LPS对鹅等级卵泡基质层TLR家族基因表达的影响

【目的】研究鹅卵泡基质层TLR家族基因表达谱及其对LPS不同处理时间后的反应性。【方法】在大群散养条件下,实时观察鹅产蛋过程,分别在产蛋后8和2 h以及产前4、16和28 h注射LPS,并在产蛋后8h屠宰,即LPS作用0、6、12、24和36 h,每个时间点各5只鹅。屠宰时,取卵巢,观察卵泡外观形态,并分离F1-F5级卵泡基质层。试验鹅自由饮水、自由采食、自然光照。LPS处理0、24和36 h的单个F1-F5级卵泡基质层或卵泡用于基因表达分析,而其他LPS处理的每只鹅等级卵泡基质层RNA等质量混合后用于基因表达分析。采用普通PCR方法检测10种鸟类TLR家族基因的在鹅等级卵泡基质层的表达谱,其中以脾脏组织为阳性对照,以不加c DNA模板为阴性对照。根据RT-PCR的表达谱结果,采用Real-time PCR检测不同等级卵泡基质层TLRs表达水平以及不同LPS处理时间对基质层TLRs表达水平的影响。对不同等级卵泡和不同LPS处理时间对基质层TLRs表达的数据,采用单因子方差分析,Duncan法多重比较;对变性卵泡与对照组基质层TLRs表达水平的数据,采用T检验分析。【结果】(1)已公开的10种鸟类TLR家族基因,如TLRs 1A、1B、2A、2B、3、4、5、7、15和21基因均在等级卵泡基质层组织中表达。(2)随等级卵泡生长,TLRs 2A和15表达水平逐渐升高;F1级卵泡基质层TLR2A表达水平显著高于F3、F4和F5级卵泡,TLR15表达水平显著高于F5级卵泡;其他TLR家族基因,如TLRs 1A、1B、2B、3、4、5、7和21在不同等级卵泡基质层中的表达水平差异不显著。(3)在LPS处理0、6和12 h时,等级卵泡外观形态无明显变化,但在LPS处理24 h时,3只鹅的等级卵泡呈深黄色胶冻状变性;在LPS处理36 h时,全部试验鹅等级卵泡呈深黄色胶冻状变性。(4)与对照组(LPS处理0 h)相比,TLRs 2A、4和5表达水平在LPS处理12和24 h时显著升高,TLR2B表达水平在LPS处理24 h时显著升高,TLRs 7和15表达水平在LPS处理6-24 h期间均显著升高,而TLRs 1A、1B、3和21表达水平在LPS处理6-24 h期间差异不显著。(5)与等级卵泡基质层相比,在LPS处理24和36 h的变性卵泡中,TLRs 1A、2A、2B、4、5、7和15表达水平显著升高,TLR3表达水平显著降低,而在LPS处理36 h的变性卵泡中,TLRs 1B和21表达水平显著升高。【结论】已发现的10种鸟类TLR家族基因均在种鹅等级卵泡基质层表达,且随LPS作用时间延长,等级卵泡形态结构发生变化,但TLRs表达水平逐渐升高。     

猪源Toll样受体家族(TLRs)及其在抗病育种中的应用

Toll样受体(toll like receptors, TLRs)作为模式识别受体,不仅能够对机体特异性配体进行识别,并通过多种信号传导通路(由髓样分化蛋白88或由β-干扰素TLR结构域衔接蛋白介导)启动信号传导继而引发特异性的免疫应答,同时还在一些由支原体、病毒、细菌等感染引起的免疫应答过程中发挥了重要的调控功能。因为其重要的免疫调控作用,Toll样受体家族已成为近些年研究的热点,对畜禽抗病育种工作也具有重要的科学意义和应用前景。文章综述了猪源TLRs的种类、功能、遗传变异以及介导的信号通路,并重点介绍了猪源TLRs在抗病育种中的应用,旨在为猪Toll样受体家族基因功能研究及有效遗传标记的筛选提供参考依据。     

猪TLR5基因定点突变表达载体构建

TLR5特异识别细菌鞭毛蛋白,在机体免疫反应中发挥重要作用,人TLR5基因突变能影响蛋白功能并与一些疾病的易感性密切相关。研究采用RT-PCR方法克隆了猪TLR5基因的全长编码区;采用PCR介导的定点突变技术得到该基因137(G/A)和1205(C/T)位点突变的两个变异体;以pcDNA3.1+为载体成功构建野生型(TLR5-WT-pcDNA3.1+)和突变型(TLR5-G137A-pcDNA3.1+和TLR5-C1205T-pcDNA3.1+)真核表达重组质粒。研究结果可为下一步细胞水平上的突变功能分析提供基础。     

