外泌体及其miR-155参与免疫细胞之间的通讯

外泌体是一种细胞分泌的囊泡，里面含有丰富的核酸和蛋白质等物质，对于信息的传递、免疫功能的调节具有重要作用.本研究通过培养巨噬细胞、树突状细胞，收集上清液，分别采用外泌体提取试剂盒法和超速离心法提取外泌体，使用透射电镜法和Western blot法进行外泌体鉴定. 将提取的外泌体转染荧光标记，与淋巴细胞共同孵育24 h.采用含荧光标记的miR-155，分别转染到巨噬细胞和树突细胞中，提取细胞上清的外泌体，与淋巴细胞共孵育24 h.结果显示：超速离心法提取的外泌体更纯，但是SBI试剂盒提取的外泌体更多，适用于下一步试验；巨噬细胞及树突状细胞分泌的外泌体加荧光标记与淋巴细胞共培养后，可使淋巴细胞荧光增加；荧光标记miR-155的外泌体与淋巴细胞共培养，可使淋巴细胞荧光增加. 本研究证实了树突细胞、巨噬细胞分泌的外泌体及其包含的miR-155可作用于淋巴细胞，参与免疫细胞间的通讯，为进一步阐明外泌体的作用机制奠定了理论基础.     

乳腺炎对牛奶外泌体功能的影响：基于乳腺上皮细胞的观察

通过观察乳腺炎牛奶外泌体对乳腺上皮细胞(mammary epithelial cells, MECs)活力和天然免疫功能的影响,探究外泌体在乳腺炎发病机制中的作用。MECs经热灭活的乳腺炎病原(大肠埃希菌)刺激24 h后进行转录组测序和基因本体(gene ontology, GO)富集分析,发现有21条差异表达基因富集在细胞外囊泡外泌体(GO:0070062)这一细胞组分上,提示感染可引起宿主细胞外泌体生物学功能改变。在此基础上,采用正常牛奶来源的外泌体(N-exo)和乳腺炎牛奶来源的外泌体(M-exo)作用MECs,以培养于不含外泌体的培养基中的细胞为对照,采用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(methyl-thiazol-diphenyltetrazolium, MTT)法检测细胞活力,并采用实时荧光定量聚合酶链式反应检测MECs中白细胞介素8(interleukin-8, IL-8)、白细胞介素1β(interleukin-1β, IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)的表达。结果发现:正常牛奶外泌体对MECs活力无显著影响,而乳腺炎牛奶外泌体可显著抑制MECs活力;2种来源的外泌体对IL-8和TNF-α的表达均无显著影响,但正常牛奶外泌体可诱导表达IL-1β,而乳腺炎牛奶外泌体则缺乏诱导IL-1β表达的能力。上述结果提示,在乳腺感染过程中,进入牛奶中的外泌体可引起MECs活力下降,并可能参与介导有利于病原逃避免疫的微环境的形成。因而,在乳腺炎发病机制中,外泌体可能起着促进乳腺感染扩散的作用。     

抑制猪支持细胞外泌体对精原干细胞自我更新及分化的影响

[目的]本文利用体外模型检测猪支持细胞分泌外泌体的能力及其对猪精原干细胞(porcine spermatogonial stem cells, pSSC)自我更新及分化状态的影响。[方法]通过两步酶消化法分离猪支持细胞和pSSC并建立猪支持细胞-pSSC体外共培养模型，抑制猪支持细胞外泌体的分泌，检测pSSC自我更新及分化指标，研究支持细胞外泌体对pSSC命运的影响。[结果]分离得到的支持细胞的Wilm肿瘤蛋白1(WT1)阳性率为(87.1±0.02)%,整合素β-1蛋白(ITGB1)阳性率为(94.2±0.01)%,分离得到pSSC的早幼粒细胞白血病锌指蛋白(PLZF)阳性率为(80.6±0.02)%;通过Western blot分析、免疫荧光检测证实支持细胞外泌体的存在；证实20μmol·L^-1 GW4869可以抑制外泌体分泌且不损害支持细胞；GW4869处理后的支持细胞与pSSC共培养发现试验组较对照组pSSC状态差异较为明显，且RT-PCR结果显示猪精原干细胞PLZF基因表达水平显著升高；肥大/干细胞生长因子受体基因(KIT)、胸腺细胞抗原1基因(THY1...     

