中华蜜蜂头部cDNA基因芯片制备与质量分析

通过对中华蜜蜂(Apis cerana cerana)头部cDNA文库测序和序列分析,获得8569条高质量EST序列.在功能注释的基础上,筛选出1025条基因芯片候选EST,并建立数据库.根据EST编号从文库选出相应的克隆,抽提质粒作为模板,进行EST片段PCR扩增和电泳检测,获得717个有效EST探针,经纯化后点制成cDNA基因芯片.将该芯片与经荧光标记的中蜂和意蜂工蜂头部cDNA样品杂交,经图像扫描和散点图分析,结果显示杂交信号正常,为进一步研究挖掘蜜蜂功能基因奠定了基础.     

离体茶多酚对茶尺蠖幼虫发育的影响

用经不同浓度离体纯茶多酚处理的同品种菊叶分别饲育茶尺蠖幼虫，结果证实茶多酚对茶尺蠖幼虫生长发育有明显的影响，且随茶多酚浓度和茶尺蠖幼虫单位时间内取食茶多酚的增加而更加明显。     

钾营养影响水稻叶绿体的形态定量分析

应用透射电镜观察了不同钾营养（ｋ０：不施钾；ｋ１：１．５ｇ／盆）影响水稻叶绿体发育的超微结构，并应用图象分析技术和形态计量学方法，测定分析了叶绿体的二维形态参数和三维体视学参数。结果表明：水稻叶绿体的面积、周长、等效直径在抽叶第９天比第２天显著增大（ｐ＜０．０１），ｋ１较ｋ０有显著增大（ｐ＜０．０１）。体密度、面密度随生长期而增大，方差分析显示与生长天数呈高度正相关（ｐ＜０．０１），ｋ１较ｋ０有一定的增大。ｋ１叶绿体发育较ｋ０提早，而解体较迟。本实验结果进一步证明了钾有促进水稻叶绿体发育、延缓其衰老、提高光合作用的效应。     

引进林木繁殖材料及观赏植物检疫审批的智能化管理

针对目前我国引进林木繁殖材料及观赏植物的检疫审批手工管理效率低、检疫要求针对性不强且易产生遗漏等问题，浙江省森林病虫防治检疫站联合浙江大学，采用Delphi语言编译而成引进林木繁殖材料及观赏植物检疫审批智能化管理系统。该系统有效地解决了数据资料的标准化与维护和检疫信息的查询等问题。系统总体结构合理，功能齐全，操作简便，易于扩充，实现了植物检疫信息、检疫审批和检疫征发放的智能化管理。图1参7     

野蚕黑卵蜂触角感器的超微结构研究

扫描电镜观察表明:野蚕黑卵蜂Telenomus theophilae Wu et Chen触角上存在着9种感觉器。其中锥形感器、毛形感器Ⅰ型、具沟端弯感器、多侧孔感器、栓锥感器和钟形感器雌雄均有,仅数量和分布存在差异;毛形感器Ⅱ型和端孔坛形感器只在雌蜂触角上存在,而端突柱形感器则为雄蜂所特有。感器种类、数量和分布在性别间的差异,为研究该蜂寻找生境和寄生行为提供了形态学依据。     

中华蜜蜂王浆多肽Apisimin基因转录、克隆与表达研究

构建中华蜜蜂(Apis cerana cerana)工蜂头部cDNA文库并进行了测序,从8568个表达序列标签(expression sequencetag,EST)中获得96个Apisimin基因克隆,结果表明Apisimin基因是一个高丰度转录的基因。进一步对克隆分析表明该基因cDNA全长为379 nt,包含一个237 nt、可以编码78个氨基酸的ORF。推导的Apisimin蛋白N端含有一个由24个氨基酸残基组成的信号肽,后端为54残基、预计分子量为5.9kDa的成熟肽。该ORF与意大利蜜蜂和印度蜜蜂的Apisimin基因核苷酸同源性分别为100%和95%。将成熟肽编码区进行亚克隆,构建了Apisimin与谷胱甘肽转移酶融合表达的载体pGEX/apisimin,并将重组载体转化入大肠杆菌BL21(DE3)进行融合表达。SDS-PAGE和薄层扫描表明,表达的融合蛋白分子量为31 kDa,表达量占细菌总蛋白的22.1%,约50%是可溶性的。通过亲和柱进一步纯化了表达的融合蛋白。     