两个不同品种肉兔TLR4基因多态性研究

TLR4能识别内毒素脂多糖(LPS),在介导革兰氏阴性菌及其LPS的宿主反应中发挥重要作用,是研究肉兔抗病力的重要候选基因。为了研究TLR4在不同肉兔品种的突变情况,设计引物对2个不同肉兔品种的12个个体的TLR4部分编码区进行序列扩增,并比较其序列。结果表明,共检测到3个SNP位点,均为非同义突变。2个非同义位点(G628T和C653A)位于预测蛋白的亮氨酸富集区(LRR)区域。LRR区域发生的非同义突变,尤其是亮氨酸的改变和氨基酸极性的改变可能会影响TLR4对病原的识别,这些SNP位点将有助于肉兔抗病分子标记的研究。     

益生菌的分类、生理功能与有效性评价研究进展

益生菌是对宿主健康有益的活的微生物,大量研究结果表明益生菌在消化道、免疫和心血管系统等诸多健康方面发挥了作用。综述了益生菌的分类与生物学特性,以及益生菌调节血脂、降血压、降血糖、抗过敏和调节免疫功能的研究进展,并对其黏附或定植评价、活性保护技术及代表性商业产品进行了介绍,以期为开展益生菌相关研究开发工作提供一定的帮助。     

不同品种羊血液和肺脏中TLRs基因转录水平差异分析

【目的】分析不同品种羊Toll样受体（TLRs）基因转录水平的差异性,为揭示TLRs基因转录水平与羊疫病间的关联性提供参考依据。【方法】选取贵州省主要饲养的贵州黑山羊、贵州白山羊、黔北麻羊、波尔山羊和湖羊为研究对象,根据GenBank已公布的TLRs基因序列设计荧光定量PCR特异性扩增引物及TaqMan探针引物,利用TaqMan探针荧光定量PCR检测不同品种羊血液和肺脏中TLR1~TLR10基因转录水平差异。【结果】 TLR1~TLR10基因在不同品种羊血液和肺脏中均有转录表达。不同品种羊血液和肺脏中的TLRs基因转录水平均存在差异性,在波尔山羊血液中TLR2、TLR4和TLR5基因转录水平均极显著低于其他4种羊（P<0.01,下同）,TLR7和TLR8基因转录水平则极显著低于除黑山羊外的其他3种羊;在白山羊血液中TLR4、TLR7、TLR8和TLR9基因转录水平极显著高于其他4种羊;在湖羊肺脏中TLR2、TLR3、TLR4、TLR5和TLR8基因转录水平极显著低于其他4种羊,而在黔北麻羊肺脏中TLR5和TLR8基因转录水平极显著高于其他4种羊。此外,在5种羊血液中TLR2、TLR4、TLR7和TLR8基因转录水平均极显著高于其他TLRs基因转录水平;羊肺脏中TLR2、TLR3、TLR4、TLR5和TLR8基因转录水平相对较高,在贵州白山羊、贵州黑山羊和波尔山羊均表现为极显著高于其他TLRs基因转录水平。【结论】不同品种羊血液和肺脏中TLRs基因转录水平具有差异性,以TLR2、TLR3、TLR4、TLR5和TLR8基因转录水平相对较高,提示TLRs在不同品种羊机体中发挥着清除病原体及维持机体稳态的作用,而TLRs基因转录水平差异可能是造成不同品种羊对疫病易感差异的原因之一。     

