V型小麦细胞质雄性不育“三系”及杂交种线粒体DNA的比较研究

以V型小麦细胞质雄性不育系及相应的保持系、恢复系以及其杂种F1为材料,用ISSR、SRAP、RAPD分子标记技术对它们的线粒体DNA进行了比较分析。结果如下:(1)153个SRAP引物组合中139个组合扩增出了多态性,9个组合扩增出不育系特有而保持系、恢复系、F1均缺失的片段,3个组合扩增出不育系特异缺失的片段。(2)92个ISSR引物中45个扩增出了多态性,筛选到了6个不育系特有而保持系、恢复系及杂种F1均缺失的片段。(3)288个RAPD引物中281个扩增出了多态性,4个引物扩增出不育系特有的片段,3个引物扩增出不育系特异缺失的片段。在对线粒体DNA进行分析时,SRAP比ISSR多态性好,比RAPD稳定性好。     

梨栽培品种荧光AFLP分析

利用荧光AFLP技术,对梨属6个栽培种84个品种进行研究.从64对引物组合中筛选出9对用于选择性扩增,共获得859条带,其中多态性带795条,多态性为92.5%,平均每对引物组合产生95条带.扩增结果显示,9对引物组合在16个品种中扩增出23条特征带;每对引物组合均能将所有品种鉴别开,表明荧光AFLP技术用于梨品种鉴定的效率很高.通过聚类,从分子水平对梨品种的亲缘关系进行分析,为梨属植物的分类、品种鉴定和亲缘关系分析提供了分子水平的依据.     

99B×海岛棉杂种2代的mtDNA RAPD分析

[目的]为mtDNA-RAPD技术检测杂种后代的纯度的可行性提供参考,为引物组合法广泛应用于植物纯度检测、遗传多样性分析提供依据。[方法]应用6对随机单引物和引物组合对99B和海岛棉及其F2代的mt DNA进行RAPD扩增并进行多态性分析。[结果]应用单引物对F2代mtDNA进行RAPD检测多态性分析,从6个单引物RAPD-PCR扩增得到了3个差异株,结果表明该群体的纯度为95%,应用引物组合扩增多态性分析表明,从15对引物RAPD-PCR扩增检测到4个差异株,该群体的纯度为93%。表明引物组合扩增多态性分析具有准确性高、精确性好的优点,也表明在植物种质纯度检测中引物组合法的优势及利用价值。[结论]mtDNA的多态性检测具有很好应用价值和应用前景。     

SRAP用于粳稻DNA指纹图谱绘制的研究

以粳稻为材料,研究了粳稻SRAP-PCR分析的影响因素,建立了适于粳稻SRAP分析的PCR反应体系及适宜的扩增程序.并应用优化的SRAP-PCR体系对60对引物进行了筛选.从这60对引物中得到有多态性条带的引物组合32对.共得到237清晰条带,其中多态性条带92条,平均每对引物组合产生2.875条.引物组合能鉴别出的品种数为0～6个.结合Me1-Em3, Me1-Em5, Me1-Em8, Me2-Em2, Me2-Em5, Me2-Em7,六对引物对再组合的扩增结果可鉴别出全部18个材料.     

马铃薯EcoRⅠ/MseⅠ内切酶组合AFLP反应体系的优化与引物筛选

以2个马铃薯品种为材料,对AFLP反应过程中的关键因素(DNA浓度、酶切体系、扩增体系等)进行了优化,旨在建立适合马铃薯的EcoRⅠ/MseⅠ内切酶组合的AFLP反应体系和筛选扩增条带丰富的引物。结果发现,优化的马铃薯AFLP反应体系为37℃酶切4 h,37℃连接4 h,连接产物稀释10倍用于预扩增,预扩增产物稀释30倍用于选择性扩增。利用建立的优化反应体系,以10个甘肃省主栽马铃薯品种为材料,从256对引物组合中筛选出24对扩增条带多、条带清晰、多态性好的引物组合。     

高邮鸭青色蛋壳性状荧光AFLP标记的建立

应用荧光扩增片段长度多态性（AFLP）标记技术对高邮鸭4个高度纯合的分离体分组混合家系蛋壳颜色性状进行了遗传多样性分析。在高邮鸭分离体分组混合家系AFLP指纹研究中,对AFLP技术中选择性扩增中的引物使用荧光标记代替同位素标记,并对AFLP反应进行了优化。在AFLP分析中,共采用了64个EcoRI／MseI引物组合,每个引物组合扩增出的条带数在40条以上。结果表明：从这64个引物组合中筛选到1个引物组合E-ACT／M—CTC,能同时将供试的4个分离体分组混合家系分开,从而可用于早期青壳性状的鉴定。     

甜瓜作图亲本相关序列扩增的多态性分析

以中国甜瓜地方品种自交系4G21(香瓜)和3A832(哈密瓜)为作图亲本,利用SRAP(Se-quence-relatedAmplifiedPolymorphism)分析了甜瓜作图亲本的多态性,结果表明:在184个SRAP引物组合中有176个扩增出多态性条带,不同引物组合扩增的多态性条带的变异幅度在1～15之间,共扩增出614个,平均每个引物组合扩增出3.34个,说明SRAP标记揭示甜瓜作图亲本多态性的效率很高。     

99B×海岛棉杂种2代的mtDNA RAPD分析

[目的]为mtDNA-RAPD技术检测杂种后代的纯度的可行性提供参考，为引物组合法广泛应用于植物纯度检测、遗传多样性分析提供依据。[方法]应用6对随机单引物和引物组合对99B和海岛棉及其F2代的mtDNA进行RAPD扩增并进行多态性分析。[结果]应用单引物对F2代mtDNA进行RAPD检测多态性分析，从6个单引物RAPD-PCR扩增得到了3个差异株，结果表明该群体的纯度为95％，应用引物组合扩增多态性分析表明，从15对引物RAPD-PCR扩增检测到4个差异株，该群体的纯度为93％。表明引物组合扩增多态性分析具有准确性高、精确性好的优点，也表明在植物种质纯度检测中引物组合法的优势及利用价值。[结论]mtDNA的多态性检测具有很好应用价值和应用前景。     

辽宁绒山羊随机扩增多态DNA的研究

利用随机扩增多态DNA(RAPD)技术对辽宁绒山羊的遗传变异进行了分析.用37个随机引物和55个两两组合的随机引物组合进行筛选,筛选出了5个多态性较为丰富的随机引物(组合).用这5个随机引物(组合)对35个个体进行扩增,据它们的RAPD指纹图计算了遗传变异度(0.2475).     

部分柿属植物TRAP标记反应体系的建立与引物筛选

为了建立柿属植物目标区域扩增多态性(TRAP)标记技术体系,对影响TRAP-PCR的Mg2+、dNTPs、Taq DNA聚合酶、固定引物和随机引物浓度比5个因素进行了优化。确定优化的反应体系为:模板DNA 40 ng,buffer 1×,Mg2+1.4 mmol/L,dNTPs 0.2 mmol/L,固定引物和随机引物浓度比为11∶1,Taq酶0.5 U,反应总体积为15μL。利用柿属植物EST数据库信息设计锚定引物10条,与11条随机引物组合共110对引物。利用这些引物对柿属植物6个基因型进行TRAP-PCR扩增,其中84个引物组合能扩增出清晰条带,占引物总量的76.36%;36个引物组合表现出良好的多态性扩增,并在20份柿属植物中进行了引物验证。