扇贝种间杂交的可行性及幼体早期发育的初步研究

用栉孔扇贝Chlamys farreri、海湾扇贝Argopecten irradians、虾夷扇贝Patinopecten yessoensis和华贵栉孔扇贝Chlamys nobilis进行多种杂交组合及自交,试验分为8组,即海湾扇贝♀×虾夷扇贝♂、虾夷扇贝♀×海湾扇贝♂、虾夷扇贝♀×华贵栉孔扇贝♂、虾夷扇贝♀×栉孔扇贝♂、栉孔扇贝♀×虾夷扇贝♂5个杂交组和虾夷扇贝、海湾扇贝、栉孔扇贝3个自交组,在不同温度下比较了各杂交组配子的亲和力,同时对胚胎发育及早期幼虫的生长结果进行比较。结果发现,在适温范围内各杂交组正、反交均可受精,其中栉孔扇贝♀×虾夷扇贝♂、虾夷扇贝♀×栉孔扇贝♂杂交组受精率较高,可达80%以上;杂交子一代的D型幼虫大小性状与母本相似。另外还对杂交组合受精率、成活率较低的成因进行了探讨。     

栉孔扇贝♀×虾夷扇贝♂单对杂交子一代的ISSR分析

用ISSR-PCR(Inter Simple Sequence Repeats PCR)技术对栉孔扇贝Chlamys farreri♀和虾夷扇贝Patinopecten yessoensis ♂及其单对杂交子一代担轮幼虫进行了分析.结果表明:从20个ISSR引物中筛选出4个引物对栉孔扇贝♀、虾夷扇贝♂及其单对杂交子一代担轮幼虫进行PCR扩增,共得到153个清晰稳定的扩增位点,其中母本栉孔扇贝的特异位点有38个,父本虾夷扇贝的特异位点有32个.对ISSR扩增图谱的分析结果证实,所研究的杂交子代是栉孔扇贝和虾夷扇贝的杂交种.杂交子代与母本栉孔扇贝的平均遗传相似性系数为0.6086,与父本虾夷扇贝的平均遗传相似性系数为0.4402,表明杂交子代在遗传上偏向于母本栉孔扇贝.     

栉孔扇贝♀×虾夷扇贝♂单对杂交子一代的ISSR分析

用ISSR—PCR（Inter Simple Sequence Repeats PCR）技术对栉孔扇贝Cldamys farreri♀和虾夷扇贝Patinopecten yessoensis ♂及其单对杂交子一代担轮幼虫进行了分析。结果表明：从20个ISSR引物中筛选出4个引物对栉孔扇贝♀、虾夷扇贝♂及其单对杂交子一代担轮幼虫进行PCR扩增，共得到153个清晰稳定的扩增位点，其中母本栉孔扇贝的特异位点有38个，父本虾夷扇贝的特异位点有32个。对ISSR扩增图谱的分析结果证实，所研究的杂交子代是栉孔扇贝和虾夷扇贝的杂交种。杂交子代与母本栉孔扇贝的平均遗传相似性系数为0．6086，与父本虾夷扇贝的平均遗传相似性系数为0．4402，表明杂交子代在遗传上偏向于母本栉孔扇贝。     

温度对海湾扇贝与虾夷扇贝及其杂交受精、胚胎和早期幼体发育的影响

本文报道了温度对海湾扇贝和虾夷扇贝及其杂交受精胚胎和早期幼体发育的影响结果。在实验温度下,各亲本组合受精的适温和最适温度范围分别为：海湾扇贝１０～３０℃和１９～２８℃,虾夷扇贝５～２２℃和１０～１９℃;海湾扇贝♀×虾夷扇贝♂１０～３２℃和１９～２８℃,虾夷扇贝♀×海湾扇贝♂１０～２５℃和１５～１９℃。在适温范围内,海湾扇贝和虾夷扇贝受精率达１００％,两杂交组合可达７０％以上,高温或低温对受精都不利。各亲本组合胚胎发育的适温和最适温度范围分别为：海湾扇贝１５～２５℃和１７～２２℃,虾夷扇贝１０～１９℃和１３～１７℃;海湾扇贝♀×虾夷扇贝♂１５～２５℃和１７～２２℃,虾夷扇贝♀×海湾扇贝♂１０～１９℃和１５～１７℃。温度过高或过低对各亲本组合胚胎发育速度和成活率都有明显的影响。     

