两种不同冷冻方法对犬冷冻精液品质的影响

本试验以德国牧羊犬的精液为材料,采用液氮熏蒸法和细管炸熏法两种冷冻方式进行细管冷冻试验,用精子活力、顶体完整率和畸形率,作为判定精子冷冻品质的指标,确定两种冷冻方法对犬冷冻精液效果的影响。结果表明:(1)液氮熏蒸法冷冻后的精子活力为0.30±0.12,细管炸熏法冷冻后的精子活力0.38±0.08,细管炸熏法优于液氮熏蒸法,且差异显著(P<0.05);(2)液氮熏蒸法冷冻后精子顶体完整率42.20±3.51,畸形率25.60±7.03,细管炸熏法冷冻后精子顶体完整率43.50±4.64,畸形率24.50±5.94,细管炸熏法稍优于液氮熏蒸法,差异不显著(P>0.05)。     

德国牧羊犬精液冷冻保存的研究

以德国牧羊犬为实验动物,用两种不同的冷冻方法和剂型对犬的精液进行冷冻,以冻精解冻后的活率作为评定指标,提高犬精液利用效率和扩大犬精液的使用范围。采集4条公犬的精液40次,分别在四种稀释液中稀释,冷冻成两种剂型,根据冻后活率比较优劣。结果表明,稀释液2颗粒冻精的冻后活率显著高于稀释液1、稀释液3和稀释液4(P0.05);对犬的精液进行炸熏法和程序冷冻法冷冻,炸熏法冷冻的精液冻后活率均显著高于程序冷冻法冷冻的精液(P0.05)。     

马鹿XY精子分选及冷冻精液制备试验

为获得分选马鹿X、Y冷冻精液,对电刺激采集的15只马鹿精液经过7h长距离运输,流式细胞仪分离、冷冻,解冻后精液重分析和品质鉴定。结果显示,常规冻精和X、Y型冻精性别比分别为50%、93.11%和95.18%,常规冻精与X、Y型冻精组间差异显著(p<0.05);活率分别为0.45±0.04、0.55±0.04和0.53±0.03,常规冻精与X、Y型冻精组间差异不显著(p>0.05);存活指数分别为0.05、0.05和0.25,常规冻精与X、Y型冻精组间差异显著(p<0.05);顶体完整率分别为72.6±1.0%、74.6±0.5%和72.2±0.6%,常规冻精与X、Y型冻精组间差异不显著(p>0.05)。结论:马鹿XY分选冷冻精液性别比和品质达到性别控制人工授精的要求。     

犬精液冷冻实验研究

以豫西土犬为实验材料,以改进犬冻精的品质为目的,进行了犬精液冷冻研究。实验1,采集6条公犬的浓份精液36次,分别在稀释液Ⅰ和Ⅱ中冷冻成三种剂型(颗粒、0.5mL细管和安瓿),根据解冻后活率比较优劣。研究表明,稀释液Ⅰ中三种剂型的平均解冻后活率(0.35±0.04)显著高于稀释液Ⅱ(0.23±0.05;P<0.01);两种稀释液中颗粒冻精的平均冻后活率(0.34±0.08)显著高于细管(0.26±0.09;P<0.01)和安瓿(0.25±0.08;P<0.01),细管和安瓿冻后活率差异不显著(P>0.05)。实验2,分别将6条公犬每次采集的精液(每条采6次),按同样的方法稀释、平衡、分装,而后将分装的细管分为两组,分别采用程序Ⅰ和程序Ⅱ进行冷冻,其冻后活率分别为0.47±0.10和0.34±0.05(P<0.01);复苏率分别为57.86±8.85和42.27±3.80(P<0.01);顶体完整率分别为34.47±5.20和29.77±4.37(P<0.01)。结果表明:程序Ⅰ的冷冻效果明显优于程序Ⅱ。     

