斜纹夜蛾核型多角体病毒Ⅱ基因组DNA同源重复区生物信息学分析

利用生物信息学方法,对斜纹夜蛾核型多角体病毒Ⅱ型分离株基因组DNA序列进行分析。结果表明,斜纹夜蛾核型多角体病毒Ⅱ基因组DNA含有7个同源重复区,分别包含3~8个64 bp不完全回文序列,在回文序列中心均含有一个Pvu I限制性酶切位点,并且存在多个正向或反向互补的重复序列和与病毒基因组DNA复制相关的motif基序,对7个hrs中40个回文序列进行比对分析,发现其序列的核苷酸一致性高达90%以上。     

茶尺蠖核型多角体病毒多克隆抗体的制备及检测应用

以纯化的茶尺蠖核型多角体病毒(Ectropis obliqua nucleopolyhedrovirus,EcobNPV)作为抗原免疫大耳白兔,获得多克隆抗体,Indirect-ELISA效价为1∶51 200;工作浓度分别为EcobNPV 1∶1 600、兔抗血清1∶3 200。用所制备的多克隆抗体对提纯的多角体进行Western-blot分析表明制得的抗体对茶尺蠖核型多角体病毒有良好的特异性。应用于不同来源茶园昆虫多角体病毒分离株的检测,取得了理想的检测效果。     

斜纹夜蛾核型多角体病毒Ⅱ型分离株同源重复区hr1的结构功能分析

斜纹夜蛾核型多角体病毒Ⅱ型(Spodoptera litura nucleopolyhedrovirusⅡ,SpltNPVⅡ)基因组DNA同源重复区hr1大小为1 746 bp,含有6个64 bp不完全回文序列、4个正向重复序列以及7个与病毒基因组DNA复制相关的基序。瞬时表达分析结果表明,SpltNPVⅡhr1在感染野生型家蚕核型多角体病毒(Bombyx mori nucleopolyhedrovirus,BmNPV)和苜蓿丫纹夜蛾多粒包埋型核多角体病毒(Autographa californica multiple nucleopolyhedrovirus,AcMNPV)的BmN和Sf21细胞中均具有增强早期基因ie1启动子活性的功能,增强效率分别为30、350倍;实时荧光定量PCR结果显示,hr1在BmN和Sf21细胞中具有基因组DNA复制起始原点的功能,拷贝数分别为(8.46×10~4±6.13×10~3)、(5.92×10~6±2.95×10~5)copies/μg DNA。研究证明,SpltNPVⅡhr1在异源细胞BmN和Sf21中具有复制起始原点和增强子的双功能作用。     

茶尺蠖核型多角体病毒SalI 1.1 k片段的克隆及gp41部分序列分析

茶尺蠖核型多角体病毒(EoNPV)是尚未完成基因组测序的一种杆状病毒.为了解其基因组的信息,从病虫中分离纯化了茶尺蠖NPV,提取基因组DNA,构建了EoNPV DNA的SalI酶切片段文库,并对阳性克隆进行测序,获得了EoNPV gp41基因的部分序列.序列同源性分析结果表明,EoNPV与LdMNPV之间gp41基因的同源性较高,而与AcMNPV及BmNPV的同源性较低.     

斜纹夜蛾核型多角体病毒Ⅱ型分离株同源重复区hr5的结构功能分析

对斜纹夜蛾核型多角体病毒Ⅱ(Splt NPVⅡ)基因组DNA中的同源重复区hr5的结构功能进行研究。结果表明,Splt NPVⅡhr5大小为389 bp,含有3个64 bp不完全回文序列,回文序列的中心均含有1个PvuⅠ限制性酶切位点,并且存在1个与病毒基因组DNA复制相关的motif(CGATT)基序。瞬时表达分析表明,hr5在野生型病毒感染和未感染的细胞中均具有增强早期基因ie1启动子活性的功能;实时荧光定量PCR结果显示,hr5在野生型病毒作为辅助病毒时,具有基因组DNA复制起始原点的功能。研究证明Splt NPVⅡhr5具有复制起始原点和增强子的双功能作用。     

