丝光绿蝇幼虫血淋巴中抗菌物质的抑菌活性

观察丝光绿蝇(Lucilia sericata)三龄幼虫经针刺体壁诱导48 h后的血淋巴在不同pH琼脂平板上对溶壁微球菌(Micrococcus lysodeiktic us)和金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的抑菌效果,以及经不同pH缓冲液处理后对溶壁微球菌的抑菌效果.结果表明,丝光绿蝇幼虫经针刺诱导后48 h的血淋巴在pH 6.0、6.5的琼脂平板上对金黄色葡萄球菌的抑菌环较大较清晰,随pH增加抑菌环直径减小.在piH 6.0时,对溶壁微球菌的抑菌环直径最大,随pH增加抑菌环直径减小.用pH 6.0的缓冲液稀释处理血淋巴时,对溶壁微球菌的抑菌环最大,用pH 9.0缓冲液稀释后对溶壁微球菌的抑菌环最小.说明丝光绿蝇幼虫经针刺体壁诱导产生的抗菌物质在酸性条件下比在碱性条件下具有更强的抑菌活性.     

丝瓜汁抗菌效果的研究

以生活中常见的黑曲霉(Aspergillus niger)为试验菌,提取丝瓜(Luffa cylindrica)汁作为抑菌物质,考察不同浓度的丝瓜汁对黑曲霉的抑菌效果.结果表明,当丝瓜汁浓度为0.01 g/mL、温度为25～35℃时为部分抑菌,温度为45℃时为完全抑菌;浓度低于0.001 g/mL、温度为25～45℃时完全不抑菌.     

稻蝗抗菌肽的诱导和粗提物活性研究

近年来,昆虫抗菌肽的研究逐渐成为昆虫免疫学及分子生物学研究的热点之一,它可为抗菌和抗肿瘤新药的开发提供新的来源。本文对稻蝗(Oxyachinensis)幼虫进行了紫外照射、超声波、针刺、菌液注射的处理,发现E.coli注射诱导产生的抗菌物质活性明显;通过对不同指示菌做抑菌测定,结果显示稻蝗抗菌肽仅抗革兰氏阳性菌;经高温处理、酸性处理,表明此抗菌物质为一种热稳定的碱性抗菌多肽。     

家蝇蝇蛆耐高温抗氧化多肽的筛选及性质分析

将家蝇(Musca domestica)蝇蛆进行不同高温的水浴处理,测量蝇蛆抗氧化性的变化。结果显示,50℃处理抗氧化活力变化不显著,80、100℃处理短时间内出现显著下降,但残留的抗氧化活力在随后的高温中保持稳定,提示家蝇蝇蛆存在耐高温抗氧化物质。将蝇蛆提取液在100℃处理不同时间以筛选耐高温抗氧化物质,结果表明,经100℃处理5 min筛选到的抗氧化物质在50、80、100℃保温5 h,甚至在120℃超高温条件下保温30 min,其抗氧化活力均保持稳定。SDS-PAGE电泳结合三氯乙酸沉淀反应结果证明,该物质为分子量约为30 ku的多肽。     

巯基乙醇在家蝇幼虫血淋巴中适宜添加量研究

[目的]为家蝇幼虫血淋巴抗菌活性物质的分离、纯化提供依据。[方法]以大肠杆菌为指示菌,利用琼脂糖孔穴扩散法研究巯基乙醇对家蝇幼虫血淋巴抑菌活性的影响,确定巯基乙醇作为抗氧化剂在家蝇幼虫血淋巴中的适宜添加量。[结果]巯基乙醇能抑制大肠杆菌的生长,抑菌效果随其浓度的增加更为明显。当巯基乙醇体积浓度≤10-6时,其对大肠杆菌无抑菌效果,说明巯基乙醇的最大非抑菌体积浓度为10-6。体积浓度为10-6的巯基乙醇可有效保护浓度小于或等于1∶5的家蝇幼虫血淋巴悬液不被氧化,且其对大肠杆菌的抑菌效果不受影响。[结论]巯基乙醇在家蝇幼虫血淋巴中的适宜加入量应根据试验中具体情况确定。     

