耐低温草菇菌株的覆层平板法筛选

采用分割切块法测定了3个草菇菌株(V01、V02和V03)在低温下的致死时间。结果表明：V01、V02和V03菌株在0、2和4℃下的致死时间分别为24、48和32h，48、88和64h，96、192和144h。用0．01％吖啶橙诱变草菇菌株V01担孢子30min，致死率达70．4％；对诱变处理的担孢子萌发形成的菌体进行低温临界致死处理，杀死低温敏感菌株，采用覆层平板法筛选出4株耐低温的草菇菌株。     

氯氰菊酯降解菌Y-3的诱变育种与筛选

以从菠菜叶片内分离到对氯氰菊酯降解率较高的菌株Y-3(Corynebacterium vitarumen)为出发菌,进行化学诱变和紫外诱变.结果显示,DES对菌株Y-3的最佳诱变条件为2%60 min、3%40 min和4%20 min,紫外线对对菌株Y-3的最佳诱变条件为5 cm 8 min、10 cm 20 min和15 cm 30 min.通过诱变与筛选,最终获得13株突变株,与野生菌株对比,7株突变株对氯氰菊酯的降解率有明显的提高,其中有3株突变株具有一定的遗传稳定性.     

高产胆固醇氧化酶菌株的诱变选育

[目的]选育高产胆固醇氧化酶菌株。[方法]从环链拟青霉、斜链拟青霉、中国拟青霉和蛹拟青霉中筛选出发菌株,对筛选出的酶活力高的突变株进行紫外诱变,选育出高产胆固醇氧化酶突变株,对其发酵条件进行优化并测定其酶活。[结果]选择环链拟青霉为诱变选育的出发菌株,紫外诱变环链拟青霉获得了一株高产胆固醇氧化酶突变株CM3,确定了紫外诱变的最佳时间是80S。通过优化其发酵条件,得出CM3发酵产酶最优条件为30℃,pH值6．0,接种量为10％。其最高酶活力为1．3360U／ml,比出发菌株（0．3369U／m1）提高了296．6％。[结论]通过紫外诱变能选育出有较高胆固醇氧化酶活力的菌株。     

双亲灭活原生质体电诱导融合法选育高漆酶活性菌株

以杏鲍菇和平菇为亲本菌株,采用双亲灭活原生质体融合技术选育高漆酶活性且遗传稳定的融合菌株。结果表明:杏鲍菇原生质体采用紫外灭活,在30 W紫外灯、照射距离30 cm条件下处理20 min,灭活率达100%。平菇原生质体采用热灭活,65℃处理30 min,灭活率达100%。两菌株按1∶1混合,施加1 MHz、250 V/cm的成串脉冲电压,5.5 kV/cm的融合脉冲电压的电场诱导下使其电融合,原生质体成对率达到70%,融合率为3.2×10-3。从147株融合菌株中筛选出1株高漆酶活性菌株F49,其漆酶和TTC-脱氢酶酶活比双亲分别提高20.6%和25.3%,遗传稳定性分别达到92.0%和92.7%以上。从菌落特征、菌丝形态、菌丝生长量、拮抗试验等方面对融合子进行鉴定,证实为具有双亲性状的融合株。     

基于诱变和抗性突变的多杀霉素高产菌株的选育

为提高菌株发酵液中多杀霉素产量,本试验利用常温常压等离子体(ARTP)诱变、紫外(UV)诱变和抗性突变技术处理刺糖多孢菌株DS0322-3,结合高通量筛选和摇瓶发酵选育多杀霉素高产菌株。结果显示,通过ARTP诱变和UV诱变育种,筛选获得384株突变菌株,其中有9株突变菌株的效价较原始菌株增加10%以上,且1株效价较原始菌株增加20%以上,经过ARTP诱变30 s,得到的突变菌株AR1019-4效价为547.78 mg/L,较原始菌株增加了21.88%。以ARTP诱变得到的高产突变菌株AR1019-4为出发菌株,通过抗性突变筛选技术筛选获得1 152株突变株,其中13株突变菌株的效价较出发菌株增加10%以上,且2株效价较出发菌株增加15%以上,在0.5 mg/L的氯霉素平板上得到的突变菌株Chl 1215-5效价为637.12 mg/L,较出发菌株增加了16.31%;12 mg/L的庆大霉素抗性突变筛选到了突变菌株Gen 1207-8,效价为597.59 mg/L,该菌株的Spinosyn D组分由10%～15%增加至30%～35%左右,经遗传稳定性试验验证,突变菌株Chl1215-5和Gen1207-8可稳定遗传。试验结果表明ARTP诱变、紫外诱变和抗生素突变技术对选育多杀霉素高产菌株具有重要意义。     

