAG表现为可逆的混合型抑制,抑制常数KI和KIS分别为16.98和55.26 mmol·L-1.     

舞毒蛾(Lymantria dispar)酚氧化酶的酶学特征及有机溶剂对其活性的影响

经35%饱和度硫酸铵分级沉淀,将舞毒蛾(Lymantria dispar)酚氧化酶部分纯化。测定该酶最适pH值为6.5,pH在6.5～7.5范围内酶保持稳定的活力。最适温度为35℃,当温度低于25℃时,酶具有稳定的活力。以L-多巴、邻苯二酚和焦性没食子酸为底物时,测定酚氧化酶对底物的专一性,结果表明其Km值分别为3.19、10.74和19.26 mmol.L-1。本实验还研究了有机溶剂对酶活力的影响,结果表明甲醇、乙醇、丙酮和二甲苯对舞毒蛾酚氧化酶都有持续的抑制作用,其IC50分别为0.450、.430、.41和0.13 mmol.L-1。     

钙对水稻幼苗镍毒害的缓解效应

采用溶液培养法研究了镍对水稻幼苗生长的影响,以及钙对镍毒害的缓解效应。结果表明,0.1、1.0、10mmol·L-1Ni2+处理下,水稻幼苗的生长表现出明显的抑制,处理浓度愈大,抑制愈明显。加入Ca2+不同程度减轻了镍毒害,缓解程度依镍处理浓度而异。5.0mmol·L-1Ca2+的缓解作用稍好于1.0mmol·L-1Ca2+。Ca2+能基本解除0.01mmol·L-1Ni2+对幼苗地上部及根系的生长抑制作用,明显缓解0.1mmol·L-1Ni2+处理对幼苗的毒害。但随镍浓度的升高,Ca2+的这种缓解效应有限。     

竹笋醇提取物对酪氨酸酶活力的影响

用L-酪氨酸和邻苯二酚作底物,以曲酸、熊果苷为对照,测定不同种、不同季节竹笋笋肉、笋壳醇提取物对酪氨酸酶单酚酶和双酚酶活力的抑制作用。结果表明:麻竹笋肉醇提物浓度为1.0 mg/ml时对酪氨酸酶单酚酶的抑制作用最大,抑制率为45.97%,与0.1 mg/ml曲酸相接近,高于0.1 mg/ml熊果苷;醇提物对酪氨酸酶单酚酶的抑制作用从强到弱依次是:麻竹笋肉毛竹春笋肉麻竹笋壳毛竹春笋壳毛竹冬笋壳毛竹冬笋肉雷竹笋壳雷竹笋肉。麻竹笋壳醇提物浓度为1.0 mg/ml时对双酚酶的抑制作用最大,抑制率为30.05%,高于0.08mg/ml熊果苷和0.08 mg/ml曲酸;醇提物对双酚酶的抑制作用从强到弱依次是:麻竹笋壳麻竹笋肉毛竹春笋壳毛竹冬笋壳毛竹冬笋肉雷竹笋壳毛竹春笋肉雷竹笋肉。     

几种低分子量有机酸、磷酸对土壤胶体和矿物吸附酸性磷酸酶的影响

 研究了有机酸根和磷酸根等配体体系中 ,针铁矿、高岭石和黄棕壤、砖红壤胶体对酸性磷酸酶的吸附。结果表明 ,磷酸根对针铁矿表面酶的吸附量抑制最显著 ,酒石酸根对酶与土壤胶体和高岭石表面酶的吸附量影响最强。随着配体浓度增加 ,乙酸根对酶吸附的影响表现为先促进 (0～ 10mmol·L-1)后轻微抑制 (>10mmol·L-1) ;草酸则表现为先抑制 (0～ 5mmol·L-1)后促进 (5～ 5 0mmol·L-1) ;酒石酸和磷酸对酶的吸附表现为一直抑制。在乙酸、草酸和低浓度的酒石酸和磷酸根体系中 ,酶在土壤胶体和矿物表面的吸附等温线符合Langmuir方程 (L型 ) ,高浓度的酒石酸和磷酸对应的吸附等温线符合线性方程 (C型 )。在酒石酸根和磷酸根体系中 ,配体与酶加入顺序对酶吸附的影响较大 ,一般来说 ,配体和酶同时进入体系具有最低的酶吸附量。     