枯草杆菌诱导家蝇幼虫产生抗菌物质的研究

[目的]探究枯草杆菌诱导家蝇幼虫产生抗菌物质。[方法]研究枯草杆菌诱导的家蝇幼虫提取物的抗菌活性及其对温度、酸碱、离子强度的稳定性。[结果]枯草杆菌诱导的家蝇幼虫提取物对6种病原菌和工程菌大肠杆菌JM109均有抑制作用,其中对革兰氏阳性菌的抑制作用更强,诱导组的抗菌活性优于未诱导组。枯草杆菌诱导家蝇产生抗菌物质的具有很好的温度稳定性,在pH值4~10范围内都有较高的活性,但随着离子强度的升高抗菌活性下降。[结论]该研究为抗菌物质应用于饲料提供理论依据。     

大肠杆菌感染对家蝇幼虫ACP、POD活性的影响

观察家蝇(Musca domestica)三龄幼虫针刺感染大肠杆菌(Escherichia coli)后4、8、12、16 h血清和血细胞中酸性磷酸酶(ACP)、过氧化物酶(POD)活性的变化。结果表明,大肠杆菌感染后各时间组家蝇三龄幼虫血清和血细胞中ACP活性显著高于对照组(P﹤0.01)。其中血清和血细胞中ACP活性分别在感染8 h、4 h达高峰,然后逐渐下降;大肠杆菌感染后各时间组家蝇三龄幼虫血清和血细胞中POD活性显著高于对照组(P﹤0.01)。其中血清和血细胞中POD活性分别在感染12 h、8 h达高峰,然后逐渐下降。大肠杆菌感染后家蝇三龄幼虫血清和血细胞中ACP、POD活性均增强,提示这两种酶在防御微生物感染过程中发挥了重要作用。     

板栗壳抑菌物质提取工艺的优化

采用单因素和正交试验探讨板栗壳抑菌物质的最佳提取工艺,并研究板栗壳抑菌物质的体外抗菌作用以及pH值和温度对其抗菌活性的影响.结果表明:板栗壳抑菌物质的最佳提取工艺为提取溶剂为乙酸乙酯,浸提时间4.0 h,提取温度70℃,料液比1∶30;提取物对大肠杆菌、金色葡萄球菌、枯草杆菌均具有抑菌效果;最低抑菌浓度分别0.125、0.0625、0.125 mg/mL;最小杀菌浓度分别为0.125、0.125、0.25 mg/mL.抗菌活性有较强的热稳定性,能耐短时的高温处理,在pH值7～9的范围具有较强的抗菌活性.     

链球菌诱导后家蝇幼虫提取物的抗菌活性研究

[目的]为枯草杆菌诱导后的家蝇幼虫提取物在饲料中的应用提供依据。[方法]采用抑菌圈测量法测定链球菌诱导后家蝇幼虫提取物的抗菌活性,分析其对温度、酸碱和离子强度稳定性的影响。[结果]链球菌诱导的家蝇幼虫提取物对细菌的抑菌圈直径为6.55~11.01 mm。诱导组中家蝇幼虫提取物对6种病原菌和工程菌大肠杆菌JM109均有抑制作用,其对革兰氏阳性菌的抑制作用较强。而未诱导组提取物对细菌的抑菌圈直径为6.01~8.01 mm,诱导组的抗菌活性高于未诱导组。抗菌肽样品具有较好的温度稳定性。当pH值为4~10时,抗菌肽样品的抗菌活性均较高,以pH值为8时最高。抗菌肽样品的抗菌活性随离子强度的升高而下降。[结论]抗菌肽的抑菌活性受环境离子强度的影响,与其作用机理有关。     

哈茨木霉T2菌株提取物对齐整小核菌抑菌活性的测定

采用甲醇法、乙醇法、超声波水法、碱法等4种方法对哈茨木霉菌(Trichoderma harzianum)T2菌株分生孢子中的抗菌物质进行了提取,并测定了各种粗提物对齐整小核菌(Sclerotium rolfsii)的抑菌活性及温度对粗提物抑菌活性的影响.结果表明,用不同方法提取的哈茨木霉T2菌株粗提物对齐整小核菌有不同程度的抑制效果,其中以超声波水法提取物对齐整小核菌的抑制效果较好,温度对粗提物的抑菌活性有明显的影响.     