程序降温法冷冻犬细管精液的实验

分别将6条公犬每次采集的精液(每条采6次),按同样的方法稀释、平衡、分装,而后将分装的细管分为两组,分别采用程序Ⅰ和程序Ⅱ进行冷冻,其冻后活率分别为0.47±0.10和0.34±0.05(P<0.01);复苏率分别为57.86±8.85和42.27±3.80(P<0.01);顶体完整率分别为34.47±5.20和29.77±4.37(P<0.01)。结果表明:程序Ⅰ的冷冻效果明显优于程序Ⅱ。     

稀释液·清洁剂·冷冻程序对猪精液冷冻效果的影响

探讨了稀释液、清洁剂及冷冻程序对猪精液冷冻保存效果的影响。结果显示:①稀释液Ⅳ保存鲜精,精子活率明显低于其他组(P<0.05);但其作为冻精的解冻稀释液时,效果最佳(P<0.05),说明猪精液冷冻保存时可采用第Ⅰ～Ⅲ组稀释液,而解冻时采用第Ⅳ组较佳。②稀释液中于不同阶段添加SDS(Sodiumlaurylsulfate,十二烷基硫酸钠)或OEP(OrvusESPaste,清洁剂)均能显著提高冷冻精子活率(P<0.05),SDS与OEP对冻精活率的影响无显著差异(P>0.05)。③精液冷冻程序采用-70℃、液氮熏蒸与直接液氮熏蒸在对解冻后冻精精子活率上无显著差异(P>0.05)。添加咖啡因能有效提高冻精的解冻后活率。     

不同稀释剂对猪冷冻精液的影响

手握法采集12月龄大约克种公猪精液,在37℃下离心,弃去精清,收集浓缩段富含精子部分,用7种不同的稀释液进行稀释,应用液氮熏蒸法制作颗粒冻精。结果表明,在7种稀释液中,7号稀释液优于其他6种稀释液(p<0.05);与其他的冷冻保护剂相比,甘油的冷冻保护性能较好(p<0.01),其适宜浓度为2~4ml/l;干解冻(40~45℃)效果优于湿解冻,解冻后精子活率达0.46~0.49(p<0.05);稀释液中添加安钠咖可有效地延长精子的冻后存活时间(p<0.01)。     

猪0.5 mL细管冷冻精液的人工授精试验

【目的】制备猪0.5mL细管冷冻精液,并对其输精效果进行检测。【方法】制备猪0.5mL细管冷冻精液,解冻后对其品质(活力、快速直线游动精子比例、质膜完整率、顶体完整率)进行检测。将36头母猪随机分为8组:A-1、A-2组(各5头)均输新鲜精液精子4×109个,稀释至80mL,其中A-1组采用常规输精,A-2组采用子宫内人工输精;B-1、B-2组(各4头)均采用子宫内人工输冷冻精液,精子数量分别为1×109和2×109个,均稀释至20mL;C-1、C-2组(各5头)均采用子宫内人工输冷冻精液精子2×109个,C-1组稀释至60mL,C-2组稀释至80mL;D-1、D-2组(各4头)均采用子宫内人工输冷冻精液精子4×109个,D-1组稀释至60mL,D-2组稀释至80mL。人工授精后记录妊娠率、受胎率及产仔数量。【结果】制作的猪0.5mL细管冷冻精液解冻后,活力最高的达到(42.4±0.9)%,质膜完整率为(47.2±0.3)%,顶体完整率为(46.8±0.4)%。新鲜精液平均妊娠率为100%,产仔数为9.00±0.63;冷冻精液平均妊娠率为72%,产仔数为6.64±0.82,新鲜精液妊娠率和产仔数均显著优于冷冻精液。【结论】新鲜精液人工输精效果优于冷冻精液;冷冻精液采用60和80mL稀释液体积对产仔率、产仔数没有明显影响;冷冻精液通过子宫内人工输精,效果最佳的精子数为2×109个,稀释液体积为60mL。     