多子小瓜虫感染后草鱼TLR信号通路基因 的表达动态

[目的]明确草鱼Toll样受体(Toll-like receptor,TLR)信号通路基因在防御多子小瓜虫(Ichthyophthirius multifiliis)感染过程中的免疫作用,为有效防控鱼类多子小瓜虫感染提供理论参考.[方法]以多子小瓜虫感染草鱼后,采用实时荧光定量PCR检测分析在不同时间点(感染后6 h、12 h、1 d、2 d、3 d、5 d和7 d)草鱼部分TLRs基因(TLR1、TLR2、TLR4、TLR9、TLR20和TLR21)、接头蛋白基因(MyD88和TRIF)、信号转导分子(IRAK4和IRAK1)及细胞因子(IL-1β、TNF-α和IFN)在其皮肤和脾脏中的表达动态变化.[结果]草鱼感染多子小瓜虫后,TLR1、TLR2、TLR9、TLR20和TLR21基因在皮肤和脾脏中的表达主要呈上调趋势,TLR4基因在皮肤中主要呈上调表达,在脾脏中则主要呈下调表达;TLR信号通路接头蛋白基因MyD88和TRIF的表达变化趋势明显不同,其中,MyD88基因的表达在感染后第1~3 d均呈显著上调趋势(P<0.05,下同),而TRIF基因的表达在整个试验过程中绝大多数时间点与对照组无显著差异(P>0.05);IRAK4和IRAK1在皮肤和脾脏中的表达也主要呈上调趋势,但在脾脏中IRAK4在感染后第1 d和IRAK1在感染后第6 h的表达呈显著下调趋势;IL-1β和TNF-α在绝大多数时间点均显著上调,但IFN的表达基本没有变化.[结论]草鱼TLR信号通路中的部分TLRs基因(TL1、TLR2、TLR4、TLR9、TLR20和TLR21)、接头蛋白基因(MyD88)、信号转导分子(IRAK4和IRAK1)及下游细胞因子(IL-1β和TNF-α)均参与防御多子小瓜虫感染的免疫反应,尤其是在感染早期和中期发挥关键作用.     

荷斯坦牛TLR6基因CDS区的生物信息学分析

采用生物信息学方法分析和预测了荷斯坦牛TLR6基因编码蛋白质的理化特性、结构功能及其同源进化关系。结果表明,荷斯坦牛TLR6基因编码793个氨基酸,组成蛋白为不稳定的水溶性蛋白,二级结构为混合型,三级结构由α-螺旋、β-折叠、β-转角和无规则卷曲组成。蛋白质功能显示信号转导、胁迫应答、免疫应答和生长因子的几率相对较高。荷斯坦牛TLR6基因氨基酸序列与牦牛的同源性较高。说明TLR6基因能在荷斯坦牛免疫应答和生长调节过程中发挥重要作用,可能对牛的抗病力和生产性能起作用。     

猪精子核酸识别Toll样受体的表达特性

【目的】Toll样受体(Toll like receptors, TLRs)作为天然免疫系统中重要的模式识别受体,在抵御病原微生物感染方面发挥着重要作用。研究猪精子核酸识别TLR的表达和分布情况,为精子TLR信号通路相关功能和抗微生物特性的研究奠定基础。【方法】采用RT-PCR技术检测公猪精子TLR3、7、8和9 mRNA的表达情况,利用免疫荧光方法检测了TLR3蛋白在猪精子上的分布。【结果】RT-PCR结果显示,TLR3、7、8和9 mRNA在猪精子均有表达;免疫荧光试验结果显示TLR3主要分布在精子头部的后部和中段。【结论】猪精子上核酸识别TLRs的存在以及TLR3分布的区域化提示猪精子可能对病毒及其衍生物感染做出应答,为进一步研究精子TLR信号通路提供依据。     

鼠伤寒沙门氏菌感染诱导鸡盲肠及脾脏TLR基因差异表达

为研究鼠伤寒沙门氏菌感染后不同时间鸡盲肠和脾脏组织TLR4、TLR5、TLR15和TLR21 mRNA的表达规律,选用沙门氏菌阴性济宁百日鸡36只,随机分为2组,饲喂于隔离器中,2日龄分别接种1.23×108cfu鼠伤寒沙门氏菌和PBS溶液,接种后第1、3和7天采集盲肠和脾脏组织样品,应用荧光定量PCR检测感染后各时间、各组织中TLR4、TLR5、TLR15和TLR21的表达量。结果显示,1)济宁百日鸡感染鼠伤寒沙门氏菌后盲肠中TLR4、TLR5、TLR15和TLR21表达量均发生显著变化(P0.05);2)脾脏中TLR21和TLR4的表达量分别在接种后第1天和第3天显著上调(P0.05),而TLR5和TLR15的表达量差异不显著;3)感染后各时间点脾脏中TLR5的表达量显著低于盲肠(P0.01),而TLR4、TLR15和TLR21表达量均显著高于盲肠(P0.05)。鼠伤寒沙门氏菌感染后,鸡TLRs在盲肠和脾脏中发挥着不同的调控作用,而且这种表达调控表现出一定的时序性。     