脐带间充质干细胞及其外泌体对宫颈癌HeLa细胞的作用初探

人脐带间充质干细胞是一种多能干细胞,可用于多种疾病的临床治疗。利用从人类脐带分离的间充质干细胞,以及从该间充质干细胞的培养液中分离提取的外泌体,通过与宫颈癌HeLa细胞共培养,研究间充质干细胞及其外泌体对HeLa细胞生物学表型的影响。结果表明:脐带间充质干细胞共培养均极显著抑制HeLa细胞的增殖、迁移及侵袭等表型,并极显著促进HeLa细胞凋亡。脐带间充质干细胞来源的外泌体处理HeLa细胞后,细胞增殖、迁移及侵袭也同样受到极显著抑制,并极显著促进细胞凋亡。这一研究提示脐带间充质干细胞及其外泌体并未在体外培养条件下促进HeLa细胞的生长、迁移,相反对HeLa细胞的表型具有一定的抑制作用。     

人脐带间充质干细胞源外泌体对黑色素瘤细胞生长的影响

为探讨人脐带间充质干细胞源外泌体对黑色素瘤细胞生长的影响,利用差速超速离心法提取人脐带间充质干细胞源外泌体,并用透射电子显微镜、Western blot方法鉴定外泌体形态、粒径和蛋白质;利用CCK-8法、细胞划痕试验、Transwell试验检测不同浓度人脐带间充质干细胞源外泌体对黑色素瘤细胞的增殖、迁移和侵袭能力的影响.结果表明:人脐带间充质干细胞源外泌体呈杯托状,平均粒径70 nm左右,表达标志性蛋白CD63和CD9.不同浓度人脐带间充质干细胞源外泌体对黑色素瘤细胞增殖、迁移和侵袭能力有促进作用,且呈时间、剂量依赖性,并在人脐带间充质干细胞源外泌体浓度为300μg·mL-1时达到最高,而在浓度为400 pg·mL-1时促进率开始明显下降.     

脂肪干细胞外泌体功能研究进展

脂肪干细胞外泌体(ADSCs-Exos)不含活细胞,抗原性低,性质稳定,在血管生成、组织再生、免疫调节等方面发挥了重要作用.作为一种无细胞疗法,ADSCs-Exos在组织修复与再生等方面具有广阔的应用前景.该文就ADSCs-Exos功能研究进展作一综述.     

利用CRISPR/Cas9技术构建永生化脐带间充质干细胞系及MYC-AS1转基因研究

人脐带间充质干细胞(hMSCs)是一种具有多向分化潜能的多能干细胞,在组织修复和某些疾病治疗的临床应用上发挥着重要作用.利用CRISPR/Cas9技术在腺相关病毒AAVS1位点插入具有磷酸甘油酸激酶PGK启动子和SV40-polyA的SV40 LT基因,使hMSCs达到永生化.并利用慢病毒构建具有抑癌作用的反义长链非编码RNA MYC-AS1转基因的hMSCs,从该细胞系的培养液中分离提取表达MYC-AS1的外泌体.通过处理肝癌HepG2细胞,研究外泌体对HepG2表型的影响.结果表明:与野生型MSCs相比,永生化细胞MSCs-SV40增殖显著加快,但其定向分化特性并未改变,可在体外稳定传代超过40代,且未发现成瘤性.MYC-AS1转基因hMSCs的外泌体能表达MYC-AS1,且显著抑制HepG2肿瘤细胞的增殖和迁移.这一研究通过CRISPR/Cas9技术敲入SV40LT基因成功构建了 hMSCs,其MYC-AS1转基因细胞的外泌体对HepG2肿瘤细胞具有明显的抑制作用,这对hMSCs及其外泌体的基础研究和临床应用研究具有重要意义.     