猪精液颗粒冷冻技术的研究

为提高猪冻精质量,加速猪冻精在生产上的应用,本试验以解冻后的精子活率、顶体完整率和体外受精(IVF)结果作为判定指标,探讨了冷源和Equex.STM对猪精液颗粒冷冻效果的影响。手握法采集成年、健康种公猪精液,分别采用含有Equex.STM的稀释液和普通稀释液进行两步法稀释,然后以干冰或液氮为冷源进行精液冷冻。结果表明,以干冰为冷源滴冻精液冻后活率为0.487833±0.046761,顶体完整率为0.782±0.039704,而以液氮为冷源的方法冻后活率为0.3334±0.055734、顶体完整率为0.5578±0.068482,前者在这两项指标上均显著优于后者(P<0.05)。另外,在稀释液中添加Equex.STM,以干冰为冷源进行滴冻,可使冻精顶体完整率极显著提高(P<0.01)。以含有Equex.STM的稀释液采用干冰滴冻的冻精进行IVF,胚胎卵裂率、囊胚率分别为0.5316±0.125582和0.216±0.053198。结果表明,采用Equex.STM作为冷冻保护剂并以干冰作为冷源可以获得高质量的猪冷冻精子。     

新疆驴精液浓缩冷冻的研究

试验以假阴道采集新疆驴精液,并用5种不同稀释保护液稀释冷冻后,选取其中较为理想的稀释液作为对照组,再通过2种不同的离心方法进行离心浓缩试验,并对解冻后精液的品质进行检测。结果表明:(1)5号稀释液冷冻-解冻精液后,精液活力、顶体完整率要显著高于其他4种稀释液(P<0.05);(2)先添加生理盐水再离心浓缩(离心2组)冻后精液的活力要显著高于对照组和离心1组(P<0.05),在顶体完整率方面,对照组要显著高于离心组(P<0.05),而对照组的尾部畸形率要显著低于离心组(P<0.05)。     

小尾寒羊精液冷冻温度曲线初步研究

在超低温温度计的监控下 ,用氟板法进行了小尾寒羊冻精颗粒的制作。结果表明 ,小尾寒羊精液冷冻的关键因素是冷冻温度和降温速度 ,其冷冻温度曲线的始冻温度为 - 12 4～ - 10 8℃ ,热平衡温度和入氮温度为- 133℃ ,熏蒸温度为 - 10 8～ - 133℃ ;其降温温区分别为滴冻时间 45 s,熏蒸和热平衡共 5 m in,其中熏蒸时间2 5 6 s,热平衡时间 44 s,从而构成了完整的小尾寒羊精液冷冻温度曲线。     

猪精液冷冻与常温保存技术的研究

为研究冷冻保存和常温((17±0.5)℃)保存后猪精子活率、活力和顶体完整率,比较了猪精液冷冻稀释液中2种甘油含量细管法的快速冷冻效果,以及不同解冻温度对冷冻精液的影响,采用细胞计数法、FDA-PI双重染色法与Giemsa染色方法检测精子的活率、活力和顶体完整率。结果显示:3%(体积分数,下同)甘油冷冻解冻后精液的活率、活力(38.54%、52.24%)显著(P<0.05)高于2%甘油组(15.63%、28.22%),但3%甘油组顶体完整率(11.55%)显著(P<0.05)低于2%甘油组(21.71%)。38℃水浴解冻后的精子在39℃培养箱中4 h内活率高于0.3,而50℃水浴解冻后1 h后的活率低于0.3。精液稀释液Anderohep和BTS在常温((17±0.5)℃)保存新鲜猪精子的活率与顶体完整率上效果相似,保存3 d内精子活率达0.6以上,保存6 d内精子活率为0.3以上。结果表明,使用3%甘油冷冻保存及2种常温保存稀释液均可以较好地保存精子。     