狂犬病病毒感染改变小鼠Toll样受体及相关细胞因子的表达

Toll样受体（Toll-like receptors,TLRs）作为重要的固有免疫相关受体，在不同毒力狂犬病病毒（Rabies virus,RABV）感染的鼠脑中发生了怎样的变化，目前尚未见具体的报道。因此使用不同RABV毒株（固定毒株CVS-11、街毒株GDMM、弱毒株SRV9）经颅内接种构建小鼠感染模型，并利用RT-qPCR、Western blot等方法探究小鼠脑内TLRs(TLR2、TLR3、TLR4、TLR7、TLR8、TLR9)、下游效应分子（IRF3、Irgm1）及相关细胞因子（IL-1β、IFN-α、IFN-β和IFN-γ）的表达改变。结果显示：CVS-11组与GDMM组相关指标的改变相类似，鼠脑内病毒拷贝数随感染时间的增加而升高，TLR2、TLR8、TLR9、Irgm1及IFN-α、γ表达显著上调，小鼠分别在感染后7,12 d（中位数）死亡；SRV9组的病毒拷贝数在感染后期显著下降，TLR7、TLR8、TLR9和IFN-γ的变化与病毒拷贝变化趋势一致，IFN-α无变化，小鼠未发生死亡。说明TLR2、TLR7、TLR8、TLR9参与RABV感染后的免疫调控，其中，TL...     

TLRs在动物繁殖系统的表达及功能

免疫系统和生殖系统之间的交互作用对动物繁殖能力及生殖健康具有重要影响。研究表明,免疫系统和生殖系统的互作均与Toll-likereceptors(TLRs)有关,TLRs不仅在保护生殖道免疫感染中起重要保护作用,而且参与许多繁殖或疾病发生和发展。文章就TLRs在雌性动物繁殖生理和病理方面的作用作以综述。     

益生菌在维护宠物健康及疾病防治中的应用及作用研究进展

随着养宠家庭数量增多，人们对宠物健康越来越关注。肠道微生物群在动物健康中起着至关重要的作用，不仅影响宿主营养物质的代谢和吸收，还能调节宿主健康。目前已有研究证明，益生菌在宠物犬、猫生长发育过程中发挥诸多有益功能，如促进生长发育、增强营养代谢及免疫功能，保护犬、猫免受病原微生物感染等。宠物益生菌的应用、宠物肠道微生物群特征、益生菌作用机制进行探讨，以期为益生菌在宠物疾病防治中应用提供理论依据。     

益生菌Lactobacillus Casei Zhang对巨噬细胞中NO/iNOS表达的影响及其机制

目的:研究益生菌L.Casei Zhang对巨噬细胞RAW264.7中NO/iNOS表达的影响及探讨相关机制。方法:1×10~6CFU益生菌L.Casei Zhang与巨噬细胞RAW264.7细胞共培养2h,6h,12h,24h。收集细胞培养上清,检测NO的表达变化。通过Real-rime PCR检测iNOS、TLR2和TLR4表达的变化。L.Casei Zhang与RAW264.7共培养3h后,以LPS、CpG和PolyI:C刺激细胞,检测NO和iNOS表达的变化。结果:益生菌L.Casei Zhang促进了巨噬细胞中NO分泌和iNOS的表达。与TLR2的本底表达相比,L.Casei Zhang上调了RAW264.7细胞中TLR2的表达。TLR4 mRNA的表达在L.Casei Zhang与RAW264.7细胞共培养后2h显著增高。LPS和PolyI:C活化的巨噬细胞在L.Casei Zhang预处理后,NO/iNOS的表达水平显著降低。结论:益生菌L.Casei Zhang促进巨噬细胞中NO/iNOS的表达与促进TLR2和TLR4的表达有关。L.Casei Zhang抑制了LPS和PolyI:C诱导的巨噬细胞中NO/iNOS的表达。该研究为进一步阐明益生菌的免疫调节作用奠定了基础。     

感染金黄色葡萄球菌小尾寒羊外周血白细胞和乳腺组织中TLRs基因的表达

【目的】Toll样受体是一种调节天然免疫反应的I型跨膜蛋白受体,研究拟通过检测TLRs在金黄色葡萄球菌引起的羊乳房炎发病过程中的表达情况,为进一步探索TLRs在绵羊乳房炎的作用机理奠定基础.【方法】以泌乳期的小尾寒羊为实验动物,运用实时荧光定量PCR方法检测TLR1、TLR2、TLR3、TLR4、TLR5基因在小尾寒羊外周血白细胞和乳腺组织中mRNA水平的相对表达量.【结果】TLR1、TLR2、TLR3、TLR4、TLR5在对照组和感染组的小尾寒羊外周血白细胞和乳腺组织中均可表达.TLR5在感染组的表达量低于对照组.在小尾寒羊外周血白细胞中,TLR2在12h的表达量较感染后的其他时间段高,并且12h的表达量较对照组显著升高;TLR1和TLR3的表达量与对照组相比显著降低;TLR4在感染后的表达量低于对照组.在小尾寒羊乳腺组织中,TLR2在感染36h的表达量较对照组显著增高,在72h降到最低,但其表达量仍高于对照组;TLR3在感染后36h和48h的表达量均低于对照组.TLR4除24h的表达量显著升高外,其余时间段均低于对照组.TLR1的表达量各时段无差异.【结论】TLRs参与了感染羊乳房炎早期的病理过程.     

