SSR分子标记两种电泳方法快速区分玉米种子杂交种

采用SSR分子标记方法,从40对SSR引物中筛选出3对特异性高的引物,区分10个玉米杂交种,用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和荧光毛细管电泳两种方法分离PCR产物,分析其位点多态性信息,快速区分品种,并比较两种电泳方法。结果表明,SSR分子标记法区分玉米品种方法简单、重复性好、结果可靠。变性聚丙烯酰胺凝胶电泳适合检测少量样本,荧光毛细管电泳适合高通量检测,结果更精确,两种电泳方法都可以有效地区分不同玉米品种,实践中可根据不同要求和试验条件选择不同的电泳方法。     

3种电泳法鉴定玉米种子纯度比较

研究比较了酯酶同工酶电泳法、蛋白质凝胶电泳法、醋酸尿素聚丙烯酰胺凝胶电泳法3种方法在测试定玉米种子纯度方面的敏感性、多态性、准确性研究,认为醋酸尿素聚丙烯酰胺凝胶电泳法较是较理想的玉米种子电泳纯度鉴定方法。     

马铃薯醇溶蛋白电泳分析方法的建立

[目的]探索并建立马铃薯醇溶蛋白酸性聚丙烯酰胺凝胶电泳（A-PAGE）方法和谱带分析技术。[方法]用25%2-氯乙醇提取马铃薯醇溶蛋白,借助酸性聚丙烯酰胺凝胶电泳方法对马铃薯醇溶蛋白进行分析,电泳采用浓度12.4%聚丙烯酰胺凝胶,考马斯亮蓝染色。[结果]不同品种都显示出各自特有的醇溶蛋白带谱组合,且清晰可辨。[结论]酸性凝胶电泳技术可用于马铃薯醇溶蛋白分析,具有快速、分辨率高、重复性好等特点,可为马铃薯品种（系）选育提供一种十分有效的方法。     

仁用杏微卫星非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳体系的优化

[目的]优化仁用杏微卫星非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳体系。[方法]以25份仁用杏和3份食用杏为材料,利用微卫星标记结合非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳技术筛选出多态性高、可重复的SSR位点。并比较不同因子对电泳体系的影响,探索仁用杏微卫星非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的优化体系。[结果]仁用杏微卫星非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的优化体系为：聚丙烯酰胺凝胶的浓度为6%,丙烯酰胺与甲叉双丙烯酰胺的比例为29∶1,1000V下电泳2～3h,0.1%AgNO3染色15min后显影。[结论]该优化体系为仁用杏资源微卫星标记遗传分析奠定技术基础。     

仁用杏微卫星非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳体系的优化

[目的]优化仁用杏微卫星非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳体系。[方法]以25份仁用杏和3份食用杏为材料,利用微卫星标记结合非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳技术筛选出多态性高、可重复的SSR位点。并比较不同因子对电泳体系的影响,探索仁用杏微卫星非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的优化体系。[结果]仁用杏微卫星非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的优化体系为：聚丙烯酰胺凝胶的浓度为6%,丙烯酰胺与甲叉双丙烯酰胺的比例为29∶1,1000V下电泳2～3h,0.1%AgNO3染色15min后显影。[结论]该优化体系为仁用杏资源微卫星标记遗传分析奠定了技术基础。     

小麦Waxy蛋白亚基缺失类型鉴定方法的研究

建立适于我省面条专用小麦育种研究上应用的Waxy蛋白亚基缺失类型的鉴定技术;以改良十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳技术(1-D-SDS-PAGE)为基础,分析凝胶性质、试验试剂、试验条件对电泳结果的影响,获得高效低成本、分辨效果佳、重复性好的鉴定方法。     

核酸、蛋白质电泳及其相关技术在食用真菌学上的应用(综述)

概述了脉冲电场凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶法、梯度浓度凝胶电泳法、等电聚焦电泳法及高效毛细管电泳法等核酸、蛋白质电泳技术，以及与核酸电泳有关的DNA限制性长度多态性和随机片段多态性DNA分析技术；回顾和展望上述生物技术在食用真菌学研究应用上的现状及前景。还简要介绍了高效毛细管电泳，以及近年来发展较快的双向凝胶电泳技术和凝胶成像分析。     

木薯SSR标记非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳条件的优化

以木薯品种为材料,利用微卫星标记结合非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳技术进行木薯重要农艺性状基因的引物筛选。通过比较各因子对电泳体系的影响,建立了一个木薯微卫星非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的优化体系：TEMED用量为80μL,10％AP用量为1200μL,电泳时间为60～90min。     

