首页 | 本学科首页   官方微博 | 高级检索  
相似文献
 共查询到20条相似文献,搜索用时 72 毫秒
1.
目的 研究猪睾丸组织注射白消安消融猪内源精原干细胞(Spermatogonial stem cell,SSC)的效果,以及猪SSC同种异体移植后对内源性SSC消融受体生殖能力恢复的影响。方法 采用3 mg/kg剂量的白消安对9头6周龄大白公猪进行睾丸注射,另外3头注射2 mL 二甲基亚砜作为对照。3周后,对试验组公猪以相同剂量进行第2次睾丸注射。第2次注射3周后,采集试验组和对照组公猪睾丸进行相关检测,评估内源性SSC消融情况。第2次白消安注射1个月后,以两步酶消化法处理5~7日龄大白仔猪睾丸分离得到睾丸单细胞悬液,并用明胶差速贴壁法进行纯化,纯化后以免疫荧光和流式细胞术分析SSC的纯度。异体移植SSC 4个月后,用微卫星标记检测受体公猪精液以及睾丸组织中供体来源SSC的存在。结果 以3 mg/kg剂量的白消安处理大白公猪2次后,睾丸组织苏木精−伊红染色以及免疫组织化学染色结果显示,试验组睾丸曲细精管中各级生精细胞消融但其支持细胞结构完好,可以支持外源性SSC的定植及发育。免疫荧光以及流式细胞术结果表明,分离得到的睾丸单细胞悬液经纯化后UCHL-1阳性细胞占比由差速贴壁前的16.3%提高到了50.8%。苏木精−伊红染色以及免疫组织化学染色结果显示,猪SSC移植4个月后,移植组睾丸组织生精细胞恢复,在受体睾丸曲细精管基底膜上可检测到UCHL-1阳性SSC。受体睾丸组织的微卫星标记分析显示了供体SSC的存在,表明移植进入受体睾丸中的供体SSC可以在受体睾丸中定植存活超过4个月;精液微卫星标记未检测到供体来源的精子。结论 以3 mg/kg剂量的白消安注射公猪睾丸能有效消融内源性SSC,可以用来制备SSC移植的受体猪。两步酶消化及明胶差速贴壁法可成功分离纯化猪SSC。猪SSC经同种异体移植后可以在受体睾丸中定植存活超过4个月。  相似文献   

2.
不同剂量STZ与高脂饲料联合诱导糖尿病小鼠模型   总被引:1,自引:0,他引:1  
探讨不同剂量链脲霉素(streptozotocin,STZ)联合高脂膳食建立2型糖尿病小鼠模型的效果。选择C57BL/6J小鼠,5周龄开始饲喂高脂饲料,持续10周,将膳食诱导的肥胖(dietinduced obesity,DIO)小鼠随机分为对照组及3个试验组[分别为试验组A(腹腔注射STZ 50mg/kg)、B(腹腔注射STZ 70mg/kg)、C(腹腔注射STZ 100mg/kg)],每组均为10只动物。试验组小鼠腹腔注射STZ后与对照组一起继续饲喂高脂2周。分别检测各组小鼠造模前后空腹血糖,胰岛素水平及成模后糖耐量。结果表明试验A、B、C 3组的成模率分别为70%、90%、100%,其血糖含量(分别为229.4±8.72、349.4±6.71、432.5±11.0 mg/dL)显著地高于对照组(168.7±4.18mg/dL);其血浆胰岛素含量(分别为1.83±0.288,0.659±0.058,0.438±0.023ng/mL)明显低于对照组(2.95±0.218ng/mL)。不同STZ剂量可诱导不同程度的糖尿病症状。  相似文献   