马铃薯中多酚氧化酶特性的研究

用分光光度法以酪氨酸为其褐变底物,研究了马铃薯中多酚氧化酶(PPO)的特性,结果表明,PPO作用产物的最大吸收波长为480nm,最适温度为25℃,最适pH为6.5,在此条件下用0.15mmol·L-1浓度的PPO的非竞争性抑制剂就可以完全抑制PPO的酶活力。     

羊栖菜多酚氧化酶特性

对羊栖菜(Sargassumfusiforme)多酚氧化酶(PPO)进行浸提和硫酸铵分级盐析粗提,并测定了酶的特性.结果表明:在供试反应体系中,当邻苯二酚量为0.3-1.2mL时,酶活力呈直线增长,底物含量太高会产生抑制作用,当底物含量∶酶含量=2∶1时,酶活力表现最高;其酶活力的最适温度为40-45℃,在35-60℃范围内酶均能保持较高的活力,但超过60℃时,其活力则迅速下降;在50-100℃下水浴处理1h,酶活力丧失50%-75%;酶活力的适宜pH相对偏碱,在pH9.1时表现为一个活力高峰,在pH11.0和12.0时酶活力仍很高.提取的羊栖菜多酚氧化酶,存在不同特性的同功酶.5种供试抑制剂对该酶均有一定的抑制效果,其中NaHSO3和L-半胱氨酸的抑制作用最强,在浓度为50μmol·L-1时,抑制率达100%.     

Inhibitory Effects of Kojic Acid on Phenoloxidase of Diamondback Moth Plutella xylostella

The effects of kojic acid on phenoloxidase (PO) of Plutella xylostella were investigated, when it had been partially purified by 40% saturated [(NH4)2SO4] and Sephadex G-100 gel filtration. Kojic acid showed inhibitory effects on both monophenolase and o-diphenolase activity of the PO. The inhibitor concentrations leading to 50% (IC50) activity lost were estimated to be 0.07 mmol L-1 for monophenolase and 1 mmol L-1 for diphenolase, respectively. Kojic acid can also prolong the lag time of PO for oxidation of L-tyrosine. The inhibition kinetics were analyzed by Lineweaver-Burk plots and kojic acid was found to be a reversible competitive inhibitor with the Ki of 0.47 mmol L-1. The ability of kojic acid to inhibit the enzyme activity may be associated with its ability to chelate copper at the active site. In addition, the iron ion was found to shorten the lag time obviously, but have no important effect on the monophenolase activity.     

牛耳枫提取物对甜菜夜蛾酚氧化酶的抑制作用

 【目的】筛选对甜菜夜蛾（Spodoptera exigua（Hübner)）酚氧化酶具有高抑制活性的化合物,寻找新型害虫控制剂的线索。【方法】以牛耳枫（Daphniphyllum calycinum Benth.）提取物Deoxycalyciphylline B和Methyl homosecodaphniphyllate为抑制剂,采用酶标仪微量法研究了其对甜菜夜蛾酚氧化酶的抑制活性及抑制类型。【结果】Deoxycalyciphylline B和Methyl homosecodaphniphyllate对甜菜夜蛾酚氧化酶的抑制中浓度(IC50)分别为2.439 mmol?L-1和0.879 mmol?L-1,2种化合物均为典型的可逆竞争型抑制剂,抑制常数（Ki）分别为2.051 mmol?L-1和1.269 mmol?L-1。【结论】2种生物碱对甜菜夜蛾酚氧化酶具有较好的抑制活性,可以以这2种化合物或其类似物为模板指导酶抑制剂的分子设计,是寻找新型害虫控制剂的重要途径。     

硼酸处理对Sensatiou芒果成熟的影响

用10mmolL-1 硼酸处理Sensatinn芒果果实,日的在于了解硼酸时延缓成熟过程,尤其对延缓那些与成熟有关的生理变化是否有一定的作用。8d的成熟过程所观浏的结果表明.①硼酸处理的鲜果质量下降不如对照明显,果皮中叶绿素含量的变化也类似,②硼酸处理的果实中,果胶甲脂酶及多聚半乳糖醛酸酶的活性高于时照,且果胶甲酷酶的活性比多聚半乳糖醛酸酶的活性早2d达到峰值,⑧与对照相比较,硼酸能降低果实的呼吸作用,而时果肉的总糖含量没有影响。     