温度对海湾扇贝与虾夷扇贝及其杂交受精、胚胎和早期幼体发育的影响

本文报道了温度对海湾扇贝和虾夷扇贝及其杂交受精胚胎和早期幼体发育的影响结果。在实验温度下，各亲本组合受精的适温和最适温度范围分别为：海湾扇贝１０～３０℃和１９～２８℃，虾夷扇贝５～２２℃和１０～１９℃；海湾扇贝♀×虾夷扇贝♂１０～３２℃和１９～２８℃，虾夷扇贝♀×海湾扇贝♂１０～２５℃和１５～１９℃。在适温范围内，海湾扇贝和虾夷扇贝受精率达１００％，两杂交组合可达７０％以上，高温或低温对受精都不利。各亲本组合胚胎发育的适温和最适温度范围分别为：海湾扇贝１５～２５℃和１７～２２℃，虾夷扇贝１０～１９℃和１３～１７℃；海湾扇贝♀×虾夷扇贝♂１５～２５℃和１７～２２℃，虾夷扇贝♀×海湾扇贝♂１０～１９℃和１５～１７℃。温度过高或过低对各亲本组合胚胎发育速度和成活率都有明显的影响。     

温度休克诱导栉孔扇贝和虾夷扇贝三倍体的初步研究

本文报道了用冷休克和热休克的方法阻止第一极体释放诱导栉孔扇贝(Chlamys farreri)和虾夷扇贝(Patinopecten yessoensis)三倍体的实验结果。栉孔扇贝在水温17℃下,受精后17min,开始处理。冷休克以1℃,处理持续时间为20min处理组倍化频率最高,为30.4％;热休克以30℃,处理时间为12min的处理组倍化频率最高,达27.6％。虾夷扇贝在水温10℃下,受精后40min,开始热休克处理,结果以29℃,处理持续时间为11min组最好,倍化频率为26.7％。处理组与对照组在孵化率,畸形率和胚胎发育上有明显的差异。栉孔扇贝2n=38,3n=51,虾夷扇贝2n=38,3n=57。     

栉孔扇贝和虾夷扇贝通用微卫星引物的筛选及其在杂种鉴定中的应用

[目的]为进行大规模栉孔扇贝×虾夷扇贝群体的杂种鉴定以及家系中的亲子鉴定提供了基础。[方法]将已发表的25对虾夷扇贝的微卫星引物在栉孔扇贝基因组DNA上进行PCR扩增,并利用筛选出的通用引物对栉孔扇贝(♀)×虾夷扇贝(♂)进行杂种鉴定。[结果]通过PCR扩增,筛选出6对引物获得扩增产物,其中2对表现为多态性。将这6对具有属间通用性的微卫星引物对栉孔扇贝(♀)×虾夷扇贝(♂)进行PCR扩增,均能扩增出特异性条带,其中引物P13F449和KMY134的扩增产物中可以明显地分辨出来自父母本群体的特有条带,从而确定了杂交子代的杂种身份。[结论]虾夷扇贝和栉孔扇贝间通用微卫星引物是存在的,而且部分引物可以直接用于属间杂种的鉴定。     

虾夷扇贝精子的冷冻保存及其杂交试验应用研究

以精子活力和受精率为参数,就收集精子的方法、抗冻剂的种类和浓度及冷冻程序和平衡时间对虾夷扇贝精子超低温保存效果的影响进行了研究,并进行了冻存精子与栉孔扇贝卵子的杂交实验.结果表明,肾管处收集到的精液与海水配的16%DMSO 1∶3（v/v）混合,在4 ℃冰箱内平衡5～10 min,在液氮面上方20cm、3 cm处分别停留3 min、10 min后浸入液氮保存,冻精活力在40%以上.在液氮中保存1 d、8 d、30 d、90 d后解冻,冷冻精子活力没有显著差异（P＞0.05）,但明显低于新鲜精子的精子活力.虾夷扇贝的冻精可以使栉孔扇贝卵子受精,受精率在20%以上,并能得到正常的D型幼虫.     

虾夷扇贝精子的冷冻保存及其杂交试验应用研究

以精子活力和受精率为参数,就收集精子的方法、抗冻剂的种类和浓度及冷冻程序和平衡时间对虾夷扇贝精子超低温保存效果的影响进行了研究,并进行了冻存精子与栉孔扇贝卵子的杂交实验.结果表明,肾管处收集到的精液与海水配的16%DMSO 1∶3（v/v）混合,在4 ℃冰箱内平衡5～10 min,在液氮面上方20cm、3 cm处分别停留3 min、10 min后浸入液氮保存,冻精活力在40%以上.在液氮中保存1 d、8 d、30 d、90 d后解冻,冷冻精子活力没有显著差异（P＞0.05）,但明显低于新鲜精子的精子活力.虾夷扇贝的冻精可以使栉孔扇贝卵子受精,受精率在20%以上,并能得到正常的D型幼虫.     