3.
【目的】研究酸枣果肉多糖在抗衰老、增强免疫及心血管功能方面的保健作用。【方法】制备酸枣果肉多糖备用,以小鼠为试验动物,采用皮下注射D-半乳糖的方法构建衰老模型小鼠,给衰老模型小鼠连续灌胃低剂量(250mg/kg)和高剂量(500mg/kg)酸枣果肉多糖30d,测定血清中SOD、CAT活性和MDA含量,试验同时设空白对照组(给健康小鼠灌胃蒸馏水)、模型对照组(给衰老模型小鼠灌胃蒸馏水)和阳性对照组(给衰老模型小鼠灌胃维生素E 30mg/kg)。给健康小鼠连续灌胃60d低、高剂量酸枣果肉多糖,末次灌胃24h后,一部分取样测脾脏指数、胸腺指数和碳粒廓清指数;一部分小鼠尾静脉注射垂体后叶素诱发心肌缺血,测定注射前后小鼠的心率。【结果】酸枣果肉多糖可抑制衰老模型小鼠血中SOD和CAT活性下降和MDA浓度升高,其中酸枣果肉多糖高剂量组小鼠血清中的SOD、CAT活性和MDA浓度分别为空白对照组的97.3%,99.5%和101.5%。与空白对照组相比,酸枣果肉多糖能增加小鼠免疫器官质量和碳粒廓清指数,其中酸枣多糖高剂量组的碳粒廓清指数是空白对照组的3.363倍;酸枣果肉多糖对垂体后叶素所致心肌缺血小鼠的心率增高有一定拮抗作用。【结论】酸枣果肉多糖对所试动物具有抗衰老、增强免疫功能及改善心血管的保健作用。  相似文献   

4.
【目的】采用改良方法对犊牛睾丸支持细胞进行体外快速分离培养,以期建立一种简单快捷的支持细胞原代培养方法。【方法】采用1.0 g/L的Ⅳ型胶原酶和2.5 g/L的胰蛋白酶,对经分离曲细精管和组织剪碎2种方法处理的睾丸组织进行次第消化,比较2种方法对睾丸支持细胞分离效果的影响;采用福尔根染色法和免疫细胞化学方法鉴定睾丸支持细胞。【结果】睾丸组织采用分离曲细精管后进行酶消化的时间(8 min)较组织剪碎法(15min)短,并且前者消化所得有效细胞数(1.0×107)高于后者(0.81×107),两者具有显著差异(P0.05);福尔根染色和免疫细胞化学染色结果显示,分离细胞有卫星核小体存在,且细胞中ABP阳性表达,表明分离培养的细胞确为睾丸支持细胞。【结论】睾丸组织经曲细精管分离后进行胶原酶和胰蛋白酶次第消化,有助于快速高效分离睾丸支持细胞。  相似文献   

5.
豆类丝核菌次级代谢产物对化疗骨髓抑制小鼠的保护作用   总被引:2,自引:0,他引:2  
【目的】探讨豆类丝核菌次级代谢产物对环磷酰胺所致小鼠骨髓抑制的保护作用及其作用机制。【方法】将昆明种小白鼠60只均分为6组:Ⅰ组(正常对照组)、Ⅱ组(CTX模型对照组)、Ⅲ组(苦马豆素(SW)低剂量组)、Ⅳ组(SW中剂量组)、Ⅴ组(SW高剂量组)、Ⅵ组(SW16 mg/kg)。Ⅰ、Ⅱ组灌胃生理盐水,Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ组分别灌胃浓度为8,16,32,16 mg/kg的SW液,剂量皆为0.4 mL/d,共10次;末次灌胃6 h后,Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组腹腔注射环磷酰胺(CTX)80 mg/kg,每天1次,连续3 d,末次注射后24 h,眼眶采血并处死小鼠,测定血常规、脾脏指数、脾集落形成单位(CFU-S)、骨髓有核细胞(BMC)数及骨髓细胞增殖试验,研究豆类丝核菌次级代谢产物对小鼠骨髓造血功能的影响。【结果】腹腔注射CTX80 mg/kg连续3次,可致小鼠骨髓抑制。豆类丝核菌次级代谢产物(SW剂量为16mg/kg)可较好抑制CTX引起的白细胞数(WBC)、红细胞数(RBC)、血红蛋白含量(HgB)、骨髓有核细胞数(BMC)减少;各剂量的SW能明显增加CFU-S数,其中以SW16 mg/kg效果最佳。当SW为8 mg/kg时,能很好地刺激骨髓细胞增殖。【结论】豆类丝核菌次级代谢产物对环磷酰胺所致小鼠骨髓抑制有较好的保护作用,其机制可能是通过刺激骨髓细胞增殖,增加BMC数和髓外造血来实现。  相似文献   