大血藤RAPD 条件的优化

在进行大血藤遗传多样分析时, 首先要建立大血藤RAPD 反应优化体系, 有必要就反应条件进行探索。以改进SDS 法抽提藤本药用植物大血藤叶片总DNA , 进行随机扩增多态DNA (RAPD)分析, 分别测试了镁离子、dNTP 、模板DNA 含量、引物浓度、DNA 聚合酶量和牛血清白蛋白浓度对反应结果的影响。通过各因子的组合研究, 得出大血藤RAPD 分析较适宜的扩增条件是:15 L PCR 反应体积, 1 Taq 酶配套缓冲液(10 mmolL-1 TrisHCl pH 9.0 , 50 mmolL-1 KCl , 0.1 %Triton X-100 , 1.5 mmolL-1 MgCl2);25.01 10-9mols-1 Taq 酶(上海华美公司);10 ng 模板DNA ;15 pmol 引物(上海Sangon 公司);2 gL-1 BSA ;dATP ,dCTP ,dGTP 和dTTP 各0.15 mmolL-1 。图4 表2 参8     

曲酸对绿豆种子萌发及幼苗生长的影响

为更好地探索曲酸在农业上的应用效果,研究以蒸馏水、芸苔素内脂处理为对照,通过测定曲酸溶液浸种后绿豆种子的发芽势、发芽率以及幼苗鲜重、干重、茎长、根长、叶长、叶宽、根冠比、叶绿素等指标,探究不同曲酸浓度对绿豆种子萌发、幼苗生长及生理特性影响的差异。结果表明,浓度50～200 mg/L的曲酸溶液对绿豆种子的萌发和幼苗生长具有一定的促进作用,但随着曲酸浓度的增大,促进作用呈现减弱的趋势,其中以50 mg/L浓度的曲酸溶液处理效果最佳,能显著提高绿豆种子发芽率,促进幼苗生长,试验结果为曲酸在农业中的推广应用提供了一定的理论依据。     

亚硒酸钠对猴头菌生长的影响

于猴头菌(Hericiumerinaceus)菌丝发酵液中加入不同浓度的Na2Se2O3,振荡培养7d后,测定菌丝生长量和发酵液中主要胞外酶的活性。研究发现:一定浓度的Na2Se2O3可影响猴头菌丝的生长及菌丝生长期间多种胞外酶的活性,0.05～2.00mmol.L-1的Na2Se2O3均可促进菌丝生长和菌丝生长期间胞外蛋白酶、纤维素酶、淀粉酶的活性,以0.75mmol.L-1和1.00mmol.L-1的Na2Se2O3促进作用最为明显,菌丝生长量和胞外纤维素酶、淀粉酶的活性分别比对照提高了117.39%、134.78%,24.12%、77.39%,34.95%、52.43%;0.75mmol.L-1的Na2Se2O3显著提高了蛋白酶的活性,比对照高143.92%,而高浓度(≥1.5mmol.L-1)的Na2Se2O3对酶活的促进作用有所降低。     

甜槠ISSR-PCR 反应体系的正交优化

对甜槠Castanopsis eyrei 进行遗传多样性研究的过程中, 为了获得清晰可靠、重复性强的ISSR 扩增结果, 利用正交设计对Mg 2+ , dNTP , 引物, Taq 酶, 牛血清蛋白(BSA )和模板DNA 等6 种因素5 个水平进行筛选和优化。确定甜槠ISSR-PCR 最适宜反应体系为:10 L 反应体中, 1 Taq 酶配套缓冲液(10 mmolL-1 Tris-HCl , pH 9.0 , 50 mmolL-1 KCl , 10 gL-1 TritonX-100), 1.7 mmolL-1 Mg 2+ , 0.25 mmolL-1 dNTP , 8.34 nkat Taq DNA 聚合酶, 1.5 gL-1牛血清白蛋白, 6 pmol 引物, 12 ng 模板DNA 。甜槠扩增时引物UBC846 的最适退火温度为56.3 ℃。图2 表1 参23