猪微卫星多态性两种检测方法的比较研究

 为了确定一种安全、有效的检测猪微卫星多态性的实验方法,采用两种电泳和两种染色方法对大白猪基因组DNA进行了6个微卫星座位的PCR扩增,并将扩增产物在2.5%的琼脂糖凝胶上电泳,EB染色,然后又在8%的聚丙烯酰胺凝胶上电泳,AgNO₃染色。结果表明两种方法检测出的等位基因数目和基因多态性水平存在差异,8%的聚丙烯酰胺凝胶电泳在区分微小差异片段能力上明显优于2.5%的琼脂糖凝胶电泳。     

不同凝胶电泳对玉米自交系DNA多态检测的影响

利用10个SSR(简单序列重复)引物对,对10个玉米自交系进行同源位点扩增,用琼脂糖凝胶及聚丙烯酰胺凝胶两种电泳方法分离,检测其DNA多态性。结果表明,其间的多态性检测结果差异较大。聚丙烯酰胺凝胶电泳较琼脂糖凝胶电泳能检出更多的等位基因位点,多态信息含量值亦较高,自交系间遗传相似系数的变幅小于琼脂糖凝胶检测中的相应值。聚丙烯酰胺凝胶电泳的分辨率高于琼脂糖凝胶电泳,对自交系的系统聚类更为准确、可靠,更能真实地反映自交系间的系谱关系。     

小麦HMW-GS毛细管电泳标准图谱的构建

用毛细管电泳技术对普通小麦品种Glu-1位点高分子量谷蛋白亚基变异进行分析,探讨该技术对高分子量谷蛋白亚基分离的分辨率和重复性,并构建15个不同常见亚基的标准图谱,试验结果增加1Dx3、1Dx4、1Bx13、1Bx14、1By15、1By16六个亚基的标准出峰时间并进行排序。对毛细管电泳图谱与SDS-PAGE进行比较。结果表明,毛细管电泳的出峰顺序与SDS-PAGE略有不同,使用该技术能简便迅速鉴定小麦高分子量谷蛋白优质亚基,比SDS-PAGE鉴定结果更为快捷灵敏,能够高效快速测定大量不同品种的高分子量谷蛋白亚基。     

利用醋酸纤维素薄膜电泳显示金针菇酯酶同工酶

[目的]利用醋酸纤维素薄膜电泳分析金针菇酯酶同工酶。[方法]以6种金针菇为材料,采用醋酸纤维素薄膜电泳对其酯酶同工酶进行分析,并与利用PAGE法得到的针菇酯酶同工酶图谱进行对比。[结果]6种金针菇共电泳得到20条酯酶同工酶带,其中相对迁移率不同的共有8条,大小分别为0.580、0.613、0.645、0.709、0.806、0.839、0.871、0.934;6种金针菇中,①号和②号有3条相同的带,④号和⑤号条带完全相同,③号与④号、⑤号有2条相同的带,⑥号与其他5种菌株间相同的条带较少。[结论]该试验结果与PAGE法显示的金针菇酯酶同工酶图谱基本一致,为实现利用醋酸纤维素薄膜电泳技术快速检测各类食用菌酯酶同工酶提供了可能。     

团毛菌目黏菌蛋白质电泳的初步研究

应用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳技术，分别选取同属不同种和不同属种的黏菌进行蛋白质电泳实验。结果表明：团毛菌目黏菌的凝胶电泳具有种的特异带，可作为种间分类依据，特别是近缘种的划分。团毛菌目黏菌不同属间所含相同的蛋白质亚基较少，属内不同种黏菌相同的蛋白质亚基较多，属间较种间谱带差异明显。蛋白质电泳技术可作为黏菌近缘种鉴定的一种手段。     

利用清蛋白PAGE技术鉴定甜玉米杂交种初报

利用改进的聚丙烯酰胺凝胶电泳技术对7个甜玉米杂交种的清蛋白进行分析。结果表明,甜玉米种子清蛋白存在一定的多态性,每个品种都有各自独特的清蛋白PAGE“指纹”。利用该技术对7个不同甜玉米杂交种的种子纯度进行了室内检验,同时利用田间种植鉴定法进行了测定,通过对其中5个杂交种的电泳纯度和田间纯度进行相关分析,二者达显著水平(r=0.9408),说明改进的聚丙烯酰胺凝胶电泳技术用于甜玉米种子纯度鉴定是可行的,可用于甜玉米杂交种纯度鉴定。     

银染聚丙烯酰胺凝胶电泳技术体系的优化

【目的】针对银染PAGE实验中常出现的背景颜色深、条带弥散、凝胶变形及条带不整齐等问题进行归纳总结并提出优化方法。【方法】以甘蓝型油菜基因组DNA为研究对象,通过PAGE电泳后银染并调整试剂配方、实验条件,筛选出适合实验的技术体系。【结果】甲醇浓度、电压稳定性、电泳温度、气泡等显著影响实验结果。甲醛浓度过高(1.25%)时,虽所需染色时间短,但凝胶背景深;甲醛浓度过低(0.001 25%)时,背景浅但条带淡,需要长时间染色;电压不稳定会造成条带弥散;电泳温度过高,导致凝胶变形,条带弯曲;凝胶中的气泡会扰乱DNA条带的形状;NaOH浓度在0.875%~1.375%,染色结果无明显差异。【结论】甲醛用量4 mL(1%)、保持稳定电压、在冰浴中电泳、制胶时及时赶走所有气泡,可得到凝胶背景浅、条带清晰且正常的结果。     