华贵栉孔扇贝闭壳肌酶解物的辅助降血糖功能活性评价

为挖掘华贵栉孔扇贝(Chlamys nobilis)高值化利用的潜力,选用复合蛋白酶水解华贵栉孔扇贝的闭壳肌,探讨华贵栉孔扇贝闭壳肌酶解物（Enzymatic hydrolysate of Chlamys nobilis adductor muscle, EHCA）对α-葡萄糖苷酶活性的影响和对DPPH自由基的清除能力,并以空腹血糖浓度、血清胰岛素含量、肝脏丙二醛和超氧化物歧化酶含量等为指标,评价EHCA对正常小鼠体内辅助降血糖功能和抗氧化活性。结果表明,EHCA具有较好的?-葡萄糖苷酶抑制活性,且其DPPH自由基清除能力随着酶解物浓度增加而上升;动物实验结果显示,一定浓度的EHCA能增强小鼠的糖耐量,并显著降低小鼠肝脏丙二醛,提高超氧化物歧化酶活力。复合蛋白酶能够有效酶解华贵栉孔扇贝闭壳肌,其酶解物具有较好的?-葡萄糖苷酶抑制活性和抗氧化活性,具有一定的辅助降血糖作用。本研究结果为开发辅助降血糖海洋功能食品提供理论依据。     

亮氨酸脑啡肽对栉孔扇贝血细胞吞噬作用的影响

向栉孔扇贝(Chlamys farreri)血淋巴中加入不同浓度的亮氨酸脑啡肽(leucine-enkephalin,L-ENK),研究其对栉孔扇贝血细胞吞噬杆菌作用的影响.结果表明,血细胞的吞噬能力随L-ENK浓度的升高而增强,L-ENK能增强栉孔扇贝血细胞的吞噬能力,可作为一种较好的免疫刺激剂.     

异源精子诱导栉孔扇贝雌核发育早期胚胎发育及其倍性分析

采用紫外线遗传灭活的长牡蛎（Crassostrea gigas）精子作激活源,经6-DMAP加倍诱导栉孔扇贝（Chlamys farreri）第二极体抑制型雌核发育二倍体;运用荧光显微技术,对雌核发育二倍体卵子早期胚胎发育过程中的核相变化进行观察。结果显示,紫外线处理过的精子入卵后发生一次轻微膨胀,形成雄性原核,但不形成染色体,而是浓缩为致密的染色质小体（DCB）,DCB或滞留于两卵裂球的分裂沟上或进入其一的细胞质中,不与雌原核融合;雌核发育胚胎的发育速度明显滞缓,经6-DMAP处理后胚胎发育速度加快,发育同步化;在雌核发育二倍体诱导过程中,还观察到杂交体、异源三倍体、雌核发育单倍体、雌核发育四倍体。结果为异源精子诱导栉孔扇贝雌核发育提供了细胞学证据。     

溶藻弧菌对华贵栉孔扇贝体内几种酶活性的影响

对华贵栉孔扇贝（Chlamys nobilis）注射不同密度的溶藻弧菌（Vibrio alginolyticus）,于注射后6,12,18,48,72h测定体内过氧化氢酶（CAT）、超氧化物岐化酶（SOD）、碱性磷酸酶（ALP）和酸性磷酸酶（ACP）的活力。结果表明：5×107cell.mL-1,5×108cell.mL-1组血淋巴中CAT活性均有升高趋势,其中5×108cell.mL-1组在18h极显著增加（P≤0.01）,24h显著增加（P≤0.05）。5×108cell.mL-1组SOD活性最初表现为抑制,在12h和18h显著低于对照组（P≤0.05）,24h后明显升高,5×107cell.mL-1组与对照组相比差异不明显。肝脏中ALP活性在18h与对照组相比,5×108cell.mL-1组极显著升高（P≤0.01）,5×107cell.mL-1组显著升高（P≤0.05）。注射后ACP活性有明显升高的趋势,5×108cell.mL-1组在12h和18h显著高于对照组（P≤0.05）,且在注射后24h5×107cell.mL-1,5×108cell.mL-1组活性均达到最高。     