奶牛子宫炎性腔液外泌体小RNA分布和组成分析

【目的】筛选奶牛子宫内膜炎诊断新型标志。【方法】采用贝博试剂盒分别从健康奶牛、患子宫内膜炎奶牛的子宫腔液中分离外泌体,透射电子显微镜检测外泌体形态和粒径大小,蛋白免疫印迹法检测外泌体蛋白标记CD9的表达,Trizol提取外泌体内RNA,Agilent 4200生物分析仪检测RNA的分布与组成。【结果】透射电子显微镜下奶牛子宫腔液外泌体呈囊泡形,有完整的膜结构,粒径大小为50～150nm之间;蛋白免疫印迹法检测到外泌体内均有CD9表达;生物分析仪检测显示子宫内膜炎症改变了子宫腔液内小RNA长度分布和组成。【结论】子宫腔液中小RNA变化可以作为奶牛子宫内膜炎症诊断的新型标志。     

外泌体miR-218抑制脂多糖诱发子宫内膜上皮细胞免疫因子释放研究

[目的]探究奶牛子宫内膜上皮细胞来源外泌体及其miR-218在减轻大肠杆菌脂多糖诱发免疫反应中的作用.[方法]用不同质量浓度大肠杆菌脂多糖作用于奶牛子宫内膜上皮细胞系24 h后采用细胞计数试剂盒检测细胞活性;酶联免疫吸附测定检测免疫因子IL-1β和TNF-α释放;采用透射电子显微镜和蛋白印记法验证提取外泌体的粒径和标识蛋白CD63表达,荧光定量聚合酶链式反应法检测外泌体中miR-218表达变化;采用激光共聚焦显微镜观察外泌体与奶牛子宫内膜上皮细胞融合;细胞转染mimics 218检测其对大肠杆菌脂多糖诱发奶牛子宫内膜上皮细胞免疫因子释放的影响.[结果]100μg/mL大肠杆菌脂多糖处理奶牛子宫内膜上皮细胞后,IL-1β、TNF-α含量均显著高于对照组(P＜0.05);大肠杆菌脂多糖刺激奶牛子宫内膜上皮细胞来源外泌体中miR-218的表达量极显著低于奶牛子宫内膜上皮细胞来源外泌体中miR-218的表达量(P＜0.01);正常培养奶牛子宫内膜上皮细胞来源外泌体能够与大肠杆菌脂多糖处理的奶牛子宫内膜上皮细胞融合并与NF-KB (p65)蛋白共定位于细胞质中.将奶牛子宫内膜上皮细胞来源外泌体加入到100 μg/mL大肠杆菌脂多糖处理奶牛子宫内膜上皮细胞24 h后,显著抑制了大肠杆菌脂多糖引起的奶牛子宫内膜上皮细胞培养上清中的IL-1β和TNF-a释放(P＜0.05).同样的,转染进奶牛子宫内膜上皮细胞内mimics 218与磷酸化的NF-KB (p65)核外部分共定位并显著抑制了大肠杆菌脂多糖诱发的奶牛子宫内膜上皮细胞中TNF-α释放(P＜0.05),而对IL-1β释放无显著差异.[结论]miR-218能够随着健康子宫内膜上皮细胞分泌外泌体进入到受到大肠杆菌脂多糖刺激奶牛子宫内膜上皮细胞内,并与磷酸化p65核外部分共定位并抑制大肠杆菌脂多糖引起的TNFα的释放.     

前列地尔联合厄贝沙坦治疗糖尿病肾病的效果观察

目的观察前列地尔联合血管紧张素Ⅱ受体阻滞剂厄贝沙坦对糖尿病肾病患者的疗效。方法 94例糖尿病肾病患者随机分为对照组和观察组,每组47例,对照组单用厄贝沙坦治疗,观察组同时给予前列地尔及厄贝沙坦治疗,对比两组的疗效。结果两组治疗后的血肌酐（Scr）、肌酐清除率（Ccr）、尿素氮（BUN）及尿白蛋白排泄率（UAER）均有明显改善（P〈0.05或0.01）;观察组各指标改善更为明显（P〈0.05或0.01）。结论前列地尔和厄贝沙坦联合应用对糖尿病肾病的肾脏保护具有叠加作用。     