理化因子对茶尺蠖核型多角体病毒活性的影响

研究了pH、温度、紫外线和化学试剂处理对茶尺蠖核型多角体病毒活性的影响。结果表明,茶尺蠖核型多角体病毒在pH 7的环境中,活性最强,pH值升高或降低,茶尺蠖核型多角体病毒感染的茶尺蠖幼虫的死亡率都会下降;当水浴温度达80 ℃时,病毒几乎完全失活;紫外线处理32 h可明显降低病毒活性;在4种化学试剂中,01% CuSO4对病毒活力影响较小,经过乙醚和75%乙醇处理后的病毒活力有下降趋势。     

可感染茶尺蠖的重组家蚕核型多角体病毒的构建

【目的】构建能够感染家蚕和茶尺蠖的重组家蚕核型多角体病毒（rBmNPV）,解决EoNPV扩增困难而不易获得的难题。【方法】通过Bac-to-Bac系统构建具备BmNPV的多角体蛋白基因（polh）表达盒和EoNPV的解旋酶基因（hel）表达盒的重组家蚕核型多角体病毒。【结果】家蚕或家蚕细胞扩增的rBmNPV可以感染茶尺蠖并致病,表明rBmNPV的宿主域拓展至茶尺蠖。【结论】成功构建了能够感染茶尺蠖的rBmNPV,为利用家蚕作为宿主来生产重组病毒杀虫剂打下基础。     

牛病毒性腹泻病毒HB-DCZ株NS2-3区基因克隆及序列分析

【目的】对牛病毒性腹泻病毒HB-DCZ株NS2-3区基因进行克隆及序列分析,为阐明本病致病机理,更好的控制BVDV感染、流行提供理论依据。【方法】以牛病毒性腹泻病毒河北分离株(HB-DCZ)基因组RNA为模板,扩增BVDVHB-DCZ株基因组NS2-3片段cDNA。将PCR产物克隆后进行PCR及双酶切鉴定。克隆产物进行序列测定及分析。【结果】HB-DCZcDNA体外扩增获得特异性条带,大小约为665bp,表明该分离毒株基因组中无插入序列。PCR产物克隆,提取重组质粒,扩增获得特异性的DNA条带,长度约为665bp,用EcoRⅠ和HindⅢ双酶切,获得两条DNA片段,长度分别为2600bp和702bp左右,与理论值相符。序列测定结果表明,克隆得到的NS2-3重要区扩增片段共665核苷酸,NS2-3重要区的蛋白质由208个氨基酸残基组成。HB-DCZ毒株NS2-3重要区核苷酸序列与已公开发表的BVDV其他毒株相比的同源性依次为184株99.1%,ZM195株97.4%,Osloss株92.3%,C_(24)V株77%,NADL株76.4%。HB-DCZ在NS2-3扩增区域中既没有外源序列的插入,也没有基因重组、重排或缺失,但存在某些核苷酸的替换。【结论】HB-DCZ与Osloss株、国内的184株、ZM195株遗传距离较近,与C_(24)V株、NADL株遗传距离较远。HB-DCZ株应为BVDVIb基因亚型。     

昆虫核型多角体病毒增殖与温度关系的数学模型

本文以茶尺蠖和油桐尺蠖核型多角体病毒为例，提出了昆虫核型多角体病毒增殖量［Ｙ（Ｔ）］与温度（Ｔ）关系的模型。该模型可用Ｓｃｈｏｏｌｆｉｅｌｄ和Ｓｈａｒｐｅ于１９８１年提出的变温生物发育速率与温度关系的数学模型加以拟合。     

几种林业害虫在崇明岛的发生规律研究

[目的]探究茶尺蛾、樟巢螟、杨扇舟蛾、黄刺蛾4种蛾类害虫在崇明岛的生活史和发生趋势,为今后的虫害防治提供参考。[方法]生活史的调查采用标准地设置后的系统调查;发生趋势采用灯光引诱法进行调查。[结果]结果表明:茶尺蛾、樟巢螟、黄刺蛾在崇明岛每年发生2代,而杨扇舟蛾发生4~5代;杨扇舟蛾以卵越冬,其余3种害虫都以幼虫越冬;茶尺蛾的为害高峰期主要在8月,其余3种害虫有2个为害高峰期,分别为6月和8月。从发生趋势来看,茶尺蛾和杨扇舟蛾的诱集量在不断增大,而樟巢螟和黄刺蛾的诱集量变化不大。[结论]该研究为崇明岛今后的害虫防治提供了一定的科学依据。     