复合诱变筛选丙烯醇抗性的富马酸高产米根霉菌株

[目的]筛选具有丙烯醇抗性的富马酸高产米根霉菌株。[方法]以溴甲酚绿与丙烯醇平板作为双初筛标准,建立代谢调控选育米根霉富马酸高产菌株的方法。[结果]利用紫外诱变对米根霉孢子的最佳诱变条件分别为紫外灯30 W,垂直照射距离30 cm,诱变时间1 min;化学诱变剂亚硝酸浓度0.1 mol/L,诱变时间10 min。优化条件下,通过紫外和化学的复合诱变获得了1株产量高、稳定性好的米根霉丙烯醇抗性突变株ME-F12,富马酸产量达到50.39 g/L,与原始菌株相比提高23%,连续传代5次后,产量无明显降低,具有较高稳定性,副产物乙醇浓度只有1.87 g/L,明显低于原始菌株。[结论]为微生物发酵法生产富马酸的工业化奠定了扎实的基础。     

一株芽孢杆菌的鉴定和紫外线诱变研究

经实验测定芽孢杆茵10-3最适生长温度为30℃.通过对其进行紫外诱变获得一个突变株,最适培养温度为26~C,较初始菌株下降了4℃.在26℃,250r/min的培养条件下,该菌株诱变前后生长速度差异较大,诱变后的菌株OD600nm比诱变前增大了约5%.经鉴定该茵为枯草芽孢杆菌[1].     

壳低聚糖高产菌的诱变选育

[目的]探讨壳低聚糖高产菌诱变选育的方法。[方法]以壳低聚糖产生菌蓝色犁头霉ZH08为出发菌株,经紫外诱变和亚硝酸诱变处理,以对硝基乙酰苯胺为指示剂,利用双层平板颜色反应法,挑取菌落黄色比较深的脱乙酰酶高活性突变株,再经摇瓶发酵复筛,以获得壳低聚糖产量较高的菌株。[结果]通过对出发菌株ZH08进行理化诱变,获得突变株共7株（XH01～07）,经过反复传代和筛选,这几株突变株的壳低聚糖含量均高于出发菌株,其中XH05菌株的壳低聚糖含量最高,其产量稳定在1.07 g/L,比出发菌株提高72.6%。[结论]利用对硝基乙酰苯胺作为筛选具较高甲壳素脱乙酰酶酶活的跟踪试剂,用于筛选壳低聚糖高产菌株,是一种快速、有效的筛选方法。     

红色素产生菌RZ21菌株的原生质体紫外诱变育种研究

[目的]对红色素生产菌RZ21菌株的原生质体进行紫外诱变育种,以提高其红色素的产量。[方法]以粘质沙雷氏菌为供试菌种,研究其原生质的制备、再生的条件和该菌的原生质紫外诱变对红色素产量的影响。[结果]RZ21菌株以溶菌酶8 mg/ml,37℃作用30 min后,再加0.01 mol/L（终浓度）的EDTA作用20 min,原生质体形成率达81.9%,再生率达31.5%。该菌原生质体经紫外诱变原生质体处理及抗性平板、摇瓶两步筛选后,得到1株高产株RZ21-3,灵菌红素产量达到了0.813 g/L,比原始菌株提高了24.9%。[结论]溶菌酶8 mg/ml,37℃作用30 min后,再加0.01 mol/L（终浓度）的EDTA作用20 min为该菌原生体制备的最佳工作条件。     