魟鱼软骨多糖的聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴别

[目的]用聚丙烯酰胺凝胶电泳对魟鱼软骨多糖（RCG）进行定性鉴别。[方法]利用纯化RCG,进行聚丙烯酰胺凝胶电泳。[结果]RCG经纯化,基本实现了多糖的分离;根据聚丙烯酰胺凝胶电泳迁移率,可明显鉴别出魟鱼RCG。[结论]该法重现性较好,简单易行,可用于魟鱼RCG的定性鉴别。     

泰山赤鳞鱼同工酶性别和组织表型差异的研究

应用聚丙烯酰胺凝胶电泳结合生化染色方法分别对雌雄泰山赤鳞鱼11种组织中苹果酸脱氢酶(Malate dehydrogenase,MDH,E.C.1.1.1.37)同工酶酶谱进行了分析.首次发现苹果酸脱氢酶、酸性磷酸酶和超氧化物岐化酶表型在赤鳞鱼雌性和雄性之间存在差异,而在同一性别不同个体之间无差异.因此,苹果酸脱氢酶、酸性磷酸酶和超氧化物岐化酶的电泳酶谱可以作为一项指标用于泰山办鳞鱼性别和组织的鉴定.这将为赤磷鱼种群的发育遗传学、品种改良和定向育种提供基础资料,从而有利于这一名贵育鱼种的开发和保护. Abstract： Polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE) and biochemical staining method were used in this study for the analysis on malate dehydrogenase (MDH,E.C.1.1.1.37) isozymes zymogram in 11 different types of tissues of male and female Varicorhinus macrolepis.It had been found for the first time that the phenotype of malate dehydrogenase (MDH),acid phosphatase (ACP) and superoxide dismutase (SOD) showed difference between male and female V.macrolepis,and there was no difference among different individuals in the same sex.Therefore,the electrophoresis band of malate dehydrogenase,acid phosphatase and superoxide dismutase could be used as an indicator for the identification of gender and tissues of V.macrolepis,which would provide basic data for the developmental genetics,vadety improvement and directed breeding of V.macrolepis groups,thus facilitating the development and protection of this valuable fish species.     

东北龙胆花芽蛋白质双向电泳条件的建立

初步建立了东北龙胆(Gentiana manshuica Kitagawa)花芽总蛋白质提取方法,以及东北龙胆花芽蛋白质组研究的双向电泳技术.从样品制备及溶解等方面进行了优化,解决了东北龙胆花芽蛋白质提取中色素、多糖、酚类物质等对双向电泳的干扰,确定了一种有效的蛋白溶解液(7 mol/L尿素,2 mol/L硫脲,4% CHAPS,40 mmol/L DTT,1%蛋白酶抑制剂混合物,2%的两性电解质pH=3～10).同时,对电泳其它环节也进行了优化,经考马斯亮兰染色后,可分辨蛋白质斑点数约1 000个.获得了重复性好、分辨率高的蛋白质双向电泳图谱.     

适用于甜玉米叶片蛋白质组分析的双向电泳技术

采用改良的TCA/丙酮法提取叶片总蛋白,建立了一套适用于甜玉米叶片的蛋白质组学研究方法,并对蛋白溶解液、蛋白上样量、第一向IEF等电聚焦时间等条件进行了优化.用改进的蛋白溶解液提取叶片总蛋白,明显减轻了离子干扰造成的蛋白点横拖;500μg蛋白上样量的检出蛋白点最丰富,可达750个以上;延长8 000 V等电聚焦至30 000 Vh可获得良好的蛋白点分离效果;采用优化条件后的双向电泳参数,结果重复性较高,检出蛋白点的线性回归相关系数可达0.93以上.     

菜籽蛋白质组双向电泳技术体系的优化研究(英文)

[目的]建立适用于菜籽蛋白质组研究的双向电泳技术。[方法]以湘油17号为材料,对双向电泳技术中的样品制备方法、凝胶浓度、上样量等条件进行了优化。[结果]使用TCA-丙酮法提取菜籽总蛋白最佳,所获蛋白在2-DE图谱上获得的点数最多。当采用pH3～10IPG胶条和12%的凝胶、上样量为250μg时,可得到背景清晰、重复性好、蛋白点分辨率较高的双向电泳图谱。[结论]为开展油菜种子蛋白质组学研究奠定了基础。