黄渤海水域栉孔扇贝加工废弃液中的营养及功能成分分析

[目的]明确黄渤海水域栉孔扇贝加工废弃液中的营养及功能成分。[方法]取山东烟台的栉孔扇贝废弃液为材料,采用83550型氨基酸自动分析仪和分光光度法分析栉孔扇贝废弃液的浓缩液中的有关营养功能成分。[结果]山东烟台栉孔扇贝加工废弃液中含有8种人体必需氨基酸,牛磺酸含量为1.97%,蛋白质和总糖的平均含量分别为11.82%和12.68%。[结论]扇贝煮汤营养物质含量丰富,且含有大量的鲜味物质,是加工调味品的理想原料。     

异源精子诱导栉孔扇贝雌核发育早期胚胎发育及其倍性分析

采用紫外线遗传灭活的长牡蛎（Crassostrea gigas）精子作激活源,经6-DMAP加倍诱导栉孔扇贝（Chlamys farreri）第二极体抑制型雌核发育二倍体;运用荧光显微技术,对雌核发育二倍体卵子早期胚胎发育过程中的核相变化进行观察。结果显示,紫外线处理过的精子入卵后发生一次轻微膨胀,形成雄性原核,但不形成染色体,而是浓缩为致密的染色质小体（DCB）,DCB或滞留于两卵裂球的分裂沟上或进入其一的细胞质中,不与雌原核融合;雌核发育胚胎的发育速度明显滞缓,经6-DMAP处理后胚胎发育速度加快,发育同步化;在雌核发育二倍体诱导过程中,还观察到杂交体、异源三倍体、雌核发育单倍体、雌核发育四倍体。结果为异源精子诱导栉孔扇贝雌核发育提供了细胞学证据。     

Cu2+对栉孔扇贝鳃组织抗氧化酶的影响

将栉孔扇贝置于不同浓度的Cu2 溶液中10d,测定其鳃组织过氧化氢酶(CAT),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX),超氧化物歧化酶(SOD)的活性.结果表明,随着Cu2 浓度的增高,CAT的活性先降后升再降,SOD的活性先降后升再降,GSH-PX的活性先降后升,但整体仍是抑制的特性.另外,对于低浓度Cu2 长期暴露,栉孔扇贝鳃组织中SOD较CAT和GSH-PX敏感,可考虑作为水生生态系统中低浓度Cu2 长期暴露的一种生物检测指标.     

有机-无机复合污染对扇贝积累石油烃的影响

[目的]研究有机-无机复合污染对扇贝积累石油烃的影响。[方法]在实验室模拟条件下研究石油烃与Cu、Pb复合污染对栉孔扇贝积累石油烃的影响。[结果]单一石油烃污染条件下,石油烃在栉孔扇贝体内的积累量随暴露时间的延长及石油烃浓度的增大都有明显增大趋势;复合污染条件下,石油烃在栉孔扇贝体内的积累量随暴露时间及污染物种类及浓度的变化发生着动态变化,且不同浓度处理组间差异很大,当石油烃浓度固定为0.6 mg/L时,不同处理浓度组的Cu、Pb及Cu与Pb组合都促进了栉孔扇贝对石油烃的积累,但低处理浓度组的Cu、高处理浓度组的Pb、低处理浓度组的Cu与Pb组合更有利于促进栉孔扇贝对石油烃的积累。[结论]石油烃与Cu、Pb复合污染条件下,石油烃在栉孔扇贝体内的积累状况比单一石油烃污染条件下要复杂得多。     

扇贝多肽(PCF)对H2O2损伤胸腺细胞的保护作用

将胸腺细胞分为正常对照组、H2O2模型组、0.1g/LVc组、0.5g/LPCF组、0.25g/LPCF组和0.125g/LPCF组6组,通过不同药物或不同浓度处理后,采用生物化学方法分别检测细胞裂解液中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)、总抗氧化能力(T-AOC)和活性氧(ROS)的含量,采用流式细胞仪测定各组细胞胞浆中的Ca2+含量和线粒体膜电位(ΔΨm)的变化。结果显示,扇贝多肽(PCF)能提高细胞中SOD,GSH-Px的含量,增强细胞的T-AOC,降低细胞中MDA和ROS的含量,并能引起胞浆中Ca2+含量的下降和ΔΨm的提升。表明PCF具有抑制H2O2对胸腺细胞氧化损伤的作用。