6.
【目的】评价连翘苷对小鼠遗传物质的损伤作用,为揭示连翘苷对动物细胞影响的机理及其临床运用提供参考。【方法】给小鼠腹腔注射1 500,1 250,1 000,750,500和250mg/kg的连翘苷1次,连续观察10d,记录小鼠死亡数,采用改良寇氏法计算连翘苷对小鼠的半数致死量(LD50)。然后给小鼠腹腔注射250,500,750和1 000mg/kg的连翘苷连续5d,取小鼠骨髓嗜多染红细胞、肝组织和小鼠精子样品,检测连翘苷对嗜多染红细胞微核率、肝细胞彗星试验细胞拖尾率和小鼠精子畸变率的影响。以腹腔注射羧甲基纤维素钠溶液和环磷酰胺的小鼠分别为阴性和阳性对照。【结果】连翘苷对小鼠的LD50为1 086mg/kg。连翘苷剂量≥500mg/kg时,嗜多染红细胞微核率和总核异常率极显著提高(P0.01),1 000mg/kg时微核率和总核异常率分别达到最高值2.28%和18.94%;在受试剂量下,彗星电泳肝细胞DNA拖尾率与阴性对照组相比,差异无统计学意义;与阴性对照组相比,连翘苷剂量≥500mg/kg时小鼠精子畸形率显著或极显著提高。【结论】高剂量(≥500mg/kg)连翘苷能使小鼠嗜多染红细胞微核率和雄性小鼠精子畸形率上升,有一定的遗传毒性;连翘苷对小鼠肝细胞DNA无损伤作用。  相似文献   

7.
【目的】研究含银耳多糖的猕猴桃饮料的抗辐射损伤性能,为猕猴桃功能饮料的开发提供参考。【方法】将150只昆明种小鼠随机分为3批,每批50只,再随机分为空白对照组、辐射对照组、低剂量饮料试验组(20.00mL/kg)、中剂量饮料试验组(40.00mL/kg)、高剂量饮料试验组(80.00mL/kg),每组10只,对各饮料试验组小鼠用含银耳多糖的猕猴桃功能饮料灌胃15d后,用60 Coγ对各组小鼠进行一次性全身照射,观察不同剂量含银耳多糖的猕猴桃功能饮料对小鼠外周血白细胞总数、超氧化物歧化酶(SOD)活性、血清溶血素值的影响效应。【结果】辐照后14d,辐射对照组、中剂量饮料试验组、高剂量饮料试验组小鼠外周血白细胞计数分别为(5.04±1.39)×109、(9.20±1.93)×109和(11.02±1.08)×109/L,表明与辐射对照组相比,辐照后的中、高剂量饮料试验组小鼠外周血白细胞总数有显著增加(P0.05);辐照后14d,辐射对照组、中剂量饮料试验组、高剂量饮料试验组小鼠肝脏SOD活性分别为(1 064.52±47.51)、(1 188.56±60.04)和(1 309.54±51.54)U/mg,表明与辐射对照组相比,辐照后的中、高剂量饮料试验组小鼠肝脏SOD活性显著增强(P0.05);辐照后18d,辐射对照组及中、高剂量饮料试验组小鼠血清溶血素值分别为61.40±13.49,89.67±17.95和106.28±13.56,表明与辐射对照组相比,辐照后的中、高剂量饮料试验组小鼠血清溶血素值显著增强(P0.05)。【结论】饮用40.00和80.00mL/kg剂量含银耳多糖的猕猴桃饮料对遭受辐射危害的机体具有辅助保护作用。  相似文献   