不同培养基和储存条件对家蝇幼虫分泌物中溶菌酶含量的影响

[目的]了解不同培养基和储存条件对家蝇幼虫分泌物中溶菌酶含量的影响。[方法]分别以猪粪和鸡粪为培养基饲养家蝇幼虫,分别为猪粪处理组和鸡粪处理组,用麦麸饲养幼虫为正常对照组,麦麸中添加大肠杆菌菌液饲养幼虫为诱导对照组,分别提取各组2龄和3龄家蝇幼虫的分泌物,使用试剂盒检测分泌物中溶菌酶含量;分别提取正常对照组和诱导对照组中3龄幼虫的分泌物,测定在室温、4℃和-20℃下不同时间溶菌酶含量的变化。[结果]猪粪处理组、鸡粪处理组、正常对照组和诱导对照组中分离的3龄幼虫分泌物中溶菌酶的平均含量分别为2.462、2.782、1.019、2.117μg/m L,均显著高于2龄幼虫(P0.05)。猪粪处理组、鸡粪处理组和诱导对照组2龄和3龄幼虫分泌物的溶菌酶含量均高于正常对照组(P0.05)。在室温下,正常对照组和诱导对照组中溶菌酶的活性均仅能维持14 d左右;在-20℃下,溶菌酶的活性均可维持70 d左右;在4℃下,正常对照组和诱导对照组中溶菌酶活性的维持时间介于室温和-20℃之间,且2组间溶菌酶含量随时间的变化规律有一定差异。[结论]3龄蝇蛆分泌物中溶菌酶含量高于2龄蝇蛆;鸡粪培养基和猪粪培养基能显著增强家蝇2龄和3龄幼虫分泌物中溶菌酶含量;在-20℃储存条件下,家蝇溶菌酶可在较长时间内保持较高的活性。     

合浦珠母贝抗菌肽粗提液制备方法的优化

研究了不同处理方法制备合浦珠母贝外套膜和鳃组织抗菌肽粗提液的抗菌活性,结果表明：以1.0×106cfu·mL^-1无乳链球菌刺激合浦珠母贝14 h以内对其粗提液抗菌活性无显著影响;合浦珠母贝外套膜或鳃组织抗菌肽粗提液制备时,IKAT-18匀浆机的匀浆效果要优于组织匀浆器和研钵。100℃水浴处理组织粗提液10 m in可显著提高其对溶藻弧菌的抗菌活性;反复冻融则会显著降低外套膜组织粗提液的抗菌效果。     

粗糙脉孢菌GH45家族内切纤维素酶基因ncGH45在毕赤酵母中表达及重组酶的性质表征

纤维素酶作为一种重要的糖苷水解酶,在生物质能源生产、饲料、造纸、洗涤和纺织领域都有着非常广泛的应用。粗糙脉孢菌来源的GH45家族内切纤维素酶基因(nc GH45)全长935 bp,包含一个53 bp的内含子(339-391),编码272个氨基酸,包括一个N-端的GH45家族催化结构域和C-端的1家族碳水化合物结合结构域。该基因在毕赤酵母中得到了分泌表达,且表达蛋白条带单一,酶活性达到20 U/m L。重组酶r Nc GH45的最适p H为4.5~5.0,最适温度为60~65℃,并且在较宽的p H范围(p H 4.0~8.0)和温度范围(30~70℃)都能维持75%以上的酶活。在37℃和50℃,p H 3.0~11.0都有着非常好的稳定性;该酶的热稳定性非常好,在70℃和80℃处理2 h还能剩余89.6%和77.7%的酶活,即使在沸水中煮10 min还能剩余10%的酶活。r Nc GH45的最适底物是地衣多糖(1 116.0 U/mg),其次是大麦葡聚糖(754.2 U/mg)和CMC-Na(254.6 U/mg),对大麦葡聚糖和CMC-Na的动力学常数Km和Vmax分别为6.26 mg/m L和997.4μmol/mg·min,19.96 mg/m L和722.1μmol/mg·min。水解产物分析结果表明,r Nc GH45对多糖的水解产物主要是纤维五糖,对寡糖的最小作用底物是纤维三糖,而对纤维二糖没有作用。对纺织品脱毛实验的结果表明,酶的添加量为10 U时,减量率为1.55%。上述结果表明成功构建了r Nc GH45高效表达工程菌株,表达的重组蛋白性质优越,有着良好的工业应用前景。     