DMA和甘油对公鸡精子冷冻保护作用的比较

比较了6%的DMA和11%的甘油冷冻洪山公鸡精液后精子在存活率、顶体完整率方面的差异.结果表明,用DMA做冷冻保护剂的颗粒型冷冻精液解冻后的精子存活率和顶体完整率分别为0.320±0.041和0.600±0.049,用甘油做冷冻保护剂的颗粒型冷冻精液解冻后的精子存活率和顶体完整率分别为0.313±0.036和0.597±0.040,两者差异不显著.用DMA做冷冻保护剂的细管型冷冻精液解冻后的精子存活率和顶体完整率分别为0.388±0.034和0.652±0.042,用甘油做冷冻保护剂的细管型冷冻精液解冻后的精子存活率和顶体完整率分别为0.433±0.054和0.750±0.048,前者在精子存活率(P＜0.05)和顶体完整率(P＜0.01)方面都显著低于后者.     

海藻糖、蔗糖和乳糖对猪精液冷冻保护效果的影响

比较了在冷冻保存液中添加不同水平海藻糖、蔗糖和乳糖对猪精液冷冻保护的效果。结果表明,添加3种双糖均能提高精液的冷冻保护效果,其最佳添加水平均为0.035 g/mL,在该添加水平下,海藻糖组的精子活率、活力和精子质膜完整率分别为(46.34±0.52)%,(41.38±0.39)%和(43.51±1.78)%,与蔗糖组差异均不显著(P>0.05),但均显著高于乳糖和对照组(P<0.05);海藻糖组的有线粒体活性精子百分率和精子顶体完整率分别为(44.56±1.16)%,(64.09±0.81)%,显著高于蔗糖、乳糖和对照组(P<0.05),3种双糖均随添加水平升高精子的顶体完整率逐渐升高;海藻糖组获能处理前后的精子获能率分别为(3.68±0.07)%和(41.82±0.56)%,显著优于蔗糖、乳糖和对照组(P<0.05)。说明海藻糖对猪精液冷冻保护的效果最好,最佳添加水平为0.035 g/mL。     

不同解冻方法对猪精液冷冻效果的影响

以姜曲海种公猪冷冻精液为研究对象,观察了使用2种不同解冻方法对精液品质及体外受精胚胎发育的影响.试验结果表明,冷冻精液从液氮取出后,使用37℃水浴30s解冻在精子运动度、质膜完整率、顶体完整率和体外受精胚胎发育率方面均显著优于在室温放置20s后迅速投入37℃水浴10s解冻(P＜0.05).而与新鲜精液体外受精卵裂率和4细胞胚胎发育率相比,37℃水浴30s解冻方法与对照组无显著差异(P＞0.05).表明37.C水浴30s解冻方法优于室温放置20s后迅速投入37℃水浴10s解冻方法.     

犬精液冷冻与人工授精的研究——Ⅱ稀释液和冻精剂型对犬冻精解冻后活力的影响

从6条公犬采集其浓份精液36次.分别在稀释液Ⅰ和Ⅱ中冷冻成三种剂型的冻精(颗粒0.5ml细管和安瓿),根据解冻后活力比较其优劣.研究表明:稀释液Ⅰ中三种剂型的平均解冻后活力(0.35±0.04)显著高于稀释液Ⅱ(0.23± 0.05;P<0.01);两种稀释液中颗粒冻精的平均冻后活力(0.34±0.08)显著地高于细管(0.26±0.09;P<0.01)和安瓿(0.26±0.08;P<0.01);细管和安瓿之间差异不显著(P>0.05).     

复方中草药添加剂对冷冻前后种公鸡精液品质及种蛋的影响

选取40周龄体重一致的安卡红种公鸡60只,随机分为A,B两组,每组30只.A组为试验组,饲喂基础日粮中添加1.5%复方中草药添加剂的日粮;B组为对照组,只喂基础日粮,研究复方中草药添加剂对冷冻前后种公鸡精液品质及种蛋受精率和健雏率的影响.结果表明:复方中草药添加剂能显著改善冷冻前种公鸡采精量、精子密度和精子畸形率(P＜0.05);同时也能显著改善冷冻后种公鸡的精子活率和精子畸形率(P＜0.05);冷冻前A组比B组受精率提高9.1%、健雏率提高3.7%,冷冻后A组比B组受精率提高11.9%、健雏率提高5%.由此可见,复方中草药添加剂能用来改善冷冻前后种公鸡的精液品质,进而提高种蛋的受精率和健雏率.     