8.
【目的】评价自拟中药复方对免疫抑制小鼠血清细胞因子、免疫球蛋白和红细胞免疫黏附功能的影响。【方法】通过腹腔注射环磷酰胺建立免疫抑制小鼠模型。试验组免疫抑制小鼠分别按20,10和5g/kg剂量灌胃自拟中药复方,同时设置模型对照组(灌胃等体积生理盐水)、健康对照组(灌胃等体积生理盐水)和黄芪多糖对照组(灌胃剂量66mg/kg),连续7d,试验第0,3,7天采集血样,用血细胞自动分析仪测定小鼠血细胞数,用酶联免疫吸附试验测定血清IL-2、IgG、IgM、IL-4和IFN-γ含量,并计算IL-4/IFN-γ,用红细胞C3b受体花环(C3b RR)及免疫复合物花环(ICR)试验分析红细胞免疫黏附功能。【结果】通过腹腔注射环磷酰胺(80mg/kg,1次/d,连用3d)成功建立了免疫抑制小鼠模型。所用中药复方和黄芪多糖可显著提高免疫抑制模型小鼠WBC,其中以10和20g/kg剂量中药复方效果显著;10和20g/kg剂量中药复方可显著提高免疫抑制模型小鼠血清中IgG和IgM含量,提高或恢复免疫抑制模型小鼠血清中IL-2含量,并可促进免疫抑制模型小鼠血清IL-4和IFN-γ含量、IL-4/IFN-γ、红细胞C3b RR率恢复至健康小鼠水平;所用中药复方和黄芪多糖对免疫抑制模型小鼠红细胞ICR率的影响不明显。【结论】自拟中药复方通过调控细胞因子和免疫球蛋白生成,对环磷酰胺介导免疫抑制模型小鼠的细胞免疫、体液免疫和红细胞免疫黏附功能发挥正向调节作用,其中以10g/kg剂量效果明显。  相似文献   

9.
【目的】研究菝葜醇提物(SCE)的成分及对小鼠体内脂肪代谢酶的影响。【方法】采用HPLC等方法分析SCE的成分组成。将50只雌性ICR小鼠随机分成5组,分别为对照组、高脂组、高脂添加0.25%、0.50%、1.00%SCE。投喂8周后,解剖,摘取小鼠的肝脏及腹腔内脂肪(IPAT)并称量。测定小鼠肝脏中肉毒碱转移酶(CAT)、酰基辅酶A氧化酶(ACO)、脂肪酸合成酶及磷酸腺苷激活蛋白激酶(AMPK)活性及mRNA表达量。【结果】SCE中的总多酚、总黄酮、总三萜的含量分别为:(42.54±0.45)%、(29.69±0.37)%、(14.03±0.21)%,其中落新妇苷、黄杞苷、绿原酸、白藜芦醇的含量分别是(23.65±0.36)mg/g、(7.97±0.03)mg/g、(13.65±0.19)mg/g、(7.46±0.15)mg/g。与高脂组相比,SCE喂养小鼠的体质量及体质量增加显著降低,0.50%及1.00%SCE明显减少IPAT质量。0.50%以上SCE的CAT、ACO、AMPK活性与高脂组相比显著提高。SCE明显上调CAT、ACO、AMPK的mRNA表达量。【结论】SCE中富含酚酸类化合物,可通过激活AMPK,促进脂肪酸氧化,减少脂肪沉积和体质量增加。  相似文献   

10.
【目的】在脂多糖(LPS)致小鼠急性肺损伤(ALI)模型上评价龙胆苦苷抗急性肺损伤的活性。【方法】健康雄性成年SPF级昆明小鼠40只,随机分为4组:假手术组、ALI模型组(气管滴入脂多糖LPS 5 mg/kg)、阳性药物对照组(腹腔注射氢化可的松3.3 mg/kg,每日1次,连续3 d,24 h后气管滴入LPS 5 mg/kg)、龙胆苦苷组(腹腔注射龙胆苦苷20 mg/kg,每日1次,连续3 d,24 h后气管滴入LPS 5 mg/kg)。在气管滴入LPS后24 h处死动物,检测肺系数、支气管肺泡灌洗液(BALF)中炎症细胞计数和肺组织病理变化。【结果】阳性药物对照组和龙胆苦苷组小鼠肺系数明显低于ALI模型组(P0.05),阳性药物对照组和龙胆苦苷组比较差异无统计学意义。ALI模型组小鼠BALF中炎症细胞及中性粒细胞比例明显高于假手术组(P0.01),阳性药物对照组和龙胆苦苷组明显低于ALI模型组(P0.01),阳性药物对照组明显低于龙胆苦苷组(P0.05)。假手术组小鼠肺组织结构基本完整,肺泡腔内无渗出物和炎细胞,ALI模型组肺泡上皮细胞大量增生,肺泡壁增厚,肺间质、肺泡腔内可见大量炎细胞浸润,部分肺间质发生实变,阳性药物对照组和龙胆苦苷组肺组织炎症病理明显减轻。【结论】龙胆苦苷能够明显减轻脂多糖致ALI小鼠肺组织炎症反应程度,具有较好的抗急性肺损伤活性。  相似文献   