热应激诱导奶牛乳腺上皮细胞凋亡及其对HSP70基因表达的影响

为探讨热应激对乳腺上皮细胞凋亡的影响,以体外培养的奶牛乳腺上皮细胞为模型,取对数生长期的乳腺上皮细胞分别置于39℃和41℃热处理1 h(以37℃正常培养的细胞为对照),在37℃恢复培养0、6、12 h后收集细胞,采用MTT法检测细胞生长抑制率,Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡,比色法分析Caspase-3活性,荧光定量PCR检测HSP70基因的表达水平。结果表明,39℃热应激组细胞生长抑制率和死亡率高峰期均发生在热修复6 h,细胞死亡率为15.42%,而41℃热应激组发生在热修复12 h,细胞死亡率高达23.18%;高温处理后,Caspase-3活性呈上升趋势;39℃热应激组在热恢复6 h,HSP70基因表达量显著高于对照组,41℃热应激组在热恢复0、6、12 h,HSP70基因的表达量分别为对照组的3.53倍、5.61倍和2.93倍。综上可知,高温应激激活了Caspase-3活性,从而诱导乳腺上皮细胞凋亡,并随高温强度的增加而作用增强,同时高温诱导了HSP70基因过表达,协助细胞获得热耐受性。     

家蝇幼虫提取物的抗菌活性

利用抑菌圈测量法研究家蝇幼虫提取物的抗菌活性,并且利用蛋白酶K水解和毛细管电泳对提取物中抗菌成分进行初步鉴定.结果表明,家蝇幼虫提取物对6种病原菌和工程菌大肠杆菌JM109均有抑制作用,其中对革兰氏阳性菌的抑制作用更强,诱导组的抗菌活性优于未诱导组;毛细管电泳显示志贺氏菌诱导的家蝇幼虫有56个新的主峰.因此,诱导组的高抗菌活性主要是由于昆虫体内诱导产生的肽类,组成性的蛋白性质的酶类,如溶菌酶对其抗菌活性有一些次要的贡献.     

淡色生赤壳菌YLZ42发酵液稳定性及活性物质的初步研究

从广西玉林土壤中分离获得一株淡色生赤壳菌YLZ42,其发酵产物对蜡样芽孢杆菌等具有良好的抑制作用。以蜡样芽孢杆菌为指示菌对该菌株发酵产物的活性特性进行了研究,结果表明该菌发酵液的抑菌活性在40~60℃温度范围内比较稳定,60℃加热1 h,活性损失小于7%;在p H 2~7范围内抑菌活性稳定,p H大于7时,活性损失较大,在p H 8条件下处理12 h活性损失已达到64%;发酵液适宜在酸性条件下保存,p H 4的发酵液放置15 d后活性损失小于5%;活性物质对紫外线不敏感,经紫外照射24 h后抑菌活性基本不变。然后采用萃取、薄层制备、HPLC制备等提取分离方法得到了抑菌活性物质的纯品,分子量为513,与相关文献中报道的活性代谢产物的分子量均不同。     

蝇蛆壳聚糖制备工艺的研究

[目的]采用碱液法对蝇蛆壳聚糖的制备技术进行研究,探索最佳工艺条件。[方法]以蝇蛆壳聚糖脱乙酰度及黏均分子量为评价指标,优化制备参数。[结果]由蝇蛆甲壳素制备壳聚糖的最佳工艺为：碱浓度60%、温度100℃、时间10h。[结论]在此工艺下,可制得高脱乙酰度、高黏度、色泽洁白的蝇蛆壳聚糖。