Metabolic aspects of acid-base change

The state of metabolic acidosis involves changes of a varied and subtle nature in other organs as well as in the kidney. This fact has been illustrated in metabolic studies with glutamine, a major substrate of the kidney and of various other organs. In addition to the well-described increase in renal glutaminase enzymes, the hexose monophosphate-shunt enzymes also are much more active during metabolic acidosis; this phenomenon is limited to the kidney; its exact meaning remains speculative, but its possible relation to renal excretion of acid, lipogenesis, and gluconeogenesis during acidosis has been discussed. In the kidney there are metabolic changes associated with ammonium chloride acidosis that affect the basic mechanisms of gene-directed growth. There is a renal regenerative process during this kind of acidosis that resembles in some respects the compensatory hypertrophy in the remaining kidney after unilateral nephrectomy, from which it also differs in important ways. Lastly, we must now regard the role of glutamine in renal metabolism as an affair that goes well beyond the specific needs of formation of ammonia during the normal and acidotic states. Glutamine enters the general metabolic mill of the kidney, its carbon skeleton is incorporated into all the major tissue components, and it is an important source material for gluconeogenesis in the kidney; all of these renal functions of glutamine are increased during metabolic acidosis. Thus there is a fruitful field of exploration ahead, not only in the biochemical aspects of the renal response, but also in the metabolic interrelations among different organs during various types of acid-base change. This article, in concentrating on metabolic acidosis, gives only a glimpse of a broader picture to come.     

装载鸡传染性支气管炎病毒 S1蛋白重组HD11细胞源外体的构建

为了给禽类巨噬细胞源外体在免疫应答的功能研究和家禽外体载体疫苗的研发奠定基础，本研究以鸡传染性支气管炎病毒(Infectious bronchins virus, IBV)S1蛋白作为模式抗原，通过慢病毒表达系统技术实现在HD11细胞中稳定表达S1蛋白，再利用超速离心从细胞培养物上清中分离纯化得到外体。蛋白免疫印分析、电镜与粒径分析检测等结果表明，在该重组HD11细胞分泌的外体中可检测到稳定的S1蛋白表达，显示成功构建了装载IBV S1蛋白的重组外体。     

青霉素菌渣残留降解物的蓄积毒性研究

[目的]初步研究青霉素菌渣残留降解物的蓄积毒性,进而探讨其是否具备作为蛋白饲料投入养殖业开发利用的条件。[方法]通过小鼠亚急性毒性试验,饲喂小鼠不同剂量的青霉素菌渣降解物（3%和6%）连续观察15周,记录每周小白鼠的体重和死亡情况;试验结束后抽样处死,取血测动物肝、肾功能,取心、肝、脾、肾称重,并在光镜下对肝、肾组织做病理学观察。[结果]试验组小白鼠体重、死亡率及肝、肾功能在15周内和对照组差异均不显著（P〉0.05）。低剂量组可见肝细胞、肾小管上皮细胞核有碎裂,少数肝、肾细胞有轻度水肿;高剂量组可见小白鼠肝组织中细胞核碎裂并有脂肪滴,多数肝细胞水肿,只有少数肝细胞无明显改变;肾脏可见门管区炎性细胞浸润,肾小管上皮细胞水肿、坏死。[结论]该实验条件下青霉素菌渣降解物对小鼠器官的实质细胞有轻度的毒性作用。     

青霉素菌渣残留降解物的蓄积毒性研究（摘要）（英文）

[目的]初步研究青霉素菌渣残留降解物的蓄积毒性,进而探讨其是否具备作为蛋白饲料投入养殖业开发利用的条件。[方法]通过小鼠亚急性毒性试验,饲喂小鼠不同剂量的青霉素菌渣降解物（3%和6%）连续观察15周,记录每周小白鼠的体重和死亡情况;试验结束后抽样处死,取血测动物肝、肾功能,取心、肝、脾、肾称重,并在光镜下对肝、肾组织做病理学观察。[结果]试验组小白鼠体重、死亡率及肝、肾功能在15周内和对照组差异均不显著（P〉0.05）。低剂量组可见肝细胞、肾小管上皮细胞核有碎裂,少数肝、肾细胞有轻度水肿;高剂量组可见小白鼠肝组织中细胞核碎裂并有脂肪滴,多数肝细胞水肿,只有少数肝细胞无明显改变;肾脏可见门管区炎性细胞浸润,肾小管上皮细胞水肿、坏死。[结论]该实验条件下青霉素菌渣降解物对小鼠器官的实质细胞有轻度的毒性作用。     