茶尺蠖生物学特性初步研究

描述了茶尺蠖4种虫态,介绍了茶尺蠖在山东的生活史和生活习性,同时针对山东茶尺蠖发生特点,提出了防治的具体措施。结果表明,茶尺蠖包括成虫、卵、幼虫、蛹4种虫态;茶尺蠖在山东省每年发生3~4代,9月下旬后以蛹在茶树基部附近土中越冬,翌年4月中旬越冬蛹羽化,以2、3代发生较重;防治措施主要包括农业防治、生物防治和化学防治。     

茶园 3种害虫与蜘蛛天敌种群动态的关系

采用灰色系统分析法、生态位分析法和空间格局聚集强度指标分析方法,分析了茶园3种鳞翅目主要害虫与蜘蛛天敌在数量、时间和空间上的关系.结果表明:茶尺蠖(Ectropis obliqua Prout)的主要天敌是八点球腹蛛(Theridion octomaculatum)、斑管巢蛛(Clubiona reichini)、草间...     

离体茶多酚对茶尺蠖幼虫发育的影响

用经不同浓度离体纯茶多酚处理的同品种菊叶分别饲育茶尺蠖幼虫,结果证实茶多酚对茶尺蠖幼虫生长发育有明显的影响,且随茶多酚浓度和茶尺蠖幼虫单位时间内取食茶多酚的增加而更加明显。     

茶尺蠖NPV对茶尺蠖幼虫取食及生长发育的影响

喂饲茶尺蠖核型多角体病毒(EoNPV)后,茶尺蠖幼虫的总食量极显著下降。1、2龄初饲毒,减少90.99～99.39％;3、4、5龄初饲毒,减少47.24～54.18％。总食量减少的主要原因是取食速率的显著减缓。1龄初饲毒,总取食期极显著缩短;2、5龄初饲毒,与对照无显著差异;3、4龄初饲毒,则总取食期极显著延长。各龄初饲毒后,该龄和下几龄的历期一般都极显著延长。饲毒后,幼虫体重明显减轻,能化蛹的蛹重也显著下降,但蛹历期和成虫寿命不受影响,上述结果表明,以EoNPV防治茶尺蠖幼虫宜在2龄初或其以前应用。在3龄初及其以后饲毒,高温条件下虽然幼虫死亡率不高,但总食量明显下降,仍有一定的效果。     

Development of synthetic volatile attractant for male Ectropis obliqua moths

The tea geometrid Ectropis obliqua is one of the most serious leaf-feeding insect pests in tea(Camellia sinensis) in East Asia. Although several volatile chemicals emitted from tea plants have been reported to be attractive to E. obliqua moths, no synthetic attractants for E. obliqua moths have been developed. By measuring the behavioral responses of the moth to a series of chemicals in the lab, we found that a blend containing a ternary mixture containing(Z)-3-hexenal,(Z)-3-hexenyl hexanoate and benzyl alcohol clearly attracted to E. obliqua moths of both sex and that(Z)-3-hexenyl acetate could enhance the attractiveness of the ternary blend. Moreover, we found that the volatiles emitted from the plant-E. obliqua larva complex have the same attractiveness as: 1) the blend of volatiles containing the ternary mixture and 2) the blend containing(Z)-3-hexenyl acetate plus the ternary mixture to both male and female moths. In a field bioassay, more male moths were observed on traps that were baited with the blend containing(Z)-3-hexenyl acetate plus the ternary mixture than on control traps. Our study raises the tantalizing possibility that synthetic blends could be deployed as attractants for pests in the field.     

0.6%苦参碱水剂防治茶尺蠖田间防效

研究了0.6%苦参碱水剂防治茶尺蠖(Ectropis oblique hypulina Wehrli)的田间效果。结果表明,在茶园病虫防治时,推荐使用0.6%苦参碱水剂600倍稀释液(1 125.00 m L/hm~2),在茶尺蠖1~2龄幼虫期每公顷对水675 kg于傍晚均匀喷雾到茶树全株,既节约成本,又达到最佳防效。     

众数法在茶树尺蠖类害虫测报上的运用

茶树尺蠖类（茶尺蠖、茶用克尺蠖）害虫是皖南丘陵茶区主要害虫，对茶叶生产危害大。该文结合历史资料和工作经验，总结了众数法在茶树尺蠖类害虫预测上的应用。结果表明，众数法对茶树尺蠖类害虫中期预测运用简单，预测准确，能更好地指导茶农开展防控工作。