牛TLR2全长基因表达质粒的构建及其在HEK293细胞中的表达(英文)

[目的]构建牛TLR2全长基因表达质粒,并在HEK293细胞中表达。[方法]利用RT-PCR技术克隆TLR2基因的全长编码区,连接到pMD18-Tsimplevector,再亚克隆到pEGFP-N1载体,得到包含TLR2基因全长的重组真核表达质粒。将重组质粒瞬时转染到HEK293细胞。流式细胞计数法和共聚焦显微镜法检测转染效率和表达蛋白在细胞中的定位;qRT-PCR法检测TLR2 mRNA在HEK293/boTLR2中的表达。最后,通过脂膜酸刺激HEK293/boTLR2细胞试验来分析TLR2蛋白的生物活性。[结果]成功克隆TLR2基因全长并连接到真核表达载体,并在HEK293细胞中表达。在LTA刺激的条件下,转染重组质粒的细胞比未转染的HEK293细胞分泌更多IL-8。[结论]本研究建立的细胞模式为TLR激动剂和拮抗剂的筛选提供快速有效的手段,有利于开展TLR激动剂和TLRs相互作用的研究。     

益生菌制剂对母猪繁殖性能影响的研究

胃肠道的益生菌群与动物机体健康密切相关,机体胃肠道内存在一定数量的益生菌,能够维持肠道内菌群的生态平衡,对宿主产生有益作用。母猪胃肠道内的益生菌可以有效提高包括母猪泌乳力、乳汁品质和仔猪发育状况等在内的繁殖性能,本文旨在论述益生菌制剂对母猪繁殖性能的影响,为养猪业中合理使用益生菌提高理论依据。     

深色有隔内生真菌提高宿主植物抗逆性的研究进展

深色有隔内生真菌(DSE)是植物根际重要的益生菌,与宿主植物互作形成共生体,对宿主植物具有促生抗逆作用.深色有隔内生真菌(DSE)提高植物的抗逆性包括提高植物对干旱以及重金属污染等逆境胁迫的抗性、诱导植物产生系统抗性、抵御病原菌生物胁迫等.对这些方面的研究进展进行探讨,以期为益生菌与宿主植物互作机制研究提供理论依据和参考.     

TLRs信号通路和促炎症细胞因子基因在鸡胚成纤维细胞感染新城疫病毒过程中的表达分析

【目的】研究新城疫病毒对鸡胚成纤维细胞中TLRs抗病毒信号通路和促炎症相关细胞因子的诱导作用。【方法】采用分离培养的原代鸡胚成纤维细胞感染中等毒力的新城疫病毒,并在感染后的4、8、12、16、24h收集细胞,利用定量PCR检测TLRs信号通路及促炎症相关细胞因子在细胞新城疫病毒感染过程中的表达变化。【结果】结果显示,TLR3、TLR7、TLR15,及其衔接蛋白基因MYD88、TRIF,以及下游基因IFN-α、IFN-β、Mx的表达量在病毒感染后呈现出显著上调(P0.05)。同时促炎症细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α的表达量在病毒感染后也表现出显著上调(P0.05)。【结论】研究表明,在鸡胚成纤维细胞对新城疫病毒的识别过程中,由TLR3、TLR7、TLR15介导抗病毒信号通路,同时诱导产生促炎症细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α,并在新城疫病毒诱导的炎症反应过程中发挥重要的作用。     

益生菌在畜禽肠道疾病防治中的研究进展

畜禽肠道疾病的发生发展与其肠道菌群失调密切相关.益生菌作为一类对宿主健康有益的微生物,通过保护肠道上皮屏障、调节肠道黏膜免疫,抵抗肠道病原感染和氧化应激,促进机体营养吸收等方式发挥其益生效能.研究发现,益生菌在防治畜禽腹泻疾病、禽类坏死性肠炎、畜禽肠道过敏性疾病等方面具有显著作用.对益生菌的生理功能和其在畜禽肠道疾病防...