高产乳酸链球菌素生产菌的诱变

为了获得高效价的Nisin生产菌株,采用传统的微生物育种技术,以Nisin生产菌乳酸乳球菌作为出发株,通过紫外照射和亚硝酸处理进行协同诱变育种。根据致死率和诱变剂量的相互关系,分别得出了紫外线照射和亚硝酸诱变的致死率曲线以选择合适的诱变剂量。最终确定采用2.5 min紫外线照射和4 min亚硝酸处理对乳酸乳球菌进行诱变获得突变菌株。突变株经初筛和复筛得到Nisin高产菌株,其发酵液Nisin的效价较出发株高1.72倍。     

草菇液体菌种培养条件优化研究

为了完善草菇液体菌种的生产和应用,尽快使草菇实现工厂化栽培,本试验以天达V901为试材,通过摇瓶发酵,进行了草菇液体菌种培养条件优化研究。结果表明,液体培养条件下,适宜草菇菌丝生长的最佳碳源是淀粉,最佳氮源是蛋白胨,最佳碳氮比是10∶1,最佳淀粉浓度是3.0%。草菇菌丝生长的最适温度为30℃,最适初始pH为7.0。     

草菇木质纤维素酶活测定及其对木薯渣生物转化效率的影响

[目的]研究不同草菇菌株在木薯渣栽培基质中的木质纤维素酶活性和生物效率及其相关性,为筛选和培育适宜的草菇菌株及提高木薯渣栽培草菇的效率提供科学依据.[方法]采用木薯渣为主要原料的熟料基质,进行17个草菇菌株的栽培,测定针头期基质内的羧甲基纤维素酶（CMCase）、木聚糖酶（Xylanase）和漆酶（Laccase）活性,统计草菇的生物学效率,并采用SPSS 18.0软件进行酶活性与产量的相关分析.[结果]3种木质纤维素酶在不同草菇菌株间存在一定差异,其中羧甲基纤维素酶活性较高的菌株有V9、V26、V10、V112、Vh和V木-2,木聚糖酶活性较高的菌株有V9、V112和Vh,漆酶活性较高的菌株有V9、V112、VL和V木-2.不同草菇菌株在木薯渣栽培基质上的生物学效率存在明显差异,其中V112的生物学效率最高,达29.5％;其次是V9和V木-2,两个菌株的生物学效率均高于20.0％.羧甲基纤维素酶、木聚糖酶和漆酶活性与生物学效率均呈正相关,相关系数（R2）分别为0.2650、0.2545和0.4729.[结论]羧甲基纤维素酶、木聚糖酶和漆酶都是草菇高效转化木薯渣基质的重要影响因子,其中漆酶是关键的限制性因子.17个草菇菌株中,V9、V112和V木-2的生物学转化效率较高,是适宜木薯渣配方基质栽培的草菇菌株.     

高效利用木质素·半纤维素的草菇菌株初筛试验

[目的]为筛选出可高效利用木质素、半纤维素的草菇菌株,以促进草菇生产。[方法]以V9、V11、V广、V展1、V展2、V信丰6个草菇菌株进行透明圈法测定,愈创木酚氧化显色观测,过氧化酶显色观测。[结果]6个菌株均能利用木质素、半纤维素,但其能力有差异。V展1、V信丰能高效利用木质素、半纤维素。[结论]从草菇品种中筛选了可高效利用木质素、半纤维素的菌株V展1和V信丰,对促进草菇生产有积极的意义。     

三峡库区桑园间作草菇可行性分析

三峡库区桑园生态建设重点在于稳定蚕桑产业,增加农户收益。研究采用实地调查和文献资料法,对三峡库区桑园间作草菇可行性进行分析,以期为寻求经济价值较高的三峡库区优质桑园复合利用模式提供参考。结果表明,三峡库区桑园间作草菇可行性主要表现在:库区桑园为草菇生长提供适宜的微环境,使其与桑树生长形成互利共生的充分性以及库区桑园借助草菇消纳农业废弃物,减轻水土流失,改良土壤理化性能,提高土壤肥力,促进桑生长,形成生态良性循环的必要性。     