11.
寄生虫引起的草鱼鳃病的组织病理比较研究   总被引:8,自引:0,他引:8  
本文对草鱼的隐鞭虫病、车轮虫病、小瓜虫病、指环虫病、三代虫病及中华鱼蚤病六种寄生虫性鳃病的组织病理变化进行比较研究,寄生虫性鳃病均可引起鳃组织发生炎症反应,粘液分泌亢进,嗜酸粒细胞和淋巴细胞浸润;但又因病原体的种类不同,危害鱼的方式、方法不同,因此病理变化又有很大差别,对鱼危害较大的均为变质性炎,如隐鞭虫病;对鱼危害较小的则属增生性炎,如中华鱼蚤病.  相似文献   

12.
民勤绿洲荒漠交错带三种沙丘类型的自然植被特征   总被引:4,自引:1,他引:4  
基于对民勤沙井子地区植被调查数据,研究了固定沙丘、半固定沙丘和流动沙丘3种沙丘类型的自然植被特征.结果表明:从固定沙丘、半固定沙丘到流动沙丘,总盖度、灌木盖度下降,草本盖度增加.物种丰富度减小是物种多样性下降的主要原因.从植物的生活型来看,多年生草本和灌木类植物受沙丘类型的影响最大,而一年生草本和半灌木可存活于不同沙丘类型.白刺的生态优势度(重要值)由小到大依次为固定沙丘、半固定沙丘、流动沙丘.植物多样性与白刺的生态优势度呈负相关.不同沙丘类型白刺地上生物量变化明显,半固定沙丘白刺生物量最大.  相似文献   

13.
Biomass yields and concentrations of crude protein(CP), ether extract(EE), neutral detergent fiber(NDF), acid detergent fiber(ADF), and crude fiber(CF) were analyzed for five cultivars of summer-sown maize(Zea mays L.) stover grown in field trials at three rates of N fertilization, and sampled immediately after grain harvest.The results revealed differences in yields and concentrations of nutrients according to stalk height and hence harvest portion among the cultivars.N application greatly increased biomass yield and CP, especially in upper stalks and to a lesser extent, EE.Concentrations of NDF and ADF decreased as N rate increased.The results show that stovers from all local popular maize cultivars are suitable as animal fodder and that moderate N application improves feed quality of stover.  相似文献   

14.
葡萄盆栽技术,包括择土选种、露地扦插、田间管理、装盆及整形、肥水管理等内容,对葡萄盆栽爱好者有一定的指导意义。  相似文献   

15.
以敏感品系为对照,利用室内筛选获得的虫酰肼和阿维菌素高抗品系Teb-R和Aba-R,测定了小菜蛾对几种新型杀虫剂的交互抗性。结果发现:小菜蛾对虫酰肼产生高水平抗性后(抗性倍数185.5倍),对阿维菌素表现出中等水平交互抗性(41.0倍),对茚虫威(11.4倍)和溴虫腈(5.3倍)仅表现出低水平交互抗性,对多杀菌素(1.7倍)和氯虫苯甲酰胺(1.4倍)则没有表现出明显的交互抗性。用阿维菌素筛选Teb-R品系39代后获得阿维菌素高抗品系Aba-R(593.8倍),该品系对茚虫威(12.3倍)表现出中等水平交互抗性,对多杀菌素(7.9倍)表现出低水平交互抗性,对溴虫腈(2.7倍)和氯虫苯甲酰胺(0.9倍)的交互抗性不明显;同时该品系对虫酰肼的抗性也由阿维菌素筛选前的185.5倍下降到筛选后的28.0倍,也没有交互抗性。基于上述研究结果认为,使用虫酰肼防治小菜蛾出现抗性后,可以使用多杀菌素和氯虫苯甲酰胺进行替代防治,但不宜用阿维菌素、茚虫威和溴虫腈进行替代防治;利用阿维菌素防治小菜蛾产生抗性后,可以用溴虫腈、氯虫苯甲酰胺和虫酰肼进行替代防治,但不宜用多杀菌素和茚虫威。  相似文献   