食蚊鱼泌尿系统结构

食蚊鱼泌尿系统包括中肾、输尿管、膀胱。中肾分化程度较低,包括肾小体和肾小管,无皮质、髓质之分,有肾小体聚集现象。肾小管由颈段、第一近曲小管、第二近曲小管、间段、远曲小管及搜集管组成。第一近曲小管上皮中有嗜伊红油滴细胞。肾中散布有淋巴髓样组织、甲状腺滤泡,因此肾脏为多种生理功能的复合性器官。输尿管位于两肾叶腹侧,粘膜层为单层柱状或假复层柱状上皮,缺粘膜下层,无纵肌,外膜甚薄或缺如。左右输尿管在后端合并,移行一段后突出形成膀胱。膀胱内壁具绒毛,绒毛表面为移行上皮。     

脓毒血症致急性肾损伤及右美托咪定保护作用机制研究进展

脓毒血症可造成机体多器官、组织继发性损伤,其中肾脏是最易受其侵害脏器之一。脓毒血症致急性肾损伤(Septic acute kidney injury,SAKI)是病患预后不良、高死亡率主要原因,但SAKI发病机制、治疗药物作用靶位以及保护作用尚不明确。以往认为SAKI主要由肾脏血流动力学改变导致肾小管上皮细胞坏死造成,近年研究发现,血流动力学改变并非其最主要病理生理机制,还包括由内毒素介导的炎症反应、肾脏细胞凋亡、凝血功能异常致肾小球内栓塞以及坏死细胞造成肾小管阻塞等。右美托咪定(Dexmedetomidine,DEX)对SAKI具一定保护作用,其保护机制尚无定论,多集中在抑制肾脏炎性因子产生,减轻氧化应激反应及细胞凋亡等方面。DEX具体分子作用机制和药效靶位尚不清楚,有待进一步研究。     

SERUM FACTOR IN RENAL COMPENSATORY HYPERPLASIA

Serum from uninephrectomized rats was injected into normal recipient rats. This led to an increased incorporation of tritiated thymidine in the kidney cells, but not in the liver cells of the recipients. The results suggest that there is a humoral substance acting specifically on the kidney that promotes renal compensatory hyperplasia.     

稚鳖粘液性肠炎病的病理形态学研究

稚鳖粘液性肠炎病的主要眼观病变是病鳖肛门排出粘液块,组织病理变化主要为肠腺分泌亢进,肠上皮细胞脱落,肠壁充血,肝脏脂肪变性,脾脏炎性细胞浸润,肾脏肾小管上皮细胞水泡变性,肺也有不同程度的病变。电镜下观察,发现随着病程的延续肠道的病变相应地加重,主要表现为炎性细胞浸润,上皮细胞变性和坏死。     

基础研究BXSB小鼠肾组织NF-κB的表达及意义

目的:了解NF-κB在BXSB狼疮性肾炎小鼠肾组织中的表达及意义。方法:取BXSB狼疮性肾炎小鼠(即LN组)与C57BL/6小鼠(即对照组)各10只,应用免疫组织化学SP法检测肾组织中NF-κB的表达,并与病理学指标行等级相关分析。结果:LN组小鼠肾组织中NF-κB表达较对照组显著增高(P<0.05);NF-κB在肾小球和肾小管均有表达,但以肾小管表达更为显著;肾小球NF-κB阳性细胞数、NF-κB阳性肾小管数与肾组织活动指数呈高度正相关。结论:NF-κB可能参与了LN小鼠的发病机制,检测其在肾组织中的表达可作为反映狼疮肾组织活动病变的参考指标之一。