印度梨形孢诱导烟草对黑胫病的抗性及其机理的初步研究

印度梨形孢(Piriformospora indica)是分离自印度塔尔沙漠的植物根系内生真菌,能够诱导多种植物对生物和非生物逆境产生抗性,目前已作为一种模式真菌用于内生真菌与植物互作关系的研究。为了研究印度梨形孢对烟草(Nicotiana tobacum)抗黑胫病的影响,本研究采用烟草疫霉菌(Phytophthora parasitica var.nicotianae)分别接种根部有印度梨形孢定殖与未定殖的烟草,观察接种后根部有印度梨形孢定殖与未定殖的烟草发病情况,测定抗病相关防御酶苯丙氨酸解氨酶(PAL)、过氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)的活性变化及抗病相关基因的表达量,并通过平皿对峙试验研究印度梨形孢对烟草疫霉菌生长的影响。结果表明,接种烟草疫霉菌后,根部有印度梨形孢定殖的烟草发病严重度要显著低于对照;接种烟草疫霉菌后第1~10 d,根部有印度梨形孢定殖的烟草叶片中防御酶PAL、POD和PPO活性高于对照,在第1 d,PAL活性是对照烟草的3.99倍,在第2 d,POD活性是对照烟草的1.5倍,在第4 d,PPO活性是对照烟草的2.66倍;实时荧光定量PCR(Real-time quantitative PCR,q RT-PCR)结果显示,接种烟草疫霉菌后第6~96 h,根部有印度梨形孢定殖的烟草叶片中抗病相关基因PR1b、P450-2、hrs203J、Nm IMSP和P450-1的表达量高于对照;在第12 h,PR1b、P450-2、hrs203J的表达量分别是对照烟草的3.8、15.7和3.1倍,在第48 h,Nm IMSP的表达量是对照烟草的2.6倍,在第72 h,P450-1的表达量是对照烟草的1.5倍;平皿对峙试验结果显示印度梨形孢对烟草疫霉菌的生长没有抑制、重寄生作用。研究结果表明,印度梨形孢可显著提高烟草对黑胫病的抗性,对黑胫病的抗性不是通过印度梨形孢分泌的抗菌物质实现的,是与烟草中抗病相关基因表达量的上升、防御酶活性的提高有关。本研究初步揭示了印度梨形孢诱导烟草抗黑胫病的相关机理,为进一步深入研究烟草黑胫病的生物防治及其机理提供基础资料。     

印度梨形孢对水稻的促生作用及其机理的初探

印度梨形孢(Piriformospora indica)是一种能与植物建立互惠共生关系的根部内生真菌,能促进植物生长,增加作物产量。为了研究印度梨形孢对水稻生长发育的影响,将印度梨形孢与籼稻苗共培养后,分析印度梨形孢对水稻植株高度、生物量、分蘖数、抽穗期、穗粒性状、叶绿素含量、硝酸还原酶活性、根系活力以及生长相关调控基因表达水平的影响。结果显示,接种印度梨形孢的水稻株高、地上部干鲜质量、分蘖数、硝酸还原酶活性和根系活力显著高于对照;与对照相比,印度梨形孢定殖的水稻植株抽穗期提前4~6d;印度梨形孢处理第3、4周后,叶片叶绿素含量比对照分别增加了19.77%和17.89%。RT-PCR分析表明,印度梨形孢定殖的水稻植株叶片中生长素相关调控基因OsIAA13和YUCCA的上调表达,表达量分别为对照的1.49倍和1.30倍;负调控水稻生长的NRR基因表达量为对照的58%。印度梨形孢促进水稻地上部的生长与叶绿素含量、硝酸还原酶活性、根系活力和生长相关调控基因的表达有关,印度梨形孢可能通过提高光合速率、增强水稻对矿质营养的吸收与利用和诱导生长素的分泌,促进水稻地上部的生长。     

寄主识别利它素诱导野蚕黑卵蜂寄生马尾松毛虫的研究

利用野蚕黑卵蜂寄主识别利它素,成功诱使野蚕黑卵蜂寄生非寄主马尾松毛虫卵并羽化出下一代,使野蚕黑卵蜂在仅能寄生野桑蚕和桑蚕的基础上增加了一种人工新寄主--马尾松毛虫卵.研究表明,野蚕黑卵蜂对涂布有稀释8倍利它素非寄主马尾松毛虫卵的寄生百分数为92.1%,与寄生桑蚕卵的96.6%相比没有明显差异;子代的平均发育历期为20.42 d,与桑蚕卵内的发育历期差异显著且长2 d左右.通过对三因素组合试验的结果分析表明,识别利它素的不同浓度、非寄主的不同来源和野蚕黑卵蜂的不同寄生经验对野蚕黑卵蜂的寄生行为均有显著影响.采用无寄生经验野蚕黑卵蜂和解剖自马尾松毛虫雌蛾卵巢的未产出卵并在表面涂稀释4～128倍识别利它素是野蚕黑卵蜂成功寄生非寄主马尾松毛虫卵的最佳方案.     

野蚕黑卵蜂寄主识别利它素的来源及性质

寄主卵表面存在对野蚕黑卵蜂有引诱作用的识别利它素，它主要来源于其寄主野桑蚕雌蛾性附腺中，同时发现在其替代寄主桑蚕雌蛾性附腺中也同样存在具利它素活性的物质。取自桑蚕雌蛾侧输卵管的卵涂上雌蛾性附腺内容物后，野蚕黑卵蜂对其的接受率（８３．３％）明显高于缺乏性附腺内容物的侧输卵管卵（３６．７％）．初步探明雌蛾性附腺内容物中具利它素活性的是８ｋＤ以上的大分子物质。