16.
Water quality in China is becoming a severe challenge for agriculture and food safety,and it might also impact health of population via agriculture and food. Thus,it is causing widespread concern. Based on extensive literatures review and data mining,current situation of water pollution in China and its effects on food safety were analyzed. The 2nd National Water Resource Survey in China show that the surface water all over the country was under slight pollution and about 60% of groundwater is polluted. Drinking water quality is basically guaranteed in urban area but it is worrisome in rural areas. In addition,China is the largest consumer of fertilizer and pestici de in the world and the amounts of application still show increasing trends. Fertilizers and pesticides are the most important sources of pollution,which affect human health as persistent organic pollutants and environmental endocrine disruptors. Eutrophication of surface water and nitrate pollution of groundwater are serious threats to drinking water safety. Sewage irrigation is becoming a pollution source to China's water and land because of lacking of effective regulations. Although,with the advance in technology and management level,control of nitrogen and phosphorus emissions and reducing water pollution is still a major challenge for China.  相似文献   

17.
【目的】断根嫁接苗和打顶双干或多干嫁接苗日益广泛用于番茄栽培,丰产作用显著。了解断根与打顶对番茄嫁接愈合的作用机制,可为番茄嫁接生产提供理论依据。【方法】以‘硬粉8号’为接穗品种,‘砧爱1号’为砧木品种,观测断根和打顶后番茄嫁接愈合进程、成活率和木质部连通性等,同时测定嫁接接合部生长素和细胞分裂素的含量及愈合相关基因的表达。【结果】断根和打顶抑制了嫁接接合部上方木质部分化基因VND7的表达,并显著延迟了木质部的重构。断根显著降低了嫁接后12和72 h接合部玉米素核苷(tZR)和反式玉米素(tZ)的含量,以及嫁接后12 h接合部吲哚-3-乙酸(IAA),吲哚-3-乙酸甲酯(ME-IAA)和吲哚-3-甲醛(ICAld)的含量;打顶嫁接后12 h接合部IAA和ME-IAA含量显著低于对照和断根处理,下调了嫁接后3和12 h接合部上方和下方韧皮部分化相关基因NEN4表达水平。断根或打顶均下调了嫁接后3—48 h接合部上方细胞分裂相关基因Histone H4SlcycB1-4的表达水平;断根和打顶同时处理使嫁接接合部IAA和ME-IAA含量显著低于断根处理,使tZR和tZ的含量及木质部连通性显著低于打顶处理。打顶和断根后分别在嫁接接合部施用10 mmol∙L-1 IAA和10 mmol∙L-1 6-BA可显著促进嫁接苗木质部的重构。【结论】断根和打顶分别降低接合部细胞分裂素和生长素积累,下调愈合相关基因表达,降低木质部输导能力,进而延缓番茄嫁接愈合进程。  相似文献   

18.
鱼池水中钾钠的火焰原子发射光谱分析   总被引:1,自引:0,他引:1  
本文研究了用火焰原子发射光谱法分析鱼池水中钾钠的方法。对方法精密度、回收率和共存元素的干扰进行了考察。建立了最佳测试条件。表明本方法简易、快速、准确。它亦适用对天然水中钾钠的测定。  相似文献   

19.
本试验通过盆栽大蒜探讨土壤施硒、锌、锰、铜对大蒜吸收这些元素以及这些元素之间的相互影响。结果表明,随着土壤施硒量的增加,土壤中硒的有效含量增加,大蒜地上部和地下部含硒量也增加;土壤施锌、锰、铜对大蒜吸收硒几乎没有影响;而硒会明显地抑制大蒜对锌元素的吸收,对锰、铜的吸收虽有抑制但只在地下部明显,因此,土壤施硒的量一定要合适。  相似文献   

20.
离子铵和非离子氨对海蜇螅状幼体和碟状幼体的毒性研究   总被引:14,自引:2,他引:14  
在温度(20±1)℃,盐度22 ̄24‰条件下,对海蜇螅状幼体和碟状幼体进行了pH适应性试验和不同pH下氨氮的急性毒性试验,结果表明:适合海蜇螅状幼体和碟状幼体生活的pH范围为7 ̄9,最适pH范围为7.5 ̄8.5,在此pH范围内,不仅非离子氨具有毒性,离子铵在浓度高时亦具有毒性。对于螅状幼体,此毒性倍数约为117 ̄220。  相似文献   

设为首页 | 免责声明 | 关于勤云 | 加入收藏

Copyright©北京勤云科技发展有限公司  京ICP备09084417号