影响农杆菌介导草菇遗传转化的因素研究

以草菇Volvariella volvacea菌株V51为受体材料,用农杆菌Agrobacterium tumefaciens介导法转入抗冷冻蛋白基因(afp),探索不同的转化受体、农杆菌种类、乙酰丁香酮(AS)的浓度、共培养的温度、时间等因素对转化效率的影响,并采用PCR及Southern杂交检测afp基因是否整合到草菇的基因组中.结果表明:以D660 nm为0.15的EHA105为侵染的农杆菌菌株,加入200μmol/L AS进行预培养,侵染菌丝球后转入含有AS为200μmol/L的IMA培养基上,28℃,共培养60 h为最佳转化条件.PCR与Southern杂交结果证明afp基因已整合到草菇的基因组中.     

草菇中水不溶性膳食纤维的提取研究

采用酸-碱浸提法提取草菇水不溶性膳食纤维,并研究了料液比、NaOH浓度、处理温度及浸提时间等因素对草菇水不溶性膳食纤维产率的影响.结果表明,草菇中水不溶性膳食纤维最佳提取工艺条件为料液比1:11,NaOH浓度为0.25 mol/L,提取温度为55℃,浸提时间为2 h;在此条件下草菇水不溶性膳食纤维的最大产率可达59.6%;水不溶性膳食纤维膨胀力为2.153 g/g,溶胀度为4.1 ml/g.研究证实草菇是提取膳食纤维的良好原料.     

不同草菇菌株的生物学特性比较

草菇是一种原产自我国热带与亚热带地区的腐生性食用真菌.对17个不同来源的草菇(Volvariella volvacea)菌株的原基出现时间、大量采收时间、菌膜厚度及生物转化率等生物学特性进行了比较.结果表明:原基出现时间、大量采收时间与生物转化率无直接的相关性;但原基出现时间、大量采收时间越短,生物转化率相对较高;菌膜厚度越厚,越不容易开伞,菌株VV007的菌膜厚度最薄、为0.52 mm,最容易开伞;各菌株间的生物转化率差异显著,其中VV001的生物转化率最高,达21.73％.     

木薯酒精渣适栽草菇品种筛选试验

[目的]筛选适于木薯酒精渣栽培的草菇优良品种.[方法]以木薯酒精渣为主料,棉籽壳、麸皮为辅料,采用全脱袋覆土出菇方式,对引进和分离的13个草菇品种进行出菇试验.[结果]供试的13个草菇品种中菌丝生长速度较快的菌株有V97、V9、V25、V木和V112,菌丝日生长速度分别为15.43、14.86、13.57、12.78和12.78 mm/d;产量和生物转化率较高的菌株有V9、V木和V112,产量分别达29.16、21.70和18.21g/袋,生物转化率分别达24.50%、18.20%和15.30%;不易开伞的菌株为V9、V97、V365和草01.[结论]初步筛选出V9作为木薯酒精渣的适栽草菇品种,并作为下一步扩大试验规模的出发菌株.     

不同草菇菌株的生物学特性比较

草菇是一种原产自我国热带与亚热带地区的腐生性食用真菌。对17 个不同来源的草菇（Volvariel lavolvacea）菌株的原基出现时间、大量采收时间、菌膜厚度及生物转化率等生物学特性进行了比较。结果表明：原基出现时间、大量采收时间与生物转化率无直接的相关性;但原基出现时间、大量采收时间越短,生物转化率相对较高;菌膜厚度越厚,越不容易开伞,菌株VV007的菌膜厚度最薄、为0.52mm,最容易开伞;各菌株间的生物转化率差异显著,其中VV001的生物转化率最高,达21.73%。     

草菇袋栽菌株的筛选及控蕾促产技术研究

开展熟料袋栽草菇品种比较试验,结果表明:V4草菇品种产量最高,达132 g·袋-1,鲜菇生物转化率43.5%,与其他品种的产量差异达极显著水平.控蕾促产技术研究结果表明,控制草菇培养料堆制发酵时间及菌丝生长发育光照度,能控制草菇菇原基的数量,提高稻草袋栽草菇的成菇率和产量.稻草培养料堆制5 d,翻堆1次产量最高,平均为...