除去精浆、添加维生素E及水浴平衡对莎能奶山羊精液冷冻效果的影响

主要探讨精液离心、添加VE及平衡方法对山羊细管冻精冷冻-解冻后活力、顶体完整率等的影响,为提高山羊精液冷冻保存效果提供依据.试验1:将鲜精稀释后分为3组,第1组为稀释精液1 000 r/min离心6 min,去掉一半的上清液;第2组用相同的方法反复离心3次,完全去掉精浆;第3组不离心,做为对照.试验2:在稀释液中添加15 g/L VE,以不添加组作为对照.试验3:采用纱布包裹和水浴平衡两种方法.试验结果表明,离心去掉部分精浆组和离心去精浆组精子冷冻-解冻后的活力比不离心组高,差异显著(P＜0.05).精子顶体完整率和畸形率有所下降,但与对照组相比较差异不显著(P＞0.05).离心去掉部分精浆组和离心完全去精浆组相比,精子冷冻一解冻后的活力、顶体完整率和畸形率差异不显著(P＞0.05).冷冻稀释液中添加VE组的顶体完整率显著提高(P＜0.05),畸形率变化与对照组无差异(P＞0.05),精子活力提高效果也不明显(P＞0.05).精液冷冻前平衡方法以水浴法为好,与纱布包裹平衡组相比,水浴平衡组的活力和顶体完整率高(P＜0.05),精子畸形率较低(P＜0.05).可见,精液离心后去掉适量精浆可显著提高冷冻后精子的活力;添加VE可显著提高精液冷冻后精子的顶体完整率;与纱布包裹平衡法相比,水浴平衡法可显著提高精液冷冻后精子的品质.     

猪精液0.5 ml细管快速冷冻和解冻方法的优化

 【目的】优化冷冻-解冻方法,提高0.5 ml细管快速冷冻保存猪精液的质量。【方法】冷冻方法：分别将细管水平置于液氮面上方3、5、7、9和11 cm处,每一水平位置细管分别熏蒸3、5、10、15和20 min后投入液氮保存,37℃×30 s水浴解冻,确定最优冷冻方法;在选择最优冷冻方法的基础上,分别采用37℃×30s(对照组)、42℃×25 s、47℃×20 s、52℃×15 s、57℃×10 s和62℃×5 s共6种方法水浴解冻,确定最佳解冻方法。【结果】采用3 cm×10 min冷冻方法,解冻0、8 h精液中精子活率、质膜完整率和顶体完整率均最高。采用相对“高温短时”解冻,精子活率、质膜完整率、顶体完整率和线粒体膜电位均较高,同时丙二醛浓度降低;57℃×10 s和62℃×5 s解冻的精子各项指标无显著差异（P＞0.05）,但前4项指标显著高于对照组（P＜0.05）,丙二醛浓度显著降低（P＜0.05）。【结论】优化猪精液0.5 ml细管快速冷冻的冷冻和解冻方法可以显著提高解冻质量,采用3 cm×10 min冷冻、57℃×10 s或62℃×5 s解冻方法效果最佳。     

冷冻精液的保存及使用

<正> 精液冷冻保存通常采用液氮(-196℃)和干冰(-79℃)保存。其最大优点是可长期保存,使用不受时间、地域以及种用雄性动物寿命的限制,可充分提高公牛的利用率。现将冷冻精液的保存和使用的技术要点介绍如下: 1 稀释液的配方:12％蔗糖液75ml,甘油5ml,卵黄20ml。 2 稀释:将经过检查合格的精液(活力0.6以上,精子密度中等)